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HT22细胞氧糖剥夺再灌注及 Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制研究
目的：探讨HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制。方法利用小鼠海马神经元细胞系HT22为研究对象，HT22细胞经氧糖剥夺再灌注损伤及Grasp65过表达干预后，采用MTT法检测细胞存活率；Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡；并应用细胞免疫荧光技术观察高尔基体的形态；应用Western blot技术检测GM130和GAAP蛋白的表达。结果氧糖剥夺再灌注可导致HT22细胞的活性显著降低（P＜0．05），凋亡率显著增高（P＜0．05）；并可导致高尔基体形态的异常，随着再灌注时间的延长，高尔基体逐渐发生碎裂，尤其以再灌注12 h和24 h为明显；GM130、GAAP的表达水平在氧糖剥夺再灌注后出现下降，特别是在再灌注12 h、24 h后出现了显著下降（P＜0．05）。过表达Grasp65后，HT22细胞在氧糖剥夺再灌注所致高尔基体碎裂出现减少（P＜0．05），碎裂程度减轻，同时GM130和GAAP的表达均显著增加（P＜0．05），HT22细胞的存活率大大提高（P＜0．05），凋亡率显著降低（P＜0．05）。结论缺血再灌注损伤的细胞模型中，同样发生了高尔基体的碎裂；过表达Grasp65可以减轻氧糖剥夺再灌注损伤所致的高尔基体碎裂，并可以减少HT22细胞的凋亡，其机制可能与上调GM130和GAAP的表达有关。
关键词： 高尔基体碎裂 凋亡 小鼠海马神经元系HT22 Grasp65 GM130 -
蛋白酶抑制剂H89对神经元细胞氧糖剥夺再灌注后高尔基体形态及细胞凋亡的影响
目的 探讨蛋白酶抑制剂H89对神经元细胞经氧糖剥夺再灌注损伤后高尔基体形态和细胞凋亡的影响.方法 将体外常规培养的小鼠海马神经元细胞HT22分为对照组、模型组和H89干预组.模型组与H89干预组按再灌注时间点分6h、12h和24h三个亚组.采用MTT法检测细胞存活率;Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡;细胞免疫荧光技术观察高尔基体形态;Westem blot技术检测GM130与GAAP蛋白表达.结果 H89干预组较模型组细胞活力有所上升,其中12h时间点(OD值0.1467±0.0090)与同期模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).H89干预组较模型组细胞凋亡率有所下降,但差异均无统计学意义(P＞0.05).H89干预组在6h和12h时间点高尔基体碎裂程度较同期模型组稍有减轻.H89干预组GM130表达水平较模型组无显著升高(P＞0.05).GAAP表达水平仅在24h时间点(灰度比值0.4066±0.0288)显著升高(P＜0.05).结论 H89干预不能减轻神经元细胞经氧糖剥夺再灌注损伤后的高尔基体碎裂和细胞凋亡.
