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miRNA-350靶向MAPK14及JNK调控H9c2细胞增殖和凋亡
目的 观察miRNA(miR)-350对H9c2细胞凋亡的诱导作用.方法 H9c2细胞转染miR-350诱导细胞肥大.显微镜下观察细胞形态变化并测量细胞表面积;运用MTT法分析细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡.并采用Western印迹法检测靶基因丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)14及c-Jun氨基末端激酶(JNK)的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测MAPK14及JNK mRNA表达.结果 miR-350转染第7天细胞发生明显肥大和皱缩,miR-350及sh-MAPK14均能诱导细胞肥大;MTT结果显示miR-350组细胞活性显著下降(P<0.05);shRNA-JNK/p38组细胞活性抑制为显著(P<0.01);流式细胞术检测结果表明:与对照组比较,转染shRNA-JNK/p38组和转染miR-350组细胞凋亡率升高,分别是16.36％和8.39％.miR-350可在转录水平抑制内源性p38和JNK基因的表达.然而,miR-350上述活性均可被miR-350 antagomir有效阻滞.结论 miR-350靶向MAPK14及JNK基因调控H9c2细胞的增殖和凋亡.
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miR-350靶向调控脂多糖诱导的巨噬细胞中白细胞介素-6表达的研究
目的 探讨miR-350在巨噬细胞的固有免疫炎症反应中的作用.方法 实时荧光定量PCR方法检测脂多糖(LPS)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞中miR-350表达水平的变化.软件预测及荧光素酶报告基因方法确定miR-350的靶基因,实时荧光定量PCR方法检测miR-350对LPS刺激的小鼠原代腹腔巨噬细胞中靶基因表达水平的影响.结果 LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞后,miR-350表达水平呈时间依赖性下调.荧光报告基因方法确定miR-350能够显著调控炎症因子白细胞介素-6(IL-6)的3'UTR区的活性(P＜0.01).在小鼠原代腹腔巨噬细胞中过表达和抑制miR-350的表达,给予LPS刺激,IL-6的表达水平显著下调和上调(P＜0.01),而对IL-6启动子关键的转录因子p-p65水平没有影响.结论 LPS触发的固有免疫信号通路中,下调表达的miR-350能够显著抑制促炎因子IL-6的表达.
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miR-350在腹主动脉部分缩窄大鼠心肌组织中的表达及意义
目的 观察腹主动脉部分缩窄大鼠心肌组织miR-350在心肌肥厚形成过程中的表达变化并探讨其临床意义.方法 将20只雄性SD大鼠随机分成正常组5只、假手术组5只和模型组10只,采用腹主动脉部分缩窄术制备大鼠心肌肥厚模型.采用Trizol法提取心肌组织RNA,芯片技术检测miRNA表达.构建过表达miR-350质粒载体,转染大鼠的胚胎心肌细胞H9c2;采用Real-time PCR方法检测心肌细胞中ANP、BNP、β-myosin及α-actin的表达.结果 miR-350在模型组的表达量明显高于对照组；过表达miR-350的细胞中ANP mRNA及BNP mRNA升高(P ＜0.05或＜0.01).结论 在腹主动脉部分缩窄大鼠的心肌组织中miR-350表达升高,且介导心肌细胞肥厚.
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miR-350通过抑制MAPK14及JNK介导心肌细胞肥大
目的:探讨miR-350调控MAPK14及JNK介导心肌细胞肥大的作用机制.方法:miR-350过表达及MAPK14的shRNA表达载体转染H9c2细胞,显微镜下观察细胞形态变化并测量细胞直径;免疫细胞化学法检测NFATc的转核情况;Western blotting检测靶基因MAPK14及JNK的蛋白表达;RT-PCR的方法检测MAPK14及JNK的mRNA表达.结果:细胞转染后第3天,AngⅡ,miR-350及sh-MAPK14均能诱导细胞肥大,且miR-350及sh-MAPK14促使NFATc的转核明显增多,但仅miR-350抑制JNK和MAPK14蛋白表达而不影响JNK和MAPK14mRNA水平.结论:miR-350可能是通过抑制靶基因MAPK14及JNK表达,影响NFATc的转核介导心肌肥大的.
