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熊果酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响研究
目的 研究熊果酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制. 方法 以不同浓度熊果酸(40、20、10 μg/mL)和顺铂(40 μg/mL)干预对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞;采用噻唑蓝比色法测定细胞增值抑制率,通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)mRNA、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia,bcl-2)mRNA的表达,采用免疫印迹法(western blotting,WB)检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达. 结果 经熊果酸干预48小时能够显著提高人骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率,延长细胞周期G0/G1期并缩短G2/M期,提高细胞凋亡率(apoptosis index,AI),上调Bax mRNA表达并下调bcl-2 mRNA表达、提高Bax/bcl-2比值,上调caspase-3蛋白表达,熊果酸上述作用具有一定的剂量依赖性. 结论 熊果酸具有抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与熊果酸能够阻滞细胞周期以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关.
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大豆异黄酮对成骨肉瘤细胞株MG-63增殖活性的影响
本实验采用MTT法检测了不同浓度的大豆异黄酮对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖活性的影响.结果 表明大豆异黄酮可以抑制MG-63细胞的增殖,具有剂量效应关系.
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高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制的研究
目的 观察高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响并探讨其机制.方法 体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,给予不同浓度的高良姜素处理24h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡,Western blot分析Caspase-3、Cytochrome C及Bcl-2蛋白表达.结果 高良姜素可导致人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡并抑制其增殖,其作用具有浓度依赖性,在80mM为显著；同时可改变细胞周期分布.与对照组相比,80mM高良姜素处理24h后MG-63细胞活力降低、凋亡率增加(P＜0.01 ) G0/G1期百分比增高,S+G2+M期百分比降低(P＜0.01)Caspase-3、CytochromeC表达增加,Bcl-2表达降低(P＜0.01).结论 高良姜素可诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡、抑制其增殖,并改变细胞周期分布,其作用与线粒体途径相关.
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雌二醇诱导人成骨样细胞差异表达基因筛查
目的快速筛查17β雌二醇(E2)诱导人成骨肉瘤MG-63细胞株差异表达cDNA片段,寻找雌激素相关基因.方法改良cDNA代表性差异分析法(cDNA RDA)分离E2干预MG-63细胞株表达上调cDNA片段,Southern杂交证实后,制备阵列膜行点杂交,然后挑取阳性差异克隆测序,经同源比较分析,后选取部分克隆标记探针行Northern印迹杂交.结果经过4轮消减和动力性富集后得到5个E2诱导人成骨肉瘤MG-63细胞表达上调的差异cDNA条带,Southern 杂交证明这些表达上调的cDNA片段来自E2干预的MG-63细胞;共得到600余个含有阳性插入片段的cDNA克隆,点杂交筛查得到120个差异表达克隆.选20个克隆测序得到15个序列,其中1个经Northern杂交证实E2干预后表达上调.结论 cDNA RDA能有效筛查差异表达cDNA片段,联合cDNA阵列点杂交可快速筛查差异表达基因,E2诱导人成骨肉瘤MG-63细胞某些基因表达上调.
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人骨肉瘤细胞系MG-63细胞抗失巢凋亡生物学特性的研究
目的 研究人骨肉瘤细胞系MG-63是否具有抗失巢凋亡的牛物学特性.方法 用poly-HEMA制备细胞悬浮培养皿,以MCF-7细胞、血管内皮细胞(VEC)分别作为阳性和阴性对照,通过DNA Ladder、软琼脂集落形成实验以及AnnexinV-FITC/PI双标染色检测MG-63细胞抗失巢凋亡的特性.结果 DNA Ladder发现悬浮培养MG-63和MCF7细胞没有出现细胞凋亡中典型的梯度;软琼脂集落形成实验观察到MG-63和MCF7细胞能在琼脂培养基中形成逐渐增大的集落;AnnexinV-FITC/PI双标染色显爪悬浮培养MG-63和MCF7细胞凋亡率明显低于VEC细胞(P<0.01).结论 Mc-63细胞具备抗失巢凋亡的生物学特性.
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GLP-1受体激动剂艾塞那肽对MG-63细胞增殖及成骨分化的影响
目的 探讨GLP-1受体激动剂艾塞那肽(Exenatide)对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖及成骨分化的作用.方法 将MG-63细胞制成单细胞悬液,接种于细胞培养板,分别用不同浓度的艾塞那肽(0 mol/L、10-9 mol/L、10-8 mol/L、10-7mol/L)处理细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测MG-63细胞增殖率,并将艾塞那肽处理后的细胞裂解并取上清,使用碱性磷酸酶测定试剂盒测定AKP活力.结果 (1)艾塞那肽可促进MG-63细胞增殖(P＜0.05),但随着GLP-1受体激动剂浓度升高,细胞增殖程度降低(P＜0.05),低浓度的艾塞那肽(10-9 moL/L)促增殖能力强.(2)艾塞那肽不同浓度处理后各组AKP活力增加(P＜0.05),而且低浓度的艾塞那肽(10-9 mol/L)升高AKP活力明显(P＜0.05).结论 艾塞那肽能促进人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖及成骨分化,且低浓度的艾塞那肽(10-9 mol/L)促增殖分化能力强.
关键词： 胰高血糖素样肽-1受体激动剂 MG-63细胞 细胞增殖 成骨分化 -
小干扰RNA抑制MG-63细胞cyclin A2基因的表达
目的 利用小干扰RNA(siRNA)抑制骨肉瘤及正常成纤维细胞中cyclin A2基因的表达,并观察其对细胞生物活性的影响.方法 设计并化学合成3对针对cyclin A2基因的siRNA,用Oligofectamine分别将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞HSF中,以无义siRNA转染作为阴性对照;以real-time PCR、Western blot检测cyclin A2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、克隆培养等方法评价抑制cyclin A2基因表达后细胞的生长状态,同时检测PCNA及cyclin B1表达的改变.结果 3对siRNA均能使cyclin A2 mRNA的表达降低,其中siRNA1抑制率高.在骨肉瘤细胞MG-63中,转染50 nmol/L的siRNA1 48 h后,cyclin A2的mRNA及蛋白表达被抑制近80%,这导致细胞增殖抑制,80.1%的细胞被阻滞在G0/G1期,克隆形成能力下降至45.5%,同时,PCNA及cyclin B1的mRNA表达明显降低.对正常成纤维细胞HSF,虽然siRNA1能抑制近60%的cyclin A2 mRNA及蛋白表达,但细胞的增殖及克隆形成能力未受影响.结论 针对cyclin A2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclin A2 mRNA及蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞的生长,而对正常细胞影响不大.表明cyclin A2是骨肉瘤细胞增殖所依赖的关键基因,抑制其表达有望成为治疗骨肉瘤的新途径.
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流体剪切应力对模拟微重力下MG-63细胞骨架系统的影响
目的 观察水平回转模拟微重力( modeled microgravity,MMG)后人骨肉瘤MG-63细胞受流体剪切应力(flow shear stress,FSS)作用后细胞骨架的改变,探讨模拟微重力情况下骨质丢失的细胞学机制.方法 MG-63成骨细胞采用回转器水平回转培养48 h模拟微重力效应,同时设静止培养为对照组.之后,细胞随机分为两组,一组利用流室系统实施FSS,FSS设为1.5 Pa,作用时间60 min,另一组无FSS作用.细胞经过免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架系统的变化.结果 FSS作用后,MG-63细胞微丝和微管的形态和分布均发生变化,微丝可见多束状排列,荧光强度增强,出现粗的应力纤维；微管可见其极性中心移向细胞质外缘,细胞外层荧光量加重,有少量束状结构出现.MMG后,MG-63细胞的细胞骨架发生解聚和重排,微丝向核周集聚；微管发生断裂,变短,弯曲等变化.MMG后,再给予FSS刺激,微丝未能形成应力纤维,仅见微丝、微管在应力方向有拉长.结论 1.5 Pa,60 min流体剪切应力未能在回转模拟微重力后成骨细胞内诱导形成应力纤维.
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虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究
目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制.方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hesl蛋白表达的影响.结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G0/G1期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hesl蛋白的表达.结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关.
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氟化钠对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响
目的 探讨氟化钠(NaF)对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响.方法 以0、10-2、10-1、1、10、102、5×102、103、5×103、104、2×104、4×104 μmol/L NaF染毒MG-63细胞,培养48 h.采用MTI实验观察NaF对MG-63细胞增殖能力的影响,以流式细胞技术检测MG-63细胞周期变化.结果 MTr实验结果显示,MG-63细胞开始有增殖活性时的NaF浓度为102 μmol/L,增殖活性大时的浓度为5×103 μmol/L,增殖活性受到抑制时的浓度为2×104 μmol/L.流式细胞技术检测结果显示,采用MTT实验中确定的3个关键浓度染毒细胞48 h后,高剂量(2×104 μmol/L)组的MG-63细胞凋亡率高(6.001％),细胞增殖指数(PI)低(0.339)；中剂量(5×103μmol/L)组的细胞凋亡率低(2.220％),PI高(0.632)；低剂量(102 μmol/L)组的PI及细胞凋亡率均与对照组无明显差异.结论 NaF对成骨细胞具有双向作用,低浓度下促进细胞增殖,超过一定浓度后因其增殖抑制而使细胞凋亡增加.
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miR-124靶向Sp1对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控
目的 探讨miR-124是否能够通过靶向抑制Sp1基因调控入骨肉瘤MG-63细胞的增殖.方法 利用荧光素酶报告基因实验验证Spl基因是否为miR-124的靶基因,应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-124 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞Sp1 mRNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化.结果 荧光素酶报告基因实验证实Sp1基因为miR-124的靶基因.与对照组相比,转染miR-124 mimics后,MG-63细胞Sp1 mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显下降(P＜0.01);与对照组相比,转染miR-124 inhibitor后,MG-63细胞Sp1mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显升高(P＜0.01).结论 miR-124抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖可能与靶向Sp1基因相关.
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miR-21靶向FasL对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控
目的 探讨miR-21是否能够通过靶向抑制FasL基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖.方法 利用荧光素酶报告基因实验验证FasL基因是否为miR-21的靶基因,应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-21 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞FasL mRNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化.结果 荧光素酶报告基因实验证实FasL基因为miR-21的靶基因.与对照组相比,转染miR-21 mimics后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显升高(P＜0.01);与对照组相比,转染miR-21 inhibitor后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显降低,P＜0.01.结论 miR-21可能通过靶向FasL基因促进人骨肉瘤MG-63细胞增殖.
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miR-124靶向调节STAT3基因对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨miR-124及STAT3在骨肉瘤组织中的表达, 以及miR-124对骨肉瘤MG-63细胞增殖和侵袭的影响.方法 Real-time PCR法检测67例患者骨肉瘤组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达, 免疫组织化学方法检测STAT3蛋白的表达.使用脂质体将miR-124抑制剂及miR-124模拟物转染至骨肉瘤MG-63细胞株, 以无关序列作为阴性对照.Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化, 采用MTT方法与Transwell实验检测转染后MG-63细胞的增殖侵袭能力变化.结果 miR-124在骨肉瘤组织中的表达明显低于癌旁组织 (P＜0.01);STAT3蛋白在骨肉瘤组织中的表达明显高于癌旁组织 (P＜0.01);转染miR-124抑制剂的MG-63细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高, 细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高;转染miR-124模拟物后则得到相反的结果 (P＜0.01) .结论 miR-124抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关.
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生物活性牙本质替代物Biodentine对MG-63细胞增殖及成骨作用的影响
背景:生物活性物质Biodentine具有良好的抗压强度、粘接强度及较少的微渗漏等诸多优点,已被成功应用于多种临床适应证,然而有关Biodentine是否可促进成骨细胞成骨的研究罕见.目的:研究不同浓度Biodentine对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及成骨作用的影响.方法:制备不同浓度梯度(1、1/2、1/4、1/8和1/16)的Biodentine浸提液.将人骨肉瘤细胞MG-63分6组培养,分别加入MEM 培养液(对照组)及5种浓度的Biodentine浸提液,采用CCK-8法检测培养第1,3,5, 7天的细胞增殖,筛选Biodentine浸提液佳浓度.将人骨肉瘤细胞MG-63分2组培养,分别加入MEM 培养液(空白对照组)及佳浓度的Biodentine材料浸提液(实验组),培养第1,3,5,7天,采用Real-time PCR法检测细胞中成骨因子Runx2 mRNA表达;培养第10,14天行茜素红染色,观察细胞钙化结节形成情况.结果与结论:①培养第 1,3 天时,不同浓度 Biodentine 材料浸提液组活细胞数量与对照组相比无差异;培养第5天,1浓度材料浸提液组活细胞数量明显低于对照组(P ＜ 0.05),1/2、1/4、1/8浓度材料浸提液组活细胞数量与对照组比较无差异,1/16 浓度材料浸提液组活细胞数量明显高于对照组(P ＜ 0.05),因此实验选择1/16浓度材料浸提液进行后续实验;②实验组培养第1,3,5,7天的Runx2 mRNA表达量分别为空白对照组的1.14,5.29,1.08,2.11倍(P均＜ 0.05);③培养第10天时,实验组与空白对照组均未见矿化结节;培养第14天,两组均可见矿化结节,实验组的面积更大、颜色更深;④结果表明在一定浓度下,Biodentine可促进人骨肉瘤细胞MG-63增殖及成骨活性.
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凤尾草总黄酮抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移及其机制的初步研究
目的:观察凤尾草总黄酮对人骨肉瘤MG-63细胞体外迁移能力的影响,并探讨其作用机制.方法:利用乙醇萃取法制备凤尾草总黄酮,通过划痕实验、Transwell实验观察不同浓度凤尾草总黄酮对同样条件培养下骨肉瘤MG-63细胞迁移能力的影响,并采用Western blot方法检测不同浓度凤尾草总黄酮对MG-63细胞内白介素6(IL-6)蛋白表达水平的影响.结果:同未加药物对照组相比,经高浓度凤尾草总黄酮(5与10 g·L-1)处理后,MG-63细胞的划痕愈合能力明显减弱,穿膜细胞的数量显著减少；同时,细胞内IL-6蛋白的表达水平明显降低,并与凤尾草总黄酮的浓度呈负相关性.结论:凤尾草总黄酮抑制了骨肉瘤MG-63细胞的迁移能力,其作用与抑制MG-63细胞内的IL-6蛋白表达水平有关.
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雌二醇诱导人成骨样MG-63细胞表达下调基因的筛查
目的 筛查17 β雌二醇(E2)诱导MG-63细胞下调表达cDNA片段,寻找MG-63细胞中E2相关基因,探讨雌激素的骨保护作用机制.方法 用改良cDNA代表性差异分析法筛查E2干预MG-63细胞表达下调的cDNA片段,Southern杂交和快速Northern杂交分析cDNA片段来源后,克隆到pGEM-T easy载体,蓝白筛选挑取阳性克隆进行测序和同源性比较分析.后选取部分阳性差异表达克隆行Northern杂交分析.结果 得到2个表达下调的cDNA条带,证实差异表达cDNA片段经E2干预后表达下调.随机挑取20个克隆测序得到19个序列,分别代表14个不同基因,均与已知基因高度同源,这些基因与骨基质形成、转录信号转导及细胞分化发育调节等相关,其中1个克隆经Northern杂交证实其受E2干预表达下调.结论 cDNA代表性差异分析法可快速筛查差异表达基因.MG-63细胞受E2诱导下调表达的部分基因可能参与了雌激素介导的骨重建过程从而起到骨保护作用.
关键词： cDNA代表性差异分析法 雌激素 MG-63细胞 基因 -
褪黑素对骨肉瘤MG-63细胞的增殖和抑制作用的体外实验研究
目的:研究褪黑素对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖和抑制作用.方法:不同浓度的褪黑素作用于体外培养的MG-63细胞,倒置显微镜下观察MG-63细胞的形态学变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度褪黑素对MG-63存活率,细胞计数试剂8(CCK-8)法检测褪黑素对MG-63细胞增殖抑制能力,Annexin V/PI双染法标记检测细胞凋亡情况以及黏附实验测定细胞黏附能力和培养液中LDH释放量的检测.结果:MTT法检测经褪黑素作用后的MG-63细胞存活率以及细胞黏附能力明显下降,LDH的增加提示MG-63细胞死亡率上升；褪黑素可抑制骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖,5mmol/L的褪黑素对MG-63细胞诱导凋亡作用明显,不同浓度的褪黑素之间实验结果具有统计学意义.结论:褪黑素能够诱导MG-63细胞凋亡,降低存活率,抑制细胞增殖,是治疗骨肉瘤潜在的靶向药物.
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维甲酸对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响
目的:研究维甲酸对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响,以探索其对成骨肉瘤细胞的生物学效应.方法:以1μmol/L维甲酸处理人成骨肉瘤MG-63细胞,生长曲线测定,流式细胞仪分析、光镜观察和免疫细胞化学检测等研究维甲酸对MG-63细胞的生长曲线、细胞周期和相关癌基因、抑癌基因表达的影响,并对其作用机理进行初步分析.结果:维甲酸处理7天后,MG-63细胞生长抑制率达到42.2%,G0/G1期比例达到61.8%,细胞形态铺展,排列趋于规则,癌基因c-myc、c-fos的表达降低.而抑癌基因Rb、p27表达上调.结论:1μmol/L维甲酸可以有效抑制细胞的增殖活动,改变细胞恶性形态特征,下调癌基因c-myc、c-fos和上调抑癌基因Rb、p27的表达,从而对人成骨肉瘤细胞分化具有诱导作用.
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亚砷酸和顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用比较
目的 观察亚砷酸和顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用.方法 采用细胞培养的方法,体外培养人骨肉瘤株MG-63细胞.应用倒置相差显微镜、透射电镜、四氮唑盐(MTT)比色、流式细胞仪检测等方法,观察亚砷酸和顺铂[各加入100μl(1 g/L)]对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用和对细胞凋亡、细胞周期的影响.结果 相差显微镜下,对照组MG-63细胞贴壁生长良好,细胞核呈圆形,细胞呈上皮样细胞排列;亚砷酸组MG-63细胞排列无规则,有细胞死亡;顺铂组MG-63细胞多变小,变圆,胞质的空泡化明显.电镜下,对照组MG-63细胞表面可见球形质膜突起,线粒体嵴粗大,双层核膜结构清晰;亚砷酸组MG-63细胞表面的球形突起消失,线粒体嵴变细,细胞核缩小,凋亡细胞核膜清晰;顺铂组MG-63细胞表面球形突起脱离,细胞核膜增厚,核内染色质形成细纱状.亚砷酸和顺铂均能抑制MG-63细胞生长,抑制率(%)组间比较差异有统计学意义(F=78.859,P<0.05);在2、4、8、16、32、64、128 h,亚砷酸(56.31±0.03、70.00±0.06、79.84±0.03、87.31±0.13、84.70±0.09、90.68±0.06、91.18±0.05)和顺铂(7.55±0.15、15.70±0.17、30.72±0.07、49.80±0.05、45.11±0.13、61.62±0.08、93.80±0.12)对细胞生长的抑制率与对照组(2.03±0.07、2.78±0.08、3.11±0.01、5.67±0.04、12.23±0.04、18.65±0.04、24.45±0.04)比较明显升高(P均<0.05);但与顺铂比较,亚砷酸起效快,在2～32 h抑制率明显高于同时间顺铂(P均<0.05).亚砷酸和顺铂均可导致MG-63细胞凋亡,凋亡率组间比较差异有统计学意义(F=13.317,P<0.05);亚砷酸在24、36、48 h(20.5±3.78、45.76±9.90、25.16±15.41),顺铂在24、36、48 h(12.55±1.51、18.85±3.40、12.37±5.43),MG-63细胞凋亡率(%)明显高于同时间对照组(6.57±1.48、8.03±2.08、6.54±1.30,P<0.05或<0.01).亚砷酸和顺铂均对MG-63细胞周期G1、S、G2/M期有抑制作用,抑制率组间比较差异有统计学意义(F值分别为54.579、43.429、21.795,P<0.05或<0.01);对G1期抑制率(%)亚砷酸(78.26±5.24)和顺铂(80.48±2.81)与对照组(57.49±6.65)比较明显升高(P<0.05或<0.01).结论 亚砷酸和顺铂都可抑制骨肉瘤MG-63细胞生长,诱导细胞凋亡;亚砷酸作用快于顺铂,亚砷酸和顺铂对MG-63细胞的抑制作用发生在细胞周期中的G1期.
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莪术醇诱导入骨肉瘤MG63细胞自噬的实验研究
目的 观察莪术醇对人骨肉瘤MG-63细胞自噬性凋亡的作用.方法 体外人骨肉瘤MG-63细胞单独或和莪术醇共同培养,MTT法检测莪术醇对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制作用;FITC-annexin V/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡;PI和hochest33258活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;EGFP-LC3b细胞转染,荧光显微镜观察细胞自噬;微管相关蛋白1轻链3-β (LC3)蛋白和自噬相关蛋白Beclin-1表达水平用Western blotting方法分析.结果 MTF检测显示莪术醇可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,并具有浓度-时间依赖性;流式细胞术检测显示莪术醇可显著诱导MG-63细胞凋亡;活细胞荧光染色显示MG-63细胞核凝聚并碎裂成小体;细胞质内凝集荧光增强;LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ蛋白比值,Beclin-1蛋白表达明显增强;自噬抑制剂3-MA可明显逆转上述现象.结论 莪术醇能明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,其机制主要是通过诱导自噬性凋亡.
