首页 > 文献资料
-
Rho激酶抑制剂用于脑损伤治疗的初步实验研究
目的：探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对神经干细胞增殖分化的影响。方法：分离培养大鼠神经干细胞并进行鉴定，设置对照组、LPA组、Y27632组，连续培养2周，观察细胞单克隆个数、单克隆形成率、Ki67和GFAP的基因表达量及蛋白质表达水平。结果：分离培养的神经干细胞经免疫荧光检测Nestin、CD133均为阳性；软琼脂实验发现，LPA组单克隆个数及单克隆形成率较对照组及Y27632组显著升高（P＜0.05），而Y27632组的单克隆个数及单克隆形成率与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）；荧光定量及Western blotting结果显示，与对照组相比，LPA组GFAP基因表达量没明显变化（ P＞0.05），Ki67基因表达量升高（ P＜0.05），而Y27632组GFAP基因表达水平显著升高（ P＜0.05），而Ki67基因表达无变化（ P＞0.05）。结论：Rho激酶抑制剂Y27632可提高体外培养神经干细胞的GFAP表达水平，对于损伤神经细胞的修复具有重要作用。
-
Y27632条件培养基体外扩增口腔黏膜上皮细胞
目的：通过优化条件培养基用于非牙源性上皮细胞的体外扩增，为进一步开展组织工程牙提供上皮种子细胞来源奠定基础。方法：获取出生后1 d C57BL 鼠原代口腔黏膜上皮细胞，接种于含有 Y27632的上皮条件培养基的培养瓶内。细胞长满后，消化传代，采用条件培养基与3T3饲养层细胞共培养进行扩增并连续传代，观察细胞生长情况及连续传代后的生物学特性，免疫组织化学进行干细胞鉴定。结果：与传统上皮细胞培养方式相比，含 Y27632的条件性培养基加3T3饲养层方式培养的上皮细胞生长迅速，细胞呈立方形或多角形，呈铺路石样排列。免疫组织化学染色表明这些干细胞表达 CK14，SOX2和LGR5。连续传代至第7代后，细胞形态、生长曲线和干细胞标志没有明显变化。结论：含有 Y27632的条件培养基可有效用于体外大量扩增非牙源性上皮细胞，并能保持干细胞生长特性，有望用于组织工程牙的种子细胞来源。
-
RhoA/Rho激酶在氟伐他汀对组织因子表达影响中的调控作用
目的 研究RhoA/Rho激酶在氟伐他汀(fluvastatin,Flu)影响组织因子蛋白表达过程中的调控作用,探讨氟伐他汀在抗动脉粥样硬化血栓形成作用的新靶点.方法 将同一簇人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株进行培养、传代后,分设对照组、肿瘤坏死因子α(TNF-α)组、Flu组及干预组(TNF-α+ Flu组),采用RT-PCR方法测定组织因子( tissue factor,TF) mRNA表达水平,用Western blot方法测定TF蛋白表达和RhoA的活化水平；随后,以血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)、Y27632为干预因素,再分设空白对照组、TNF-α+ AngⅡ组、AngⅡ组、TNF-α组、TNF-α+Y27632组,采用Western blot方法测定TF蛋白表达水平.结果 TNF-α在诱导HUVEC TF表达的同时,可使RhoA活化,氟伐他汀可抑制TF表达与RhoA活化；AngⅡ可促进TNF-α诱导的HUVEC TF蛋白表达水平,而Y27632可抑制TNF-α诱导的HUVEC TF蛋白表达水平.结论 RhoA/ Rho激酶通路在G蛋白水平上参与了氟伐他汀抑制组织因子表达的调控机制.
