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Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制
目的：研究骨肉瘤 MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶（TG2）的抗凋亡作用，探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法：设计针对TG2的siRNA，建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型，分为常氧组（细胞在常氧下培养）、单纯缺氧组（细胞在缺氧培养箱里培养）、对照 siRNA缺氧组（转染对照 siRNA后在缺氧培养箱里培养）和TG2 siRNA缺氧组（转染TG2 siRNA后在缺氧培养箱里培养）。观察各组骨肉瘤 MG-63细胞在缺氧培养不同时间（6、12、24、48和72 h）后 Bax和 Cyt C的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测 TG2活性， RT-PCR法检测TG2和Bax mRNA表达水平，免疫组织化学法检测TG2和 Bax蛋白在细胞内的分布， Western blotting法检测TG2、Bax和Cyt C蛋白表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与常氧组比较，单纯缺氧组和对照 siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2 mRNA和蛋白表达水平明显增强（P＜0.01），并随缺氧时间延长逐渐升高（P＜0.01）；Bax mRNA表达水平变化不明显（P＞0.05），但 Bax蛋白表达水平明显下降（P＜0.01），细胞胞浆和线粒体内Cyt C蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）。与单纯缺氧组和对照 siRNA缺氧组比较，TG2 siRNA缺氧组细胞各时间点 TG2 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.01），Bax mRNA表达水平无明显变化（P＞0.05），Bax蛋白表达明显增加（P＜0.01），胞浆内 Cyt C蛋白水平明显增加（P＜0.01），线粒体内Cyt C蛋白水平明显降低（P＜0.01），细胞凋亡率显著增加（P＜0.01）。结论：TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax，阻止Cyt C释放至胞浆，从而抑制肿瘤细胞凋亡。
关键词： 骨肉瘤 Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶 bcl-2 相关 x蛋白质 细胞色素C 细胞凋亡 -
缺氧条件下骨肉瘤MG-63细胞中TG2通过线粒体途径调节细胞凋亡的机制
目的 探讨缺氧条件下TG2在骨肉瘤MG-63细胞凋亡中的作用以及TG2通过阻止细胞色素C的释放和调节Caspase-3的表达及活性抑制细胞凋亡的机制.方法 建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,设立四组:(1)常氧组;(2)单纯缺氧组;(3)对照siRNA缺氧组;(4) TG2 siRNA缺氧组.观察各组在缺氧培养不同时相(6、12、24、48、72 h)骨肉瘤MG-63细胞TG2、Caspase-3表达、胞核和胞质细胞色素C的变化以及细胞凋亡率.结果 与常氧组比较,单纯缺氧组及对照siRNA缺氧组的TG2活性、mRNA及蛋白表达水平明显增强(P＜0.01),且随缺氧时间延长明显升高;Caspase-3活性未见明显增加,而Caspase-3及细胞质内细胞色素C蛋白的表达水平和细胞凋亡率轻度增加.与前三组比较,在TG2 siRNA缺氧组,当通过转染TG2 siRNA抑制TG2的表达时,Caspase-3的活性及胞质内细胞色素C蛋白表达水平明显增强(P＜0.01);细胞凋亡率也显著增加(P＜0.01).结论 缺氧条件下,MG-63骨肉瘤细胞TG2表达增强,并且可以阻止细胞核内细胞色素C向胞质释放,从而降低Caspase-3的表达及活性,抑制肿瘤细胞的凋亡.
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TG2过表达对人乳腺癌MCF-7细胞阿霉素耐药性的影响
目的:探讨Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶(TG2)过表达对人乳腺癌MCF-7细胞阿霉素耐药性的影响.方法:将MCF-7细胞分为3组:转染过表达TG2组(TG2组)、空白对照组(CON组)、阴性对照组(NC组).采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法和蛋白免疫印迹(western blot)法分别检测各组细胞TG2 mRNA和蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况,MTT法测定阿霉素对各组细胞处理后的半数抑制浓度(IC50).结果:TG2组TG2 mRNA相对表达量和蛋白的表达量较CON组、NC组显著升高,TG2组细胞凋亡率较CON组、NC组显著降低,TG2组IC50较CON组、NC组显著升高,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论:通过慢病毒转染成功使人乳腺癌MCF-7细胞TG2过表达,且TG2的过表达能增加人乳腺癌MCF-7细胞对阿霉素的耐药性,提示TG2有可能成为治疗肿瘤耐药的一个重要靶点.
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Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对缺氧骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响
目的 探讨缺氧条件下骨肉瘤MG-63细胞凋亡与Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶(TG2)表达的关系,以及TG2抗凋亡机制与细胞色素C和Caspase-3表达的关系.方法 建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,设立单纯缺氧组和TG2 siRNA缺氧组,缺氧培养时间为12 h,观察TG2活性、蛋白及mRNA水平,胞核、胞浆中细胞色素C和Caspase-3蛋白水平及细胞凋亡率.结果 单纯缺氧组胞核中TG2活性、蛋白及mRNA水平均显著高于TG2 siRNA缺氧组(P<0.05),而胞浆中比较,无显著差异(P>0.05);单纯缺氧组胞核中细胞色素C和Caspase-3蛋白水平显著高于TG2 siRNA缺氧组,胞浆中含量显著低于TG2 siRNA缺氧组(P<0.05);单纯缺氧组的细胞凋亡率显著低于TG2 siRNA缺氧组(P<0.05).结论 缺氧条件下TG2高表达有抑制MG-63骨肉瘤细胞凋亡作用,其机制可能与抑制胞核中细胞色素C和Caspase-3向胞浆中转移有关.
