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多发性骨髓瘤患者外周血清中microRNA-181a和microRNA-20a表达水平的检测及其临床意义
目的:检测多发性骨髓瘤(MM)患者外周血血清中microRNA-181a和microRNA-20a表达水平,探讨microRNA-181a和microRNA-20a在MM发病过程中的临床意义.方法:选取2013年1月-2014年5月西安交通大学第一附属医院血液科住院患者作为病例组研究对象,其中MM组32例,其他血液病组12例,所有研究对象均符合《血液病诊断和疗效标准》中诊断标准且均经临床医师确诊,并排除心、肺、肝脏等其他器官衰竭且病情稳定者.同时选取同期20名健康体检者作为正常对照组.收集各组研究对象的外周血标本,采用实时荧光定量PCR方法检测血清中microRNA-181a和microRNA-20a表达情况,同步检测血清β2微球蛋白(β2-MG)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)水平、游离轻链(FLC)水平及M蛋白百分比,并比较其差异.结果:MM组、其他血液病组和正常对照组研究对象血清中microRNA-181a和microRNA-20a表达水平分别为0.0452和5.879、0.000和0.072、0.004和1.159,3组间比较差异有统计学意义(H=15.218,9.891; P=0.000,0.007).MM组患者血清中microRNA-181a和microRNA-20a表达水平与正常对照组比较差异有统计学意义(Z=-2.702,-1.979; P=0.005,0.048),MM组与其他血液病组比较差异也有统计学意义(Z=-3.163,-2.722; P=0.001,0.005);microRNA-181a和microRNA-20a表达水平均与M蛋白百分比呈正相关关系(r=0.574,0.739; P=0.032,0.003); miR-181a表达水平与肿瘤负荷指标β2-MG和FLC呈正相关关系(r=0.552,0.780; P=0.041,0.001).结论:MM患者血清中microRNA-181a和microRNA-20a高表达,其可能参与MM的发病过程,有望成为MM诊断标志物;其中microRNA-181a可能作为判断MM患者预后不良的指标.
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miR-181a吸附海绵载体改善肝细胞胰岛素抵抗作用研究
目的：构建对肝癌细胞系 HepG2中内源性成熟miR‐181a具有的抑制作用的特异性吸附海绵载体（miR‐181a‐sponge），验证其在葡萄糖胺诱导的 HepG2细胞胰岛素抵抗模型中改善胰岛素敏感性的作用。方法：针对成熟人源 miR‐181a的序列，设计在9‐12位发生突变的反义序列，并重复7个拷贝，串联至pEGFP‐C2真核表达载体及pGL3‐Promoter载体中，通过双荧光素酶报告基因系统验证该吸附海绵的效果；同时在葡萄糖胺诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型中转染miR‐181a吸附海绵载体，检测细胞对胰岛素刺激的应答效果。结果：pEGFP‐C2‐181a‐SP载体可以成功的在细胞中表达，其绿色荧光呈阳性。双荧光素酶报告基因系统显示，pEGFP‐C2‐181a‐SP载体可以显著抑制外源性miR‐181amimics的活性（P＜0．05）。Western blot结果显示转染pEGFP‐C2‐181a‐SP载体可以改善葡萄糖胺诱导的 HepG2胰岛素抵抗细胞模型对胰岛素的应答。结论：miR‐181a吸附海绵载体策略可以成功的诱导吸附miR‐181a ，构建的pEGFP‐C2‐181a‐SP载体基因显著增加HepG2细胞的胰岛素敏感性，为改善miR‐181a导致的肝细胞胰岛素抵抗提供了潜在的解决方案，有可能成为2型糖尿病治疗的新策略。
