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A549-DDP细胞株文献资料
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DNMT3 a基因shRNA质粒表达载体的构建及其沉默作用
目的：以DNMT3a mRNA 保守序列为靶基因设计针对DNMT3a mRNA的siRNA序列和无效干扰对照序列（HK），并利用基因重组技术将其克隆到真核表达载体pGensil－1中，构建pGenesil－1－DNMT3a－shRNA、pGenesil－1－HK－shRNA重组质粒。方法应用转化技术将重组质粒转化到大肠杆菌 DH5a中，通过卡那霉素抗性筛选出阳性菌落后提取质粒进行酶切和测序鉴定，应用质粒转染技术转染耐顺铂肺腺癌 A549细胞（ A549－DDP），利用RT－PCR技术检测转染重组质粒24、48、72 h后 DNMT3a的沉默效率。结果测序结果与合成序列一致，重组质粒不能够被PstⅠ切开，转染pGenesil－1－DNMT3a－shRNA能够明显抑制DNMT3a的表达，抑制率分别达到25．5％，56．2％，63．4％，且呈明显时间依赖性，而 pGenesil－1－HK－shRNA无明显抑制作用。结论成功构建了DNMT3a基因shRNA及HK质粒真核表达载体，为进一步实验研究奠定了基础。
关键词： DNMT3A RNA干扰 小发卡RNA 重组质粒 A549-DDP细胞株
