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NBP对器官型脑片糖氧剥夺模型中细胞凋亡的影响
目的 观察正丁基苯酞(NBP)对乳大鼠大脑皮质器官型脑片的氧糖剥夺模型(OGD)中细胞凋亡和线粒体电位的影响.方法 建立SD乳鼠大脑皮质运动区的器官型脑片,SMI-32染色观察锥体细胞.2 w后,随机分为对照组(C组)和实验组(T组),T组在OGD干预30 min后给予不同剂量NBP,分为T0、T001、T01、T1、T10组,给NBP前和后1h观察PI染色;选择T0组、T10组,观察两组在OGD 30 min、NBP 1 h、24h、72 h、7d等不同时间点PI染色变化.于NBP后1h各T组进行JC-1线粒体膜电位检测.结果 器官型脑片OGD 30 min给予NBP 1 h后,C组和各T组PI染色可见不同亮度红色荧光,各T组荧光强度均大于C组,荧光强度与NBP浓度(0～ 10 μmol/L范围内)呈负相关,各T之间组及与C组相比差异有显著性(P＜0.05);T0组和T10组在OGD 30 min均出现明显细胞凋亡,两组无显著性差异.复氧复糖后随时间延长T0组细胞凋亡增加,T10组逐渐减少,差异显著(P＜0.05);C组和各T组JC-1线粒体检测试剂盒染色可见OGD 30 min,复氧复糖1h后,红色荧光/绿色荧光(R/G)的值明显减小,R/G的值与NBP浓度呈正相关,各T组R/G值均小于C组,差异显著(P＜0.05).结论 OGD模型可模拟缺血性脑损伤的病理变化,重复性良好;NBP对缺血性脑损伤导致的急性和迟发性细胞凋亡均具有保护作用;NBP对脑片损伤后线粒体电位的耗散有阻止作用,且与剂量相关.
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器官型脑片培养 OGD 复氧复糖模型中丁苯酞对于 bcl-2／bax、及 bim 蛋白的调节作用
目的：观察正丁基苯酞（NBP）对乳大鼠大脑皮质器官型脑片的氧糖剥夺模型（OGD）中细胞凋亡bcl-2、bax及bim蛋白的调节作用。方法用生后7 d的SD乳大鼠制备大脑皮质运动区器官型脑片，将培养2 w的脑片随机分为对照组（ C组）、模型组（ M组）、溶剂对照组（ Sc组）和实验组（ T组），T组在OGD干预30 min后给予NBP 10μM。将脑片制备OGD模型30 min，部分脑片在NBP干预前后不同时间点（0 h、1 h、24 h、72 h）进行PI染色；部分脑片在NBP干预后6 h用戊二醛固定，做石蜡切片，行HE染色及bcl-2、bax、bim免疫组化染色。结果 PI染色可见C组在不同时间点荧光强度无明显变化， M组、Sc组和T组荧光强度均随时间有不同程度增强， M组和Sc组各时间点荧光强度无明显差异，T组荧光强度较前两者降低，随时间延长，降低幅度增大，尤其是72 h时间点。HE染色C组可见皮质运动区特有的大锥体细胞，结构清晰， M组和T组可见细胞肿胀，细胞核溶解， M组相对明显。免疫组化染色可见在3种染色中M组和T组阳性细胞数均较C组增多，其中bcl-2染色中T组阳性细胞增多更明显，bax和bim染色中M组阳性细胞增多更明显，3种染色中C、M、T各组之间差异均有统计学意义。结论NBP对OGD后的细胞损伤具有保护作用，可能是通过对bcl-2、bax以及bim蛋白的调节减少细胞凋亡。
