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HSP70多肽复合物修饰DCs疫苗抗胰腺癌荷瘤小鼠的实验研究
目的:探讨负载热休克蛋白70多肽复合物(HSP70-PC)抗原的树突状细胞(DCs)疫苗对胰腺癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用.方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PC,修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DCs),制备树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,用MTT法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中HSP70-PC致敏DC对CTL的增殖及活化效果;建立MPC83荷瘤小鼠模型,观察树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗对荷瘤小鼠治疗的效果和小鼠存活期.结果:经上述方法分离、纯化获得了较高纯度的HSP70-PC蛋白质;HSP70-PC在1.5～2.0 μg/ml范围内可达到刺激树突状细胞强效果,用HSP70-PC修饰的DCs能增强T细胞的增殖和活化能力;应用树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期.结论:采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物,其修饰的DCs疫苗用于荷瘤小鼠免疫治疗有显著疗效,为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础.
关键词： 胰腺癌 热休克蛋白70多肽复合物 树突状细胞 肿瘤免疫 -
HSP70多肽复合物修饰树突细胞抗胰腺癌研究
目的:研究肿瘤热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物修饰树突状细胞激活淋巴细胞治疗胰腺癌的策略和方法.方法:采用低渗裂解,ConA-Sepharose亲和层析柱及ADP-Agarose亲和层析柱,从小鼠胰腺癌(MPC83)瘤块中纯化HSP70多肽复合物;纯化出的70KD蛋白修饰小鼠骨髓来源诱导树突细胞(DC)并制备树突细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,MTT法检测修饰后DC增殖活性;用修饰后DC激活小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测激活淋巴细胞在不同效靶比下对MPC83的体外杀伤活性.结果:获得较高纯度分子量为70 kD左右的蛋白质;50～100ng HSP70多肽复合物可修饰104树突细胞,每克瘤块能获取HSP70多肽复合物约100μg;来自MPC83细胞瘤块HSP70多肽复合物激活的淋巴细胞能特异性杀伤MPC83细胞.结论:采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物,HSP多肽复合物DC疫苗用于胰腺癌细胞免疫治疗能获得体外杀伤效果,为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础.
关键词： 胰腺癌 热休克蛋白70多肽复合物 蛋白质纯化 树突状细胞 -
人肺腺癌GLC-82细胞热休克蛋白70多肽复合物的提取及对细胞毒性T淋巴细胞作用的实验研究
目的探讨GLC-82细胞中HAC-70的提纯方法及其诱导的CTL表型变化和CTL及其上清液抗瘤效应.方法 GLC-82细胞热休克诱导HSP表达,离子交换层析提纯HAC-70,SDS-PAGE和ELISA法进行定量和定性检测,活化PBMC,T淋巴细胞亚群试剂盒测定HAC-70诱导CTL细胞表型变化情况,MTT法测定CTL及上清液杀瘤活性.结果热休克处理能使GLC-82细胞HAC-70表达增加,离子交换层析可提纯GLC-82细胞中HAC-70.经热休克处理的HAC-70诱导T淋巴细胞,其CD3+、CD4+、CD8+细胞与对照组的CTL细胞阳性率明显提高,其诱导的CTL杀瘤活性显著提高,且其CTL培养上清液肿瘤杀伤活性高.结论离子交换层析可提纯GLC-82的HAC-70;HAC-70可使CTL细胞CD4+/CD8+倒置,活化的CTL及上清液有较高的杀瘤活性,为肺癌肿瘤疫苗的制备和临床应用提供了实验依据.
关键词： 肺腺癌 热休克蛋白70多肽复合物 细胞毒性T淋巴细胞
