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抗突变型瓜氨酸波形蛋白与类风湿关节炎活动性相关分析
类风湿关节炎(RA )是一种累及多关节、甚至内脏器官的一种慢性自身免疫病,其发病率为0.5%~1%[1]。在过去对R A的研究中,临床表现和类风湿因子(RF )始终是诊断 RA必不可少的条件,但随着对RA和RF研究的深入,发现RF虽然敏感性高,但特异性差[2],且相当部分 RA 临床表现不典型,给广大风湿科医师诊断带来了不小麻烦。因此,2009年美国风湿病学会(ACR )联合欧洲抗风湿病联盟(EULAR)不仅提出了RA新的诊断标准,并要求重视抗环瓜氨酸肽蛋白抗体(A C‐PA )在RA 诊断中的作用[3]。作为 ACPA 的典型代表,抗突变型瓜氨酸波形蛋白(M C V )和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体在RA诊断中(尤其早期RA )特异性相当[4],但前者敏感性更高,与 RF相当。可能原因是 CCP 为人工合成,其相对分子质量比MCV小20倍,仅有1~2个抗原决定簇,而MCV具有45个可被瓜氨酸化的潜在抗原凹位。不仅如此,已有研究显示RF、抗CCP抗体与 RA 病情活动性指标DAS28[5][根据触痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率(ES R )、患者自我症状等评分评价RA活动性的有效指标]具有一定相关性[6],但很少有研究显示MCV与RA活跃性的关系。因此本研究旨在通过 M C V 与28个关节疾病活动指数(DAS28)关系的研究,探讨MCV 在 RA活跃性中的作用,为广大专科医师判断RA活跃性方面提供一条可行的途径。
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恶性疟原虫与耐药性相关分子遗传标记的研究进展
长期以来抗疟药在全球的广泛使用导致恶性疟原虫已普遍对氯喹等传统药物产生耐受性,并对青蒿素类药物造成潜在威胁.随着在基因水平上对疟疾抗药性的深入研究,分子遗传标记已广泛应用于恶性疟耐药性和控制疾病的监测.本文就常见抗疟药的主要作用机制、相关分子标记及其多态性特征的研究进展作一综述.
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非小细胞肺癌耐药相关蛋白与端粒酶逆转录酶、凋亡相关基因蛋白的关系
在前列腺癌、神经母细胞瘤及消化系统肿瘤中均已证实人端粒酶逆转录酶(hTERT)与化疗疗效有关.随着对细胞凋亡研究的深入,人们认识到细胞凋亡是肿瘤细胞在接受各种抗肿瘤药物后的死亡机制,它的抑制可能是带有更普遍性的耐药机制.本研究中我们探讨未治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)中端粒酶hTERT mRNA、细胞凋亡基因产物突变型p53、bcl-2蛋白的表达与多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)的关系及意义.
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胃癌淋巴结增生与p53、nm23基因表达关系的研究
肿瘤抑制基因p53的突变是人们研究较深入的基因,突变型p53促进细胞的转化[1] .nm23基因的存在缺失、扩增和突变,与肿瘤的转移有关[2] .我们对87例胃癌采用免疫组化方法,观察胃癌淋巴结反应性增生和癌转移与p53、nm23基因表达的关系.
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小鼠野生型和突变型透明质酸受体RHAMM的抗血清制备及其初步应用
目前,小鼠第11号染色体的 RHAMM(Receptor of Hyaluronic Acid Mediated Motility)基因的研究多限于体外或啮齿类动物实验系统,有关该基因在人癌组织中的表达形式及其肿瘤生物学意义仍所知甚少.利用多种分子生物学技术,制备针对RHAMM 的生物/免疫试剂将会推动这方面研究的进展.
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P-gp对树突状细胞从皮肤迁移至引流淋巴结的影响
细胞膜P-糖蛋白(P-gp,P-glycoprotein)是多药耐药(mdr)基因表达产物,广泛分布在各种排泄器官包括肠道、肝、肾等上皮细胞,脑及胎盘血管内皮细胞、造血干细胞及外周血细胞的细胞膜上.人类mdr1基因,小鼠mdr1a基因表达产物与多药耐药有关.目前,有关P-gp的研究多集中在肿瘤化学治疗的药物抵抗方面,对其在免疫调节中的作用还不清楚.本文用FVB(H-2q)野生型(FVB/N)与FVB mdr1a敲除(mdr1a-/-)突变型小鼠,探讨P-gp对树突状细胞(DC)从皮肤向引流淋巴结迁移的影响.
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拉米夫定疗程中YMDD变异前后血清IL-12和TH1/TH2型细胞因子变化及意义
拉米夫定疗程中出现HBV变异的慢性乙型肝炎患者20例,HBV DNA阳性,治疗前HBeAg均阳性,给予拉米夫定100mg/d,分别检测治疗前、治疗3个月、治疗6个月、治疗9个月、治疗12个月等5个时相点血清HBV DNA水平,在HBV DNA转阴的基础条件下,如果某时相点出现了HBV DNA反跳,则认为在该时相点发生了YMDD变异.健康献血员作血清细胞因子水平健康对照.采用ELISA法检测5个时相点及健康献血员血清IL-12、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平,检测结果以pg/ml为单位.计算与健康对照校对后的IFN-γ/IL-4比值作为TH平衡指标(健康对照为1).核酸扩增荧光检测乙型肝炎病毒YMDD突变型.t检验进行统计分析.
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大蒜素对动脉粥样硬化小鼠血脂代谢的影响
目的 探讨大蒜素对动脉粥样硬化模型小鼠血脂代谢以及动脉粥样硬化发展的影响.方法 小鼠分6组,分别为普通饮食组(G1、G2组)、高脂高胆固醇组(G3、G4组)和高脂高胆固醇/高糖组(G5、G6组),其中偶数组同时给予大蒜素灌胃处理.分别于小鼠3、5、7、11和15周龄,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(n=6),并同时取小鼠肝脏及主动脉进行形态学观察 (n=6).结果 高脂高胆固醇以及高脂高胆固醇/高糖喂养组小鼠较同龄普通饮食喂养组小鼠的血脂TC、TG、HDL-C和LDL-C水平明显增高,大蒜素处理组除HDL-C外,其他血生化指标均有不同程度的降低(如TC,G2/G1,42.40±2.57 vs. 45.40±6.72;G4/G3, 106.90±5.37 vs. 109.20±2.35;G6/G5, 115.45±1.27 vs. 121.76±5.12).大蒜素处理组小鼠肝脏和主动脉内膜病理学改变相对较轻.结论 大蒜素对于动脉粥样硬化模型小鼠的TC、TG、LDL-C水平均有一定程度的降低作用,而对HDL-C没有明显影响.对肝脏脂肪沉积以及主动脉动脉粥样硬化病变的发展均有一定程度的抑制作用.
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中药健脾康复方对大肠癌脾虚证患者K-ras和p53基因突变的抑制作用
目的:研究中药健脾康复方对大肠癌脾虚证患者K-ras和p53基因突变的抑制作用.方法:选择中晚期大肠癌患者45例,随机分为治疗组和对照组.治疗组30例,在对症支持治疗的基础上口服健脾康复方,每日1剂,对照组15例,只给予对症支持治疗,疗程为2 mo.观察治疗前后外周血K-ras基因突变率和血清突变型p53基因蛋白含量的变化.结果:治疗组患者外周血K-ras基因突变率治疗后为26.7%(8/30),较治疗前的73.3%(22/30)显著下降(P<0.05);治疗组患者血清突变型p53基因蛋白含量治疗后(0.82±0.24 ng/L)较治疗前(0.89±0.21 ng/L)显著下降(t=2.34,P<0.05).对照组以上两项指标治疗前后差异无显著意义.结论:中药健脾康复方具有抑制K-ras和p53基因突变的作用.
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直肠癌病理和分子生物特征与预后的多因素分析
目的:探讨直肠癌临床病理特征和生物学因素与预后的关系.方法:143例直肠癌患者,青年组31例,中年组60例,老年组52例,中高分化腺癌101例,其他42例,低于C期的67例,淋巴结转移31例,应用EnVision法分析切片P16ink4a、P53、PCNA和PKC-α的表达,单因素和多因素分析其对预后的影响.结果:各年龄组5 a生存率分别为56.5%,61.4%和59.4%.单因素分析,预后与病理类型(χ2=18.994,P=0.002)、淋巴结转移情况(χ2=13.311,P=0.021)、临床病理分期(χ2=17.075,P=0.004)及年龄(χ2=11.249,P=0.047)均有显著相关;与P16int4a的表达缺失(χ2=15.179,P=0.01)、突变型P53的过度表达(χ2=28.185,P<0.001)显著相关.COX模型分析显示,临床病理类型、病理分期、P16ink4a的表达缺失、突变型P53的过度表达是独立预后因素,P值分别为0.029,0.028,<0.001和<0.001,风险比分别为1.982,2.049,0.219和4.175.结论:直肠癌病理类型、病理分期和P16ink4a、P53是重要的预后指标,可以指导直肠癌患者术后个体化治疗.
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乙型肝炎病毒基因组结构与功能复杂性的认识
全世界有乙型肝炎病毒(HBV)感染者3.5亿人.对于HBV多年的研究已经积累了丰富的资料,但是,我们对于HBV基因组特性的认识远远没有穷尽,事实上还有许多方面需要进行探索.通过对特定慢性HBV感染者血清中不同的HBV病毒基因克隆序列的比较提出了HBV准种特点,使我们对于HBV基因组结构与功能的复杂性有了更为深入的了解.野生型病毒之间、野生型病毒与突变型病毒之间、突变型病毒之间的反式调节机制是各种类型的缺陷型HBV存在的重要条件和机制,也是HBV感染引起肝细胞癌(HCC)的重要的分子生物学机制.外周血中存在羧基末端截短的表面抗原中蛋白(MHBst)的编码基因,使我们对于HBV基因编码的反式激活蛋白的类型有了新的认识.通过对克隆的HBVDNA全长基因序列的比较,以及与其他地域所流行的HBV DNA序列之间的比较,发现了新型的开放读码框架(ORF),如前-X(pre-X)蛋白的编码基因和前-前-S(per-pre-S)蛋白的编码基因.长距离精确聚合酶链反应(LA-PCR)技术克隆的HBV DNA全长序列,是我国流行的adr亚型的HBVDNA全基因序列,代表了真正存在的HBV的基因全长序列,在HBV基因结构与功能的研究中,以及在抗HBV治疗疗效应答的研究中具有重要的理论和实际应用价值.
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抑癌基因p27Kip1及其Ser10突变体对HepG2细胞周期和增生的影响
目的:p27kip1氨基端第10号位置的丝氨酸(Ser10)磷酸化位点是该蛋白分子中重要的磷酸化位点,探讨人工诱变该位点丝氨酸为丙氨酸(S10A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增生的影响.同时比较野生型p27kip1和Ser10突变型p27kip1基因转染对肝癌细胞株HepG2细胞周期和增生的影响.方法:应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1质粒DNA瞬时转染HepG2细胞,免疫细胞化学检测p27kip1蛋白的表达和细胞内分布,流式细胞计数仪分析细胞周期变化.结果:野生型和突变p27kip1蛋白转基因后HepG2细胞均可以G0期阻滞,且突变型的阻滞作用强于野生型(P<0.05),细胞生长受到抑制.无血清培养96 h同步化于G0期,野生型和突变型p27kip1均分布于细胞核;而在20 mL/L血清继续培养8 h后野生型向细胞质转运而主要分布于细胞质,突变型仍然滞留于细胞核.结论:p27kip1的过度表达可明显抑制HepG2细胞的增生,p27kip1 Ser10酸化可能介导其细胞核外转运的重要分子机制.
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腺病毒增强转铁蛋白受体介导的针对突变型P53的大酶转染可促进肝癌细胞凋亡
目的:通过腺病毒增强的转铁蛋白受体介导法(AVET)将针对突变型p53(mtp53)的大酶(Maxizyme)基因转入肝癌细胞后篌对肝癌细胞凋亡的影响,探索AVET用于肝癌基因治疗的可行性,为肝癌的基因治疗探索一条新途径.方法:以带有mtp53基因的人肝癌细胞株MHCC97细胞为模型,用腺病毒增强转铁蛋白受体介导法将针对mtp53的pEGFP-Maxizyme基因和空载体pEGFP分别导入MHCC97细胞,荧光显微镜观察细胞转染情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mtp53 mRNA表达水平的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测转染后对细胞凋亡的影响.结果:转染后48h荧光显微镜下可见呈细胞形态的绿色荧光.收集细胞检测,实验组mtp53 mRNA表达水平与空载体组和空白对照组相比,基因扩增条带亮度明显减弱,mRNA表达水平下降(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的凋亡梯带(DNA Ladder);流式细胞仪分析显示细胞凋亡水平增高,凋亡指数22.95%,显著高于对照组的2.37%(P<0.05).结论:腺病毒增强转铁蛋白受体介导的基因转移系统可将pEGFP-Maxizyme有效的转染到肝癌细胞株MHCC97中,Maxizyme在细胞内成功的切割了mtp53 mRNA,促进了肝癌细胞的凋亡,这为腺病毒增强转铁蛋白受体介导法在肝癌基因治疗中的应用提供了实验依据,也为肝癌的基因治疗提供了一条新途径.
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中药复方胃肠安血清诱导肝癌SMMC-7721细胞分化
目的:观察中药复方胃肠安诱导肝癌细胞分化的作用.方法:以SMMC-7721人肝癌细胞为研究对象,维甲酸为对照,采用药物血清添加法,通过MTT法和AlamarBlue法观察胃肠安对肝癌细胞增生的抑制作用;放射免疫法观察对肝癌细胞分泌甲胎蛋白和白蛋白的影响;Western blot观察对肝癌细胞P53、P16以及P21蛋白表达的影响.结果:MTT法显示胃肠安与维甲酸对SMMC-7721人肝癌细胞增生均有抑制作用,胃肠安在48 h达到大,而维甲酸对细胞增生的抑制作用在48h后逐渐下降,较胃肠安组明显降低.Alamar Blue法结果显示,16 h后,胃肠安组细胞还原的AlamarBlue值较对照组明显减少,并在32 h后较维甲酸组显著下降,提示与维甲酸相比,胃肠安作用起效慢但持续时间长;胃肠安组分泌的甲胎蛋白较对照组显著减少(11.4±1.4μg/Lvs17.2±1.1 μg/L,P=0.036),而白蛋白显著增多(0.40±0.02mg/L vs0.29±0.01 mg/L,P=0.043);胃肠安组突变型P53蛋白的表达较对照组明显减少,而P16蛋白和P21蛋白的表达较对照组增多.结论:胃肠安方剂具有抑制SMMC-7721人肝癌细胞增生、诱导细胞分化的作用,其机制可能在于减少突变型P53蛋白表达和增加P16,P21蛋白表达.
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TDI-FP法分析肝细胞癌组织中HBV核心启动子双突变
目的:通过TDI-FP法检测肝细胞癌组织中HBV DNA核心启动子区A1762 T和G1764A双突变并分析二者之间的相关性,同时建立一种新的突变检测方法.方法:以20例肝细胞癌组织为研究标本,通过PCR扩增含有HBV DNA核心启动子区的DNA片段,然后用TDI-FP法检测R110或TAMRA标记ddNTP的FP值,鉴定nt1762和nt1764的基因型.结果:20例肝细胞癌组织中经HBV检测试剂盒鉴定后,18例为HBV感染阳性,阳性率为90%.经TDI-FP检测,其中有13例为T1762和A1764双突变型,1例为T1762-A1764/A1762-G1764突变杂合型,4例检测结果为阴性.经测序,阳性结果及突变杂合型与TDI-FP结果完全吻合,阴性结果中2例在nt1762前有8个核苷酸缺失突变,导致突变检测引物无法与模板结合,故产生TDI-FP检测出现假阴性结果.在肝细胞癌组织HBV DNA中,Ti762-A1764突变阳性率为75%,突变杂合型为5%,野生型为10%.结论:在肝细胞癌组织中,HBV感染率非常高,而且其核心启动子区出现nt1762和nt1764双突变率较高,提示双突变与肝细胞癌关系密切;同时本实验所建立的TDI-FP法操作快速简便,可以进行高通量自动化操作,具有进一步推广应用的前景.
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人源化抗肝癌单链抗体融合突变型TNFα的导向作用
目的:用人源化抗人肝癌单链抗体(hscFv25)融合人突变型TNFα构建重组免疫毒素,对荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠进行体内杀伤活性实验.方法:用纯化的hscFv2s-mTNFα重组免疫毒素经尾静脉注射治疗荷肝癌裸鼠,2 wk后处死裸鼠,观察肿瘤的体积、质量,并对瘤组织进行TNFα的免疫组化染色.结果:hscFv2.5-mTNFa治疗组对荷肝癌裸鼠的有效率为5/5,其中2/5为完全缓解,3/5为部分缓解,与mTNFa对照组相比,有显著差异(Xh2=6.62,P<0.05),疗效明显高于对照组,治疗组裸鼠的肝、肺等组织中未见转移性病灶,经hscFv25-mTNFα治疗后的瘤组织,TNFα呈弥漫性阳性反应,主要存在于瘤组织的胞质中.结论:hscFv25-mTNFa对荷肝癌裸鼠具有一定的抑瘤作用,为HCC治疗打下基础.
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结肠肿瘤cFLIP基因表达与p53突变的关系
目的:检测cFLIPshort/long在结肠肿瘤和癌旁组织的表达状况及其与p53基因突变的关系,初步探讨cFLIP在结肠肿瘤发生发展中的意义及p53对其调控作用.方法:采用免疫组织化学法检测cFLIPshort/long在45例结肠腺癌、癌旁组织和42例结肠腺瘤组织中的表达,同时对以上45例结肠腺癌组织行免疫组化染色检测突变p53的表达状况.cFLIPshort/long在结肠腺癌、癌旁组织和腺瘤中的表达差异采用多个样本两两比较的秩和检验(Nemenyi法),cFLIPshort/long和突变p53的表达关系采用t检验分析.结果:cFLIPshort/long在结肠腺癌、癌旁组织和腺瘤中都有阳性表达,其染色记分均数分别为3.28±0.37、1.25±0.64和1.13±0.64.结肠腺癌组织的表达强度明显高于癌旁正常组织(3.28±0.37 vs 1.25±0.64,P<0.01)和腺瘤组织(3.28±0.37 vs 1.13±0.64,P<0.01).60%结肠腺癌突变型p53呈阳性表达,cFLIPshort/long在突变型p53阳性组结肠腺癌中的表达水平明显高于突变型p53阴性组(3.74±0.35 vs 2.58±0.59,P<0.01).结论:cFLIPshort/long特异性高表达于结肠腺癌组织且在结肠肿瘤转化过程中是一较晚期事件,可能与肿瘤的进展有关.P553突变可使结肠腺癌cFLIPshort/long表达水平升高,p53对cFLIP蛋白的促降解作用可能强于他对cFLIP基因的转录上调作用.
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肥厚型心肌病心肌肥厚与患者同时携带的突变数有关
目的:肥厚型心肌病基因诊断因表型异质性和突变型异质性面临困境,国外研究发现同时携带多突变能够导致更为严重的临床表型,这为肥厚型心肌病基因诊断的开展提供了新的希望。但目前中国肥厚型心肌病患者缺乏相关方面的资料,多突变导致肥厚型心肌病临床表型的特点不明,应该进一步明确。
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BRAF突变提示转移性结直肠癌患者转移灶切除术后预后不良
BRAF突变发生于5%~11%的转移性结直肠癌患者。该研究分析了BRAF突变患者转移灶切除术后的临床病理因素、PIK3CA突变频率以及预后情况。研究通过回顾性的对2009年至2012年单中心1941例转移性结直肠癌患者行KRAS/BRAF突变检测,共检出92例患者含BRAF突变。2011年423例BRAF野生型转移性肠癌患者作为对照组。
研究发现在转移性大肠癌中,与BRAF野生型组相比,BRAF突变型与确诊时高龄、女性、肿瘤位于右侧以及低分化、粘液组织形态更加相关。 BRAF突变更多出现于肠癌分期III期、T4期患者。 PIK3C与5%的BRAF突变共存,与17%的KRAS突变共存,与4%的BRAF/KRAS共突变共存。 BRAF突变的患者一般不只局限于肝转移,更容易出现腹膜转移。研究人员进一步研究发现合并BRAF突变的转移性肠癌患者转移灶相对不容易切除,即使切除后总生存期也较短。 -
抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在老年发病类风湿关节炎诊断中的价值
老年起病类风湿关节炎( elderly-onset rheumatoid arthritis,EORA)多指起病年龄超过60岁的类风湿关节炎(RA),诊断沿用美国风湿病学会(ACR) 1987年修订的RA分类标准.