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HSV-TK/HSV-sr39TK基因工程T细胞的研制
目的:制备慢病毒载体为基础的野生型及突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK/HSV-sr39TK)基因工程T细胞(TK+T及sr39TK+T细胞),观察给予前体药物丙氧鸟苷/无环鸟苷后小鼠T淋巴细胞对其敏感性及存活情况.方法:构建含HSV-TK/HSV-sr39TK及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子慢病毒载体;采用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,收集病毒上清感染刀豆蛋白刺激的小鼠T淋巴细胞,给予不同浓度的前体药物GCV/ACV,用Cell Counting Kit(CCK-8)等方法检测T细胞的存活率.结果:转染293T细胞后,病毒滴度达106/U/ml以上;含不同启动子的病毒载体转染效率CMV＞PUB＞PGK,对小鼠T淋巴细胞的感染效率以CMV启动子高;IC50值的测定显示sr39TK+T细胞对GCV和ACV的敏感性较TK+T细胞分别提高约2.5和17.4倍; ACV及GCV浓度在1～10 μmol/L sr39TK+T细胞活率下降为明显,ACV组细胞存活率由(98.4±2.7)%下降为 (49.9±5.9)%,GCV组由(97.9%±2.7)%下降为(33.7±5.3)%,P＜0.05,随ACV及GCV浓度的增加,细胞活率下降趋势有所减弱;TK+T细胞对GCV敏感,细胞活率由(97.9±2.7)%下降为(38.4±5.5)%,(P＜0.05),对ACV不敏感,细胞活率由(98.4±2.7)%下降为(73.8±7.4)%,P＞0.05.结论:成功构建了HSV-TK/HSV-sr39TK基因工程T细胞,不同启动子对慢病毒载体在293T细胞的转染效率、转导自杀基因在T淋巴细胞内的表达均有影响;HSV-sr39TK+T细胞对GCV和ACV的敏感性高于TK+T细胞.
关键词： 单纯疱疹病毒胸苷激酶 突变型 野生型 基因工程T细胞 慢病毒载体 -
基因工程T细胞的临床研究进展
尽管手术和放化疗等传统治疗手段在肿瘤治疗方面取得了很大进展，但在改善肿瘤患者预后和生存等方面仍不令人满意。近年来，肿瘤免疫治疗领域发展迅速，出现了多种效果良好的免疫治疗药物和技术［1-6］。免疫治疗已经成为肿瘤综合治疗的重要手段，甚至在不久后有可能成为肿瘤治疗的主要手段。在这些免疫治疗新技术中，基因工程T细胞的发展尤为令人瞩目［7］。多项临床研究［8-11］显示，基因工程T 细胞能够有效清除机体内恶性细胞，甚至能够长期缓解病情。该文将介绍基因工程T细胞的临床研究进展，并探讨该领域在中国的发展。
