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MicroRNA－31在肝癌中的肿瘤抑制作用
目的：分析微小RNA－31（MicroRNA－31）在肝癌中的肿瘤抑制作用和影响机制。方法选取2014年6月至2016年1月收治的HBV感染者为研究对象，依照患者病情分为急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组、肝癌组，另外选取同期健康体检人员30例作为健康组，采集患者外周静脉血，测定MicroRNA－31表达情况。肝癌手术患者留取肝癌组织和癌旁正常组织，细胞转染，实施平板克隆形成实验。选取健康裸鼠，在无菌条件正常饮食下，将转染肝癌组织经皮下注射置入裸鼠，3 w后处死，取出肿瘤组织，测量体积。同时开展Western印迹，采用实时荧光RNA和免疫组织化学法测定观察。结果感染HBV后，细胞MicroRNA－31存在高表达情况，肝癌组患者组织核细胞MicroRNA－31表达显著高于其他组（ P＜0．05）。平板克隆实验测定，转染MicroRNA－31的肿瘤细胞克隆数增殖减少50％（P＜0．05）。体外成瘤实验，转染MicroRNA－31后的肝癌细胞成瘤能力下降，而且肿瘤体积缩小。 Western印迹检测，细胞转染后，LATS2表达水平提高1．5倍，PPP2R2A表达无明显变化，转染 LATS2siRNA细胞中 LATS2表达显著下降（ P＜0．05）。 MicroRNA－31表达与LATS2呈现负相关（ P＜0．05）。免疫组织化学法检测显示，肝癌组织中LATS2表达水平显著低于正常组织。结论肝癌组织中MicroRNA－31可能通过调节LATS2抑制肿瘤增殖，MicroRNA有望成为分子指标靶向药物。
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结直肠癌组织中miR-31、PDCD4 mRNA表达及意义
目的 观察结直肠癌组织中miR-31、程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达情况,分析其与结直肠癌发生发展的关系.方法 选择80例结直肠癌患者,收集其临床资料(包括性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期、分化程度、淋巴结是否转移等).取患者手术切除的癌组织和癌旁组织,采用RT-PCR法检测miR-31、PDCD4 mRNA表达,分析miR-31、PDCD4 mRNA表达与临床病理特征的相关性,采用简单相关分析法分析癌组织中miR-31、PDCD4 mR-NA表达的相关性.结果 癌组织中miR-31相对表达量高于癌旁组织,PDCD4 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P均<0.05).癌组织中miR-31、PDCD4 mRNA表达与TNM分期、分化程度及淋巴结是否转移有关(P均<0.05),与癌症部位、性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05).相关性分析显示,癌组织中miR-31与PDCD4 mRNA表达呈负相关(r=-0.412,P<0.05).结论 结直肠癌组织中miR-31表达升高、PDCD4 mRNA表达降低,二者异常表达与结直肠癌病情进展及恶化转移有关.
关键词： 结直肠癌 微小RNA-31 程序性细胞死亡因子4 -
微小RNA-31靶向作用Ras p21蛋白活化子1对结肠癌细胞增殖和迁移的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-31对结肠癌细胞增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测miR-31在结肠癌细胞株和结直肠癌患者癌组织中的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法和细胞划痕实验分别检测过表达miR-31后结肠癌细胞增殖和迁移,Western blot检测过表达miR-31的结肠癌细胞中Ras p21蛋白活化子1(RASA1)的表达.结果 miR-31在结肠癌组织和细胞中高表达(P＜0.05),过表达miR-31可促进结肠癌细胞的增殖和迁移能力.同时,转染miR-31模拟物组RASA1的相对表达量为0.21±0.05,miR-31抑制剂组的相对表达量为2.46±0.35,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-31对结肠癌细胞的增殖和迁移具有促进作用,其机制与靶向作用于RASA1蛋白有关.
关键词： 结直肠癌 微小RNA-31 Ras p21蛋白活化子1 细胞增殖 -
细胞外信号调节激酶通路对人动脉硬化平滑肌细胞增殖、表型标志蛋白及微小RNA-31表达水平的影响
目的 探讨阻断人动脉硬化平滑肌细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)通路,进一步明确ERK、微小RNA(miR)-31与血小板源性生长因子(PDGF)-BB介导的平滑肌增殖之间的调控关系.方法 收集下肢动脉硬化闭塞患者下肢截肢标本,用贴壁法原代培养平滑肌细胞.相同代数的第3～6代血管平滑肌细胞(VSMCs),加入PDGF-BB或PDGF-BB+ PD98059分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell法、Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测VSMCs增殖、迁移能力、表型标志性蛋白表达以及miR-31表达水平.结果 经组织贴壁法成功培养出原代平滑肌细胞.PDGF-BB诱导动脉硬化细胞的增殖率上调102％ (P＜0.05)和迁移率上调246％ (P＜0.05),ERK阻断剂PD98059能阻滞PDGF-BB诱导的诱导作用,平滑肌细胞增殖抑制53％(P＜0.05)和迁移抑制19％ (P ＜0.05).与空白组比较PDGF-BB处理后,收缩表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)含量下调38％ (P ＜0.05),增殖型蛋白骨桥蛋白(OPN)和miR-31含量分别上调116％ (P ＜0.05)和386％ (P ＜0.05).与PDGF-BB组比较,PD98059+PDGF-BB处理后,α-SMA含量显著上调41％ (P ＜0.05),增殖型蛋白OPN和miR-31含量分别下调33％ (P ＜0.05)和46％(P＜0.05).结论 阻断ERK通路可促进VSMCs由增殖型向收缩型转变,同时下调miR-31的表达水平,ERK-miR-31通路可能是调控人动脉硬化平滑肌细胞功能及表型的重要通路.
关键词： 动脉硬化 平滑肌细胞 细胞外信号调节激酶通路 微小RNA-31 表型转换 -
微小RNA-31在乳腺癌细胞中低表达对乳腺癌细胞侵袭的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-31在乳腺癌细胞中的表达以及对乳腺癌细胞的作用.方法 分子克隆构建重组pMSC-异源三聚体G蛋白13(GNA13) wt质粒,分别转染不同类型的乳腺癌细胞,研究miR-31对GNA13在蛋白水平和mRNA表达水平的影响以及GNA13蛋白相对表达量与细胞侵袭能力的相关性.结果 在MCF-10A细胞中,pMSC-GNA13wt载体转染组GNA13 mRNA相对表达量(7.26±1.80)显著高于空载体转染组(1.05±0.02,P=0.001).pMSC-GNA13wt载体转染组细胞侵袭的相对数目[(13.35±0.47)个]显著高于空载体转染组[(1.38±0.12)个]细胞数目(P=0.000),GNA13 mRNA表达水平与miR-31表达水平呈负相关性.结论 通过减少GNA13表达可抑制miR-31对乳腺癌细胞侵袭.
关键词： 微小RNA-31 异源三聚体G蛋白13 乳腺癌 -
乙型肝炎病毒表面抗原在HepG2细胞中调节微小RNA-31的表达
目的 研究HBV及HBsAg对肝癌细胞HepG2中微小RNA-31(miR-31)表达的调节作用.方法 构建哺乳动物HBsAg表达载体并转染HepG2细胞,筛选稳定过表达HBsAg的肝癌细胞系,用酶联免疫吸附法及细胞免疫组织化学法鉴定克隆,并用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-31在肝癌细胞系中的表达水平.结果 成功构建哺乳动物HBsAg表达载体,建立稳定表达HBsAg的肝癌细胞系HepG2-H2.整合HBV基因组的HepG2.2.15细胞中miR-31的相对表达量明显下调为0.003±0.001,与普通HepG2细胞的1.0±0.023相比,t=583.8,P＜0.001,差异有统计学意义;miR-31在稳定过表达HBsAg的HepG2-H2细胞中的相对表达量明显高于空白对照细胞HepG2组及阴性对照细胞HepG2-H0组,F=24.922,P＜ 0.05,差异有统计学意义;而HepG2组与HepG2-H0组比较,P＞ 0.05,差异无统计学意义.结论 HBV能够抑制miR-31的表达,而HBsAg则促进miR-31的表达.
