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慢病毒介导靶向P27RF-Rho基因沉默对肝癌细胞侵袭性的影响
目的：探讨慢病毒靶向介导技术沉默 P27RF-Rho 基因，阐述其对肝癌细胞侵袭性的影响。方法：构建P27RF-Rho RNAi慢病毒。慢病毒感染肝癌细胞 BEL7402。实验分为 P27RF-Rho-siRNA 实验组、Scramble-siRNA阴性对照组和BEL7402空白对照组。Western bloting法检测P27RF-Rho基因沉默效果及肝癌相关蛋白 RhoA、RhoC、VEGF、P53和PTEN表达水平；明胶酶谱分析肿瘤侵袭相关基质金属蛋白酶（MMPs）活性；细胞划痕和体外Transwell小室侵袭实验比对细胞迁移和侵袭能力的改变。结果：Western blotting法检测，P27RF-Rho-siRNA实验组BEL7402中P27RF-Rho、RhoA、RhoC和 VEGF蛋白表达水平明显低于2个对照组（P＜0.05），P53和 PTEN表达水平高于2个对照组（P＜0.05）。明胶酶谱，P27RF-Rho-siRNA实验组MMPs活性明显降低（P＜0.01）。划痕实验，P27RF-Rho-siRNA 实验组细胞迁移距离明显低于2个对照组（P＜0.01）。实验组穿过Transwell小室的平均细胞数明显少于2个对照组（P＜0.01）。结论：沉默 P27RF-Rho基因可以降低肝癌细胞BEL7402的侵袭和迁移能力。
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肝癌SMMC7721细胞株P27RF-Rho mRNA基因沉默对5-Fu药物敏感性的影响
目的:探讨肝癌SMMC7721细胞株P27RF-Rho mRNA基因沉默对5-氟脲嘧啶(5-Fu)药物敏感性的影响,为临床晚期肝癌治疗提供理论依据.方法:构建P27RF-Rho RNAi载体,P27RF-Rho基因沉默慢病毒感染SMMC7721肝癌细胞,Western blotting法检测基因沉默效果.SMMC7721细胞分为Scramble-siRNA阴性对照组、5-Fu组、P27RF-Rho-siRNA组和P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组.荧光显微镜检测细胞转染效果,Western blottting法检测RNAi基因沉默效率,MTT法检测各组细胞生长曲线,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中肿瘤相关蛋白P27及RhoC表达.结果:成功构建P27RF-Rho RNAi慢病毒载体.Western blotting法,P27RF-Rho-siRNA组细胞中P27RF-Rho蛋白表达水平明显低于5-Fu组和Scramble-siRNA组(P<0.05).与其他3组比较,P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组细胞生长速度降低(P<0.05);划痕实验中P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组细胞迁移能力明显减低(P<0.01);P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组穿过Transwell小室微孔滤膜的平均细胞数明显少于其他3组(P<0.01);Western blotting法检测,P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组细胞中癌相关蛋白P27表达水平明显高于其他3组(P<0.05),侵袭相关蛋白RhoC表达水平低于其他3组(P<0.05).结论:P27RF-Rho基因沉默能明显增强5-Fu对肝癌SMMC7721细胞的药物敏感性.
