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泌尿生殖道支原体PCR检测方法的建立及药物敏感性分析
目的 了解本地区解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)对泌尿生殖道的感染及耐药状况,指导临床合理用药.方法 别在解脲支原体及人型支原体16SrRNA的种属特异性区域设计引物,优化反应条件,并对阳性样本做药物筛选.结果 检测样本554例,其中阳性为393例,占70.9%;在检测的阳性标本中Uu感染194例,占总标本的35.0%,Mh感染141例,占总标本的25.5%,Uu+Mh感染58占总标本的10.5%.药敏实验结果显示强力霉素、交沙霉素、阿齐霉素、克拉霉素和原始霉素对泌尿系统支原体敏感.结论 PCR法与培养法相比具有灵敏度高、特异、快速、经济等优点.本实验与2003-2005年药敏结果比较,2006-2007年阿奇霉素和克拉霉素的耐药性显著提高,这和人们滥用抗生素有直接关系.强力霉素、交沙霉素的耐药性也上升,但对泌尿生殖道感染仍有较好的疗效.
关键词： 解脲枝原体 人型支原体 多聚酶链式反应(PCR) 药物敏感性实验 临床治疗 -
埃及血吸虫基因组内存在着曼氏血吸虫基因组"特异的"DNA重复序列
目的探索埃及血吸虫基因组内是否存在曼氏血吸虫基因组"特异的"高度重复序列Sml-7.方法以埃及血吸虫基因组DNA为模板,用根据Sml-7设计并合成的寡核苷酸引物进行多聚酶链式反应(PCR)扩增,选取扩增产物中长约300 bp的DNA片段,经过预处理后与去磷酸化的质粒载体pBluescriptⅡ(KS+)进行连接,连接产物转化至大肠杆菌JM109.重组质粒经纯化后作DNA序列测定.结果从埃及血吸虫基因组DNA中成功地扩增出与曼氏血吸虫基因组重复序列Sml-7同源的重复序列.通过DNA序列测定显示,除个别碱基不同外,从埃及血吸虫基因组获得的重复序列与曼氏血吸虫基因组重复序列Sml-7完全相同.灵敏度分析显示该重复序列在埃及血吸虫基因组内的拷贝数远低于其在曼氏血吸虫基因组内的拷贝数.结论曼氏血吸虫基因组"特异的"DNA重复序列Sml-7在埃及血吸虫基因组内同样存在.
关键词： DNA 重复序列 血吸虫基因组 多聚酶链式反应(PCR) -
一种简单的PCR产物克隆方法
目的:分别将两段PCR产物hTERT及E1定向克隆到载体pShuttle中以构建重组质粒pShuttle-hTERT-E1.方法:在合成PCR引物时两端对应加入线性化载体两端的15个碱基,这样PCR得到的产物两端就分别带上了15个和线性化载体两端重复的碱基序列,将纯化的产物与线性化载体以摩尔数为2∶1比例混和,溶于10μl的去离子水中,加入In-Fusion重组酶,在42℃下反应30分钟后转化,就可以实现类似同源重组的反应,将PCR产物定向克隆入目标载体上.结果:经鉴定,成功构建出重组质粒pShuttle-hTERT-E1.结论:无需传统的酶切、连接、去磷酸化等手段,利用In-fusion技术可快速、高效的完成PCR产物的定向克隆.
关键词： 多聚酶链式反应(PCR) 克隆 重组 -
乙型肝炎病毒前C区G1896A位点变异检测方法的建立及应用
[目的]建立等位基因特异性PCR(AS-PCR)法检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A位点变异并对部分慢性乙型肝炎标本进行检测.[方法]根据HBV前C区G1896A位点设计只有3'末端有一个碱基不同的两对等位基因特异性引物,根据PCR结果判断该位点为G或A.[结果]本文测定的两株克隆序列与AS-PCR结果一致;HBeAg阳性慢性乙肝G1896A突变率为50%(15/30),HBeAg阴性组为90%(27/30),两组变异率有显著性差异(x2=29.382,P=0.000).[结论]本文建立的方法可用于检测HBV前C区G1896A位点的突变.
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乙型肝炎病毒基本核心启动子A1762T/G1764A位点基因多态性检测方法的建立及应用
[目的]建立多聚酶链式反应-限制性片段长度多态分析(PCR-RFLP)法检测乙型肝炎病毒(HBV)C区基本核心启动子区(BCP)A1762T/G1764A联合突变并对部分临床标本进行检测.[方法]根据HBV BCP区基因设计引物,在G1764位设计MboⅠ酶切位点,根据PCR产物酶切结果判断该位点为G或A.[结果]测序及序列比较显示本文一株突变株:DT-BCP确为1762T/1764A变异株;HBeAg阳性慢性乙肝A1762T和G1764A位点双突变率为60%(18/30),HBeAg阴性组为53.3%(16/30),两组变异率无显著性差异(x2=0.271,P=0.602).[结论]本文建立的方法可用于检测HBV BCP区A1762T/G1764A位点双突变.
