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固相萃取-高效液相色谱法测定食用油脂中的苯并[a]芘
采用Ploy-sery MIP-BAP固相萃取小柱富集苯并[a]芘,应用高效液相色谱梯度洗脱法,以C18为色谱柱,乙腈为流动相,采用荧光法测定六种植物油中苯并[a]芘的含量.结果表明,苯并[a]芘在1.0~30 ng/mL色谱峰面积呈现良好的线性关系.用此法测定植物油中苯并[a]芘的加标含量,回收率为90.1~95.2%.
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免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定月饼中的黄曲霉素
建立了月饼中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定方法。样品用甲醇—水提取，经免疫亲和色谱柱净化，采用液相色谱法荧光检测。试验结果表明：空白样品分别按照1.0、2.0、12.5μg/kg添加黄曲霉毒素，回收率为68.7%～98.3%，方法检出限分别为0.4、0.1、0.4、0.1μg/kg。该方法灵敏度高，重现性好，适用于月饼样品中黄曲霉素的测定。
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固相萃取-高效液相色谱/荧光法测定全血中苯胺
目的 建立全血中痕量苯胺的固相萃取-高效液相色谱荧光检测方法.方法 样品用水稀释,乙腈提取后,用Cleanert NH2固相萃取小柱进行净化,在Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm)上以水/乙腈(20/80,V/V)为流动相进行等度洗脱,荧光检测波长λex为225 nm,λem为335 nm,外标法定量.结果 苯胺在3.0～200.0μg/L范围内具有良好的线性,相关系数0.9992,定量限为3.0 μg/L,回收率为87.5％ ～ 104.4％,日内RSDs为3.1％ ～6.6％,日间RSDs为6.4％ ～ 8.6％.结论 该方法简便、快速、干扰少、特异性强,适用于全血中痕量苯胺的检测.
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免疫亲和柱净化-液相色谱柱后衍生荧光法测定人尿液和血浆中河豚毒素
目的 建立液相色谱柱后衍生荧光检测法测定尿液和血浆中河豚毒素(TTX)的分析方法.方法 样品经免疫亲和柱净化浓缩10倍后进样分析,色谱柱为Zorbax Bonus RP柱(4.6mm×150 mm,3.5μm),流动相为含10 mmol/L庚烷磺酸钠的60 mmol/L乙酸铵水溶液(pH5.0),4 mol/L NaOH 120℃柱后衍生,荧光检测器于激发波长385 nm,发射波长505 nm处进行检测.结果 尿液和血浆中TTX的线性范围均为1.0 ～ 400 ng/ml,相关系数优于0.999,样品的检出限(S/N=3)均为0.3ng/ml,定量限(S/N=10)为1.0 ng/ml,4个浓度水平加标的平均回收率分别在94％～98％和92％～95％之间,相对标准偏差为1.2％～5.5％和2.0％～6.8％(n=5).结论 方法准确、灵敏、选择性强,适用于尿液和血浆样品中河豚毒素的中毒检测,已应用于实际样品的测定,取得满意结果.
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智能龋齿侦察仪的研究及应用
龋齿是目前主要的口腔疾病之一,具有发病率高覆盖面广的特点,影响国民生活质量.龋齿发病因素包括细菌因素、食物因素、牙齿因素和唾液因素等.早诊断早预防是治疗龋齿的关键.传统的龋齿检测方法包括视诊、探诊、X线片等.传统检测方法主观性强,对牙齿甚至身体伤害大,已不能满足将龋齿从"破坏性治疗"提升到"早期性预防"转变的要求.智能龋齿侦察仪利用405 nm紫外光激发牙齿的自体荧光,采用滤光片将激发光滤出,由FH8610无线摄像机成像并经Wi-Fi无线传输到手机伢侦探APP上智能显示,通过医生远程看诊,实现在牙齿脱矿时期早期诊断龋齿,具有无损、可视、智能、便携的特点.
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超高效液相色谱-荧光检测法准确定量调味油中罗丹明B的两种前处理方法比较
目的 研究有效提取和净化调味油中罗丹明B的两种前处理方法,为超高效液相色谱-荧光检测(UPLC-FLR)法的准确定量提供有价值的参考.方法 第一种方法用酸化乙腈提取,混合型阳离子交换固相萃取(SPE)柱净化;第二种方法用含20％丙酮的正己烷提取,中性氧化铝SPE柱净化.两种方法的净化液吹至近干,用50％甲醇-水复溶,滤膜过滤后用UPLC-FLR测定.结果 两种方法中罗丹明B在5.0、50.0、200.0 μg/kg三个水平下的加标回收率分别在82.8％ ～ 101.9％、80.9％ ～ 93.6％之间,相应相对标准偏差(RSD)分别在1.5％ ～2.9％(n=6)、1.0％～2.1％(n=6)之间.结论 两种方法均可满足调味油中罗丹明B的测定,第一种方法在5.0、50.0 μg/kg加标水平的回收率均优于第二种方法,且无需大容量SPE柱;高浓度(200.0μg/kg)加标水平的回收率差异无统计学意义(P＞0.05).
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肠道菌群法研究延胡索、白芷配伍对延胡索乙素代谢的影响
目的:考察大鼠肠道菌群对延胡索总碱(TA)中延胡索乙素(tetrahydropalmatine,TET)的代谢情况及白芷香豆素(coumarin,cou)和白芷挥发油(volatile oil,VO)两种提取物与TA配伍对延胡索乙素在大鼠体内代谢的影响,探讨元胡、白芷有效组分配伍规律.方法:分别将TA,TA-Cou,TA-VO,TA-Cou-VO 4组药物与新鲜配制的大鼠肠内容物混悬液在37℃孵化,采用HPLC-FLD测定孵化不同时间大鼠肠内容物混悬液中TET的浓度.结果:TA-Cou组明显减缓了TET的降解速度.结论:从代谢的角度证实了元胡白芷配伍的合理性.
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高效液相色谱-荧光检测法测定海康灵中红景天苷的含量
海康灵口服液由何首乌、红景天等数味中药组成,具有补气益肾、醒脑益智、活血化瘀等作用,临床上用于治疗老年性头晕耳鸣,记忆力减退,药理实验证明具有抗老年性痴呆作用.为有效控制该产品的质量,笔者对处方中的君药红景天的主要活性成分红景天苷的含量进行了测定,取得了满意的效果,现报道如下.
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离子交换色谱-荧光检测法快速测定枸杞子中噻菌灵残留量
目的:建立离子交换色谱-荧光检测法快速测定枸杞子中噻菌灵残留量.方法:样品用0.1%磷酸溶液提取,采用LC-SCX离子交换色谱柱(4.6 mm×25 cm,5μm)分离,以0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH 3.0)-乙腈(70:30)为流动相,流速1.0 mL·min-1,荧光激发波长307 nm.发射波长359 nm.结果:样品中噻菌灵能得到良好的分离,在0.000 5～0.02 mg·L-1峰面积与质量浓度呈良好的线性相关(r=0.999 9),回收率及重复性良好.结论:该法可用于枸杞子中噻菌灵残留的检测.
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高效液相色谱-荧光检测法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量
目的:建立桑叶药材中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的高效液相色谱-荧光检测法的含量测定方法.并对不同生长季节和生长环境桑叶药材的DNJ含量进行测定.方法:桑叶经0.05 mol·L-1盐酸提取,在pH 8.5的硼酸盐缓冲液条件下,用芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)与DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相色谱-荧光检测器测定.液相条件为HiQSiL C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸(55:45),流速1.0 mL·min-1,柱温25 ℃,荧光检测器激发波长254 nm,发射波长322 nm.结果:DNJ与其他组分分离效果较好,线性范围为0.567～34 μg·mL-1(r=0.999 8),加样回收率为97.2%.结论:桑叶中DNJ含量与环境因素、温度及生长季节有关,该方法可作为桑叶药材的质量控制方法.
关键词： 桑叶 1-脱氧野尻霉素(DNJ) 高效液相色谱法 荧光检测 -
桑寄生及其寄主植物桑树1-脱氧野尻霉素含量相关性研究
目的:考察桑寄生及其寄主植物桑树1-脱氧野尻霉素( DNJ)含量的关系.方法:采用RP-HPLC测定寄生在桑树和非桑树寄主植物上的桑寄生及其寄主植物DNJ含量,样品DNJ采用0.05 mol·L-盐酸溶液提取,在pH 8.0的硼酸盐缓冲溶液条件下,用芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)与DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相-荧光检测器测定.色谱条件Agilent C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸(51:49),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,荧光检测器激发光254nm,发射光322 nm.结果:DNJ的线性范围3.72 ～37.2 mg·L-1(r =0.999),加样回收率为96.42%,桑树寄主及其桑寄生DNJ含量分别为1.39～ 10.16 mg·g-1和0.46 ～2.72 mg·g-1不等,非桑树寄主及其桑寄生不含DNJ,桑寄生DNJ含量高可达到其桑树寄主DNJ含量的48.0%.结论:桑寄生以一定量的形式累积其寄主植物桑树DNJ特征性成分,本方法可作为对以桑树为寄主植物的桑寄生药材的质量控制方法.
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菟丝子、莱菔子与其易混淆品的快速PCR法鉴别研究
完善快速PCR鉴定检测体系,并建立菟丝子或莱菔子的分子鉴别方法.收集不同地区的菟丝子、莱菔子及其易混淆品材料,所有样品进行总DNA的提取,通过对菟丝子、莱菔子及其易混淆样品ITS片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物,采用2步法进行PCR扩增,从而对菟丝子或莱菔子进行鉴别.通过对影响PCR退火温度、变性温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行优化,并对不同型号PCR仪进行考察,分别获得菟丝子、莱菔子快速PCR反应程序.在稀释后的PCR产物中加入SYBR Green Ⅰ染料,正品显示出明亮绿色荧光,而混淆品不显示荧光,且可有效的避免因引物二聚体而存在的假阳性问题.快速PCR方法可以简单快速鉴别菟丝子、莱菔子,为实现药材分子鉴别的现场运用提供技术支撑.
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快速PCR方法在哈蟆油真伪鉴别中的应用研究
该研究依据哈蟆油Cyt b基因155位SNP位点设计位点特异性PCR引物,采用碱裂解法提取基因组DNA,2步循环 PCR 程序进行 PCR 反应,并对PCR反应条件进行优化,从而建立起一种哈蟆油及其4种常见混伪品的快速PCR鉴别方法.该方法在90 ℃变性3 s,62 ℃退火延伸20 s进行32个循环时,加入2 μL 100×SYBR Green Ⅰ染料,正品显示出明亮绿色荧光,而混淆品不显示荧光.该方法准确、简便,40 min内即可完成鉴别,为哈蟆油药材现场快速鉴定提供技术支持.
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快速PCR方法在金银花真伪鉴别中的应用
建立简单快速的金银花真伪分子鉴别方法.该研究依据金银花trnL-trnF 625位G/T SNP位点设计快速位点特异性PCR引物,优化位点特异性PCR条件,对金银花及其9种混淆品进行扩增及检测.当在87℃预变性1 min;87℃变性5s,68℃延伸5s,30个循环时,通过加入SYBR Green Ⅰ染料染色,金银花样品显绿色荧光,混淆品无荧光.整个PCR反应可在30 min内完成.该研究结果说明快速位点特异性PCR能简单快速鉴别金银花及其混淆品.
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快速PCR方法在蛇类药材真伪鉴别中的应用
为优化获得一种准确、快速、高效鉴别药典所载蛇类药材(乌梢蛇,金钱白花蛇,蕲蛇)真伪品的方法.该研究以蛇类药材经典PCR鉴定方法为基础,采用碱裂解法提取基因组总DNA,加入特异性PCR引物,采用两步法进行PCR扩增,从而对蛇类药材及其混淆品进行鉴别.通过对影响PCR反应时间的退火温度、变性温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行优化,并对不同型号PCR仪和Taq酶进行考察,分别获得乌梢蛇、金钱白花蛇、蕲蛇快速PCR反应程序.在PCR产物中加入SYBR Green Ⅰ染料,正品显示出明亮绿色荧光,而混淆品不显示荧光.所建立的蛇类药材快速PCR真伪检测方法可在30～45 min完成,为蛇类药材现场快速鉴定提供技术支持.
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拉米夫定疗程中YMDD变异前后血清IL-12和TH1/TH2型细胞因子变化及意义
拉米夫定疗程中出现HBV变异的慢性乙型肝炎患者20例,HBV DNA阳性,治疗前HBeAg均阳性,给予拉米夫定100mg/d,分别检测治疗前、治疗3个月、治疗6个月、治疗9个月、治疗12个月等5个时相点血清HBV DNA水平,在HBV DNA转阴的基础条件下,如果某时相点出现了HBV DNA反跳,则认为在该时相点发生了YMDD变异.健康献血员作血清细胞因子水平健康对照.采用ELISA法检测5个时相点及健康献血员血清IL-12、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平,检测结果以pg/ml为单位.计算与健康对照校对后的IFN-γ/IL-4比值作为TH平衡指标(健康对照为1).核酸扩增荧光检测乙型肝炎病毒YMDD突变型.t检验进行统计分析.
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高效液相色谱-荧光检测法测定人血浆中盐酸二氧丙嗪浓度
目的 建立人血浆二氧丙嗪检测的高效液相色谱方法.方法 血浆样品碱化后用乙醚提取,再酸化后进行反提;以ZORBAX Eclipse XDB- C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱;以乙腈-0.15mol/L NaH2PO4-H2O=24:23:53(V/V/V)为流动相(pH为4.0),荧光检测波长λEX=230nm,λEM=365nm.结果 血浆浓度在0.5～75ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9993);低检测浓度0.5ng·ml-1;高中低3个浓度的平均方法回收率和萃取回收率分别为(100.53±5.5)%和(84.73±1.57)%;日内、日间RSD分别为(2.87±1.21)%和(3.30±2.38)%.结论 本方法灵敏度高、干扰少,适用于临床盐酸二氧丙唪血药浓度的测定及其药动学研究.
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高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠骨骼肌组织内微量三甲基组氨酸
目的:建立快速检测肌肉组织内微量三甲基组氨酸(3-MH)含量的方法.方法:利用荧光胺与3-MH在酸性和高温条件下发生柱前衍生反应,在ZORBAX SB-C18(4.6×150mmol/L,5μm)柱上,用10mmol/L磷酸钠缓冲液(含30%乙腈,pH7.50)作流动相,以1.0ml/min的流速进行等度洗脱后,荧光(激发波长365nm/发射波长460nm)检测3-MH含量.结果:应用此方法检测骨骼肌组织内的氨基酸,仅见到3-MH和组氨酸的色谱峰,色谱保留时间分别约为(4.45±0.02)min和(6.92±0.05)min,分离度＞16;线性检测范围是0.005～10.0nmol/ml(r=0.9999,P=0.00);衍生回收率为92.6%～96.8%;3-MH荧光衍生后15d分析与衍生后立即检测相比结果无显著差异(P=0.9095,n=24).结论:本方法测定骨骼肌组织内3-MH,衍生步骤简单,重复性好,检测灵敏度高,适合快速、准确地大批量检测肌组织内的微量3-MH,为开展骨骼肌肌纤维蛋白分解代谢研究提供了可行的方法.
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RP-HPLC-荧光检测法测定小鼠脑组织中5种神经递质的含量
目的建立一种定量分析脑组织中神经递质的方法.方法采用反相高效液相色谱-荧光检测法,测定小鼠脑组织中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(L-DA)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟色胺酸(5-HTP)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)5种神经递质的含量.结果由色谱图显示5种成分完全分离.小鼠脑组织中的L-NE为70.05±6.28、LDA110.33±10.56、5-HT50.12±6.85、5-HTP690.44±60.21、5-HIAA960.98±80.72ng*g-1.结论本方法简便、快速、准确,为临床监测及科研提供参考.
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白芷提取物与延胡索总碱配伍对延胡索乙素在大鼠体内药代动力学的影响
建立一种快速灵敏的大鼠体内延胡索乙素(tetrahydropalmatine,TET)血药浓度的HPLC-FLD检测方法;并研究白芷香豆素(coumarin,Cou)和挥发油(volatile oil,VO)两种提取物与延胡索总碱(TA)配伍对TET在大鼠体内药代动力学的影响.血浆经正己烷-异丙醇(95:5)沉淀蛋白,HPLC-FLD检测,结果血浆中TET的线性范围为2.096～167.68μg·L-1;定量限2.096 μg·L-1;方法准确度94.0%～100.0%,提取回收率72.0%～81.5%,日内日间精密度均小于7.0%;大鼠灌胃TA、TA-VO、TA-Cou、TA-VO-Cou后,TET在大鼠体内药代动力学行为均为二室开放模型,与TA组相比,配伍VO或(和)Cou后TET的AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、MRT0-∞等药代动力学参数有显著差异.建立的大鼠血浆中TET的测定方法具有灵敏、准确、专属性强等特点;Cou、VO与TA配伍,能显著延长TET在大鼠体内滞留时间,减缓体内的消除,提高其生物利用度.
