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JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞凋亡中的作用
目的:探讨JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞Jurkat和U937凋亡过程中的作用.方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞的生长抑制作用;以Caspase抑制剂Z-VAD-FMK和JNK抑制剂SP600125进行干预,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析Jurkat和U937细胞凋亡;利用免疫印迹技术检测mDRA-6作用下凋亡细胞的JNK蛋白的表达情况.结果:mDRA-6对Jurkat和U937细胞具有明显的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测显示,10 μg/ml的mDRA-6作用Jurkat和U937细胞3小时,其凋亡率分别为62.62%和35.65%,JNK抑制剂干预后细胞凋亡明显增加;免疫印迹技术检测显示,mDRA-6作用细胞5分钟后JNK即呈现活性片段表达,并随作用时间的延长其活性增强,而Caspase全抑制剂干预后,5、15分钟JNK磷酸化增强,但随后随时间递减.结论:mDRA-6抑制Jurkat和U937细胞生长并诱导其凋亡,其凋亡过程中有JNK的激活并发挥抗凋亡作用.
关键词： JNK 抗死亡受体5单克隆抗体 白血病细胞 凋亡 -
抗DR5单克隆抗体-mDRA-6对白血病细胞的凋亡诱导作用
目的:观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体(mAb)-mDRA- 6对白血病细胞的凋亡作用.方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞, 制备抗人DR5 mAb-mDRA- 6;荧光显微镜下观察mDRA- 6作用下白血病细胞Jurkat、 HL- 60、 K562的形态变化;MTT法测定不同浓度的mDRA- 6对Jurkat、 HL- 60、 K562细胞存活率的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞, 以流式细胞术检测mDRA- 6对Jurkat、 HL- 60、 K562细胞凋亡率的影响.结果:mDRA- 6导致Jurkat、 HL- 60细胞染色质浓缩、断裂, 细胞出芽, 凋亡小体形成;mDRA- 6对Jurkat、 HL- 60细胞具有明显的杀伤作用, 但对K562的杀伤作用较弱, 25mg/L的mDRA- 6作用12h, Jurkat、 HL- 60、 K562细胞死亡率分别为88.76%, 59.76%, 5.18%.Annexin V及PI双染显示1mg/L的mDRA- 6作用 10 h, Jurkat细胞凋亡率为86.06%, 10 mg/L的mDRA- 6作用10 h, HL- 60细胞凋亡率为48.11%, 但10 mg/L的mDRA- 6作用K562细胞10 h, 细胞凋亡不明显.结论:抗DR5 mAb mDRA- 6能够诱导白血病细胞凋亡, 不同的白血病细胞株对mDRA- 6的敏感性不同.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 抗死亡受体5单克隆抗体 白血病
