首页 > 文献资料
-
miR-144-3p靶向调控ABCG2信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响
目的 研究miR-144-3p靶向调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding transporter Gfamily member 2,ABCG2)对胃癌(gastric cancer,GC)HGC-27细胞侵袭和迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 通过qRT-PCR检测人GCHGC-27细胞株和人胃黏膜上皮GES-1细胞株中miR-144-3p和ABCG2的表达情况;通过靶基因预测软件预测miR-144-3p和ABCG2靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向结合关系;通过qRT-PCR检测miR-144-3pmimic或miR-144-3p inhibitor转染GC细胞后miR-144-3p及ABCG2的表达水平;通过明胶酶谱实验检测对转染ABCG2 siRNA的GC细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)活性的影响;通过Transwell侵袭和迁移实验检测转染miR-144-3p mimic、miR-144-3p inhibitor、ABCG2siRNA对GC细胞侵袭和迁移能力的影响,结果 与正常细胞组人胃黏膜上皮GES-1细胞株相比,GC细胞组人GCHGC-27细胞株中miR-144-3p的表达量明显降低,ABCG2的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);靶基因预测miR-144-3p和ABCG23'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实了miR-144-3p和ABCG2靶向结合关系;与对照组相比,转染miR-144-3p mimic组GC细胞中miR-144-3p的表达明显升高,ABCG2的表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),转染miR-144-3p inhibitor则表现出相反的作用;明胶酶谱实验检测结果表明ABCG2 siRNA转染可显著抑制GC细胞中MMP-2和MMP-9蛋白活性,抑制GC细胞侵袭和迁移能力,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MiR-144-3p能够抑制GC细胞侵袭和迁移能力,其作用机制与靶向调控ABCG2-MMP-2/9信号通路有关,
-
FOXQ1与消化道肿瘤相关性的研究进展
叉头框蛋白Q1（FOXQ1）即肝细胞核因子3同系物1，是叉头框转录因子家族中的一员，并包含核心DNA结合结构域，而FOXQ1的侧翼有助于其序列特异性。 FOXQ1抑制平滑肌特异性基因启动子的活性、调节上皮细胞间充质转化以促进大多数肿瘤细胞的侵袭性和迁移性。近年的研究发现，其在多种消化道肿瘤中异常表达，深入研究 FOXQ1在肿瘤中的表达及其分子机制，对阐明肿瘤的发生机制及早期诊断和特异性分子治疗方面有重要意义。
-
ARMc8促进肺癌细胞的侵袭和迁移
目的 探讨ARMc8(arnadillo-repeat-containing protein 8)对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 分别在肺癌细胞A549和H1299中干扰和转染ARMc8,Transwell和划痕实验检测ARMc8对细胞侵袭和迁移能力的影响,并使用Western Blot方法检测α-catenin、E-cadherin、MMP-7和snail侵袭转移相关因子的改变.结果 干扰ARMc8可明显抑制A549细胞侵袭和迁移能力,下调MMP-7和snail表达水平,上调E-cadherin和o-catenin表达水平.而转染外源性的ARMc8,可显著增强H1299细胞的侵袭和迁移能力,同时上调MMP-7和snail表达,下调E-cadherin和α-catenin表达.结论 ARMc8过表达促进肺癌细胞的侵袭和迁移,可能与其上调MMP-7和snail,下调E-cadherin和α-catenin相关.
-
慢病毒介导靶向P27RF-Rho基因沉默对肝癌细胞侵袭性的影响
目的：探讨慢病毒靶向介导技术沉默 P27RF-Rho 基因，阐述其对肝癌细胞侵袭性的影响。方法：构建P27RF-Rho RNAi慢病毒。慢病毒感染肝癌细胞 BEL7402。实验分为 P27RF-Rho-siRNA 实验组、Scramble-siRNA阴性对照组和BEL7402空白对照组。Western bloting法检测P27RF-Rho基因沉默效果及肝癌相关蛋白 RhoA、RhoC、VEGF、P53和PTEN表达水平；明胶酶谱分析肿瘤侵袭相关基质金属蛋白酶（MMPs）活性；细胞划痕和体外Transwell小室侵袭实验比对细胞迁移和侵袭能力的改变。结果：Western blotting法检测，P27RF-Rho-siRNA实验组BEL7402中P27RF-Rho、RhoA、RhoC和 VEGF蛋白表达水平明显低于2个对照组（P＜0.05），P53和 PTEN表达水平高于2个对照组（P＜0.05）。明胶酶谱，P27RF-Rho-siRNA实验组MMPs活性明显降低（P＜0.01）。划痕实验，P27RF-Rho-siRNA 实验组细胞迁移距离明显低于2个对照组（P＜0.01）。实验组穿过Transwell小室的平均细胞数明显少于2个对照组（P＜0.01）。结论：沉默 P27RF-Rho基因可以降低肝癌细胞BEL7402的侵袭和迁移能力。
-
miR-598对结直肠癌细胞转移潜能的影响
目的:探讨miR-598在结直肠癌转移中的作用和分子机制,为寻找新的结直肠癌治疗靶标提供理论依据.方法:收集30对人结直肠癌及癌旁正常组织标本,采用qRT-PCR检测miR-598的表达,采用Transwell和划痕实验确定miR-598对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响,利用在线靶基因预测软件,筛选出miR-598可能的下游靶基因Jagged 1 (JAG1),利用Western blot及双荧光素酶报告基因实验检测miR-598对JAG1及上皮间质转化标志物(Vimentin及E-cadherin)表达的影响.结果:与正常肠黏膜组织对比,miR-598在结直肠癌组织中的表达水平明显降低;miR-598显著抑制结直肠癌细胞的侵袭及迁移能力;分子机制分析证实miR-598能够作用于JAG1的3'-UTR并抑制其表达;过表达miR-598显著下调Vimentin的表达水平,而提高E-cadherin的表达水平.结论:miR-598在人结直肠癌中表达明显下调;miR-598通过靶向调控靶基因JAG1的表达,抑制结直肠癌细胞EMT,从而有效的抑制了结直肠癌细胞的侵袭和迁移.
-
rhddADAM15蛋白抑制小鼠黑色素瘤细胞生长及其机制
目的 探讨重组人ADAM15去整合素结构域蛋白(rhddADAM15)对小鼠黑色素瘤细胞B16体外增殖、迁移、侵袭和凋亡等细胞行为的影响以及对p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的作用.方法 MTT法检测rhddADAM15对B16细胞增殖的抑制作用;划痕实验观察rhddADAM15对B16细胞迁移的影响;"侵袭小室法"检测rhddADAM15对B16细胞侵袭的作用;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot法检测rhddADAM15作用导致的p38MAPK激酶活性的变化.结果 rhddADAM15作用明显抑制B16细胞生长(IC50为13.80 mg·L-1),当浓度为7.5 mg·L-1时,侵袭细胞数较对照组减少了0.55,对B16细胞迁移的抑制作用与共培养的时间呈正比,主要将B16细胞生长阻滞在G2/M期;当rhddADAM15浓度为10 mg·L-1时,p38MAPK激酶的磷酸化程度达0.80.结论 rhddADAM15对B16细胞行为具有明显的抑制作用,其机制可能与激活p38MAPK信号通路有关.
-
原花青素对食管癌细胞的调节
目的 探讨原花青素对食管癌细胞的调节作用.方法 利用(o、10、20、40) μg·mL-1GSP处理细胞,用台盼蓝(Trypan Blue)法检测不同浓度GSP对正常食管细胞处理后的毒性作用;利用(0、10、20、40) μg·mL-1 GSP处理细胞,利用MTT法测定食管癌EC9706鳞癌细胞在体外情况下的增殖抑制水平;利用细胞划痕实验检测食管癌EC9706鳞癌细胞在体外情况下的侵袭迁移力.结果 不同浓度梯度的(0、10、20、40)μg·mL-1GSP对食管癌细胞无明显毒性作用;GSP以剂量依赖(0、10、20、40)μg·mL-的方式抑制A549细胞的增殖;GSP以剂量依赖(0、10、20、40、)μg·mL-1的方式下调细胞侵袭和迁移能力.结论 GSP毒副作用小,但是可有效抑制食管癌细胞的增值,同时也可以有效抑制食管癌细胞侵袭和迁移能力.
-
microRNA-424-5p对电离辐射的A549细胞侵袭和迁移能力的影响
目的 探讨microRNA-424-5p(miR-424-5p)在辐射诱导的A549细胞侵袭和迁移中的作用.方法 采用茎环RT-PCR检测辐照后A549细胞中miRNA的表达;Transwell小室实验检测A549细胞侵袭和迁移能力.结果 4Gy X射线照射诱导了A549细胞中miR-424-5p的表达;过表达miR-424-5p后,与对照组相比,A549细胞侵袭和迁移能力明显增强;导人外源性miR-424-5p抑制物后进行4 GyX射线照射,A549细胞侵袭和迁移能力明显减弱.结论 4GyX射线诱导了miR-424-5p的表达并促进了A549细胞的侵袭和迁移.本研究为未来进一步研究其分子作用机制奠定基础.
-
帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响
目的:研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制.方法:Western印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达.DJ-1 siRNA处理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidiumiodide,PI)双染检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平.结果:与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋白表达水平显著升高(均P＜0.05),其中U2OS细胞升高为显著(P＜0.01).DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P＜0.05).另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论:DJ-1可抑制人骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关.
关键词： 帕金森病相关蛋白DJ-1 人骨肉瘤细胞 增殖 凋亡 侵袭和迁移 -
eEF1A1通过正向调控NOB1的表达促进肝癌细胞的侵袭和转移
目的 探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)对肝癌侵袭转移的影响机制.方法 采用荧光定量PCR和Western blot法检测多种肝癌细胞系和正常肝脏细胞中eEF1A1和NI1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)的mRNA和蛋白表达.肝癌细胞中干扰和过表达eEF1A1后,通过Transwell侵袭实验和RTCA实验观察肝癌细胞侵袭迁移能力的变化,并观察肝癌细胞中NOB1 mRNA及蛋白表达变化.在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1,或在过表达eEF1A1的MHCC97h细胞中干扰NOB1的表达,分析eEF1A1和NOB1蛋白表达水平和细胞侵袭迁移能力.结果 肝癌细胞中eEF1A1和NOB1表达明显高于正常肝细胞,并呈正相关.肝癌细胞中干扰eEF1A1表达可明显降低肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时NOB1的mRNA和蛋白表达也显著被降低(P均<0.01);过表达eEF1A1后明显增加肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时也增加NOB1的mRNA和蛋白表达(P均<0.01).在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1导致NOB1表达和肝癌细胞侵袭迁移能力的恢复(P均<0.01);然而在稳定过表达eEF1A1的肝癌细胞系中降低NOB1导致NOB1表达的下调和肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制(P均<0.01).结论 肝癌细胞中eEF1A1正向调控NOB1表达,进而影响肝癌细胞的侵袭和迁移.
-
硫酸右旋糖酐抑制人胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用
目的 观察硫酸右旋糖酐(DS)对人胃癌细胞(AGS、BGC-823、MGC-803、SGC-7901)和正常胃黏膜细胞GES-1增殖、侵袭和迁移的影响;并探讨DS对人胃癌细胞(BGC-823)LOX表达的影响.方法 在低氧条件下,培养5种细胞(AGS、BGC-823、GES-1、MGC-803、SGC-7901),对照组和实验组分别用PBS和DS进行处理,通过CCK8实验方法检测5种细胞的增殖情况;采用Transwell侵袭和迁移实验比较DS对5种细胞侵袭和迁移过程的影响;用细胞免疫化学染色和western-blot检测LOX蛋白的表达.结果 CCK-8实验结果:24 h以后实验组AGS细胞明显比对照组减少;SGC-7901、BGC-823细胞在36 h,DS明显减小了细胞的数量;MGC-803细胞,实验组与对照组在每个时间点均无明显差异.Transwell迁移实验结果:与对照组相比,实验组DS明显减少了5种细胞穿膜细胞数.Transwell侵袭实验结果:相比对照组,实验组DS明显减少了穿膜细胞数,且对BGC-823细胞的侵袭抑制作用明显.细胞免疫化学染色结果:随时间的延长,对照组LOX蛋白表达量呈增加的趋势,实验组DS能够显著降低LOX的表达水平.与对照组相比,结果差异存在统计学意义,8 h(P<0.05),12、24 h(P<0.01),但2 h时,差异无统计学意义.Western-blot结果:对照组LOX蛋白表达随着时间的延长呈增加趋势,而DS能够显著降低LOX的表达(P>0.01).与对照组相比,结果显示部分差异具有统计学意义(8、12、24 h,P<0.05;2 h P>0.05).结论 (1)DS对细胞AGS、BGC-823、SGC-7901、GES-1的增殖有不同程度的抑制作用,抑制程度可能与分化程度有关,分化程度越高,抑制作用越强;(2)DS对5种细胞的迁移和侵袭能力有不同程度的抑制作用;(3)DS能降低人胃癌细胞(BGC-823)LOX蛋白的表达.
-
基因捕获技术在肝癌侵袭和迁移相关基因筛选中的应用
目的:用基因捕获技术在肝癌细胞SMMC7721细胞中寻找与肝癌侵袭和迁移相关的基因.方法:首先,将pU21质粒转染到肝癌细胞SMMC7721细胞,用G418筛选出单克隆稳定细胞系;其次,采用Transwell小室实验和划痕实验,检测这些单克隆细胞侵袭和迁移能力的变化;后,用5'-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测这些细胞系中被pU21质粒捕获的基因.结果:成功获得了约300株稳定转染pU21质粒的单克隆细胞系,得到了约30株侵袭和迁移能力增强的细胞株和约40株侵袭和迁移能力减弱的细胞株.通过5'-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测,证明了在A554细胞系中,被pU21质粒捕获的基因是long inter-genic non-protein coding RNA 52(LINC00052).结论:应用基因捕获技术筛选肝癌侵袭和迁移相关基因是可行的.
-
PKM2在TGF-β1诱导的食管癌细胞侵袭、迁移中的作用
目的 探讨丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)在转化生长因子 β1(TGF-β1)诱导的食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭 、迁移中的作用机制.方法 在细胞培养基中加入TGF-β1刺激ESCC细胞,以加入PBS的ESCC细胞作为Control组,检测其侵袭 、迁移能力及PKM2蛋白表达水平变化;在过表达PKM2的ESCC细胞中加入TGF-β1抑制剂,以加入PBS及TGF-β1抑制剂的ESCC细胞作为Control组,检测ESCC细胞侵袭 、迁移能力变化.结果 TGF-β1刺激ESCC细胞后,其侵袭 、迁移能力增强,PKM2蛋白水平表达增高,与Control组细胞比较差异有统计学意义(P<0.05);过表达PKM2减弱了TGF-β1抑制剂对ESCC细胞侵袭 、迁移能力的抑制作用,与Control组细胞比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 PKM2促进TGF-β1诱导的食管癌细胞侵袭 、迁移.
