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大鼠骨髓间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化过程中小窝蛋白-1表达增强
目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向血管平滑肌细胞(VSMCs)分化过程中小窝蛋白-1(caveolin-1)的表达变化.方法 采用全骨髓培养法,体外分离培养SD大鼠BMSCs,成骨成脂成软骨检测干细胞的分化潜能,流式细胞仪鉴定干细胞表面标志物.体外TGF-β1诱导BMSCs向VSMCs分化,Western blot检测SM-MHC、SM22α、caveolin-1和myocardin的表达.结果 BMSCs在TGF-β1诱导下可分化为VSMCs,诱导培养组细胞caveolin-1、SM-MHC及myocardin表达的水平随诱导时间的增加而增强(P<0.05).结论 BMSCs体外诱导可以分化为VSMCs,小窝蛋白-1与干细胞来源的VSMCs的形成有关.
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间充质干细胞分化潜力与免疫调节的研究
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于成体间质组织中的一类多能干细胞群体,早是从骨髓组织中分离得到的,随后的研究发现从其他多种组织中也能分离得到,例如脂肪组织、脐带、胎盘等.它具有两个重要的生物学特征,即多能性和免疫调节能力.多年的研究显示,间充质干细胞在体外适当条件下可以大量扩增,并保持它向多种组织类型细胞分化的潜能,例如成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肝细胞、肠道上皮细胞、以及神经组织细胞.对间充质干细胞免疫调节能力的研究显示,间充质干细胞可以对免疫系统的多种类型功能细胞的增殖、功能等产生影响,研究多的是对免疫系统的核心抗原提呈细胞树突状细胞和淋巴细胞产生影响.
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新型全肝脏去细胞化流程对细胞外基质及细胞组分残留量影响的研究
组织工程中去细胞化支架的构建,存在着保留细胞外基质和完全去除供体细胞成分的矛盾,如何评价去细胞化流程的效果是解决的关键.本研究采用以TritonX-100为主,辅助以SDS、酶学法、物理冻融法、高低渗法等方法的新型全肝脏去细胞化流程制作去细胞支架,通过免疫组化及电镜观察支架形态结构,ELISA法检测细胞外基质各组分含量,吸光度及Western-blotting法检测供体细胞组分残留量,免疫荧光法检测支架内三维循环培养诱导WBF-344细胞分化.结果表明,该流程很好的保留了胶原蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白等细胞外三维结构；氨基聚糖、HGF、VEGF等细胞外基质保存量分别达正常组织的90％及40％；基本去除残留DNA的同时,相比SF.Badylak et al.法,细胞残留组分量如GAPDH、MCH-I及HMGB-1明显下降,仅为正常组织的10％；WBF-344细胞在支架培养系统内生长良好,白蛋白表达逐渐增强.本研究成功构建了新的、较完善的去细胞化支架制作与评价体系,为干细胞分化在肝脏疾病治疗找到一种新的应用模式,
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人骨髓间充质干细胞在脊髓损伤模型大鼠体内的存活与分化研究
目的 观察人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)在脊髓损伤大鼠体内存活与分化情况.方法 采用全骨髓贴壁培养法,分离来自hBMSCs并进行流式细胞鉴定.制作大鼠脊髓半横断模型,按照实验分组为单纯损伤组与hBMSC移植组.6周后处死大鼠,用免疫荧光方法观察移植的hBMSCs在大鼠体内的存活及分化情况.结果 本研究中所使用hBMSCs呈CD44,CD73,CD90和CD105阳性,CD11b、CD19、CD34和CD45表达为阴性.动物体内实验表明,移植后6周,免疫荧光激光共聚焦观察到由5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记的、存活的移植hBMSCs.移植的hBMSCs部分显示BrdU+/NeuN+与BrdU+/GFAP+的表达,与对照组相比较有显著性差异.结论 移植到大鼠脊髓损伤部位的hBMSCs在局部存活并有分化成为神经元以及神经胶质细胞的潜能,为hBMSCs移植治疗脊髓损伤的临床应用提供理论依据.
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骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌样细胞的研究进展
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具有自 我更新、多向分化潜能及有独特免疫调节特性的异质细胞群[1] .近年,相继从骨髓、脂肪、外周血、脐血及脐带组织中获得 MSCs[2] .已有研究表明,MSCs 来自中胚层间充质,在特定的诱 导条件下,具有跨越胚层界限,分化为外胚层、内胚层来源细胞 的潜能[1-3] .糖尿病是胰岛素相对或绝对缺乏引起的内分泌代 谢性疾病,胰岛移植是有效的治疗方法,但面临供体缺乏及免疫 排斥反应.随着对MSCs 生物学特性的认识,研究人员尝试获取 低免疫原性的MSCs 源性胰岛素分泌样细胞(insulin-producing cells,IPCs;或insulin secreting cells,ISC;或pancreatic hormone-ex- pressing islet-like cell aggregates,ICAs)来恢复受损的胰岛β细 胞,重建内源性胰岛素分泌系统[4] .本文就近年骨髓源MSCs 分 化为胰岛素分泌样细胞的研究进行综述.
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microRNA与胰腺发育以及干细胞分化的研究进展
microRNA(miRNA)是一类参与基因转录后调控的非编码小分子RNA,其在胚胎发育、细胞命运决定、生长调控等方面发挥重要作用.业已证实,一些特定的miRNA通过靶向调控某些胰腺发育相关的重要转录因子而参与胰腺胚胎发育过程.通过模拟体内胰岛发育过程,可将干细胞在体外诱导定向分化为胰岛素分泌细胞.此外,miRNA在干细胞的维持和分化中也可能具有调控作用.因此,miRNA在胰腺发育和干细胞分化中的作用及其机制值得深入研究,这将为胰岛功能重建治疗糖尿病策略提供新的思路.
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血管内皮细胞与胰岛发育和干细胞分化的关系
血管内皮细胞是构成胰岛微环境的重要组成部分.内皮细胞参与胰腺的发生、胰腺内分泌细胞的分化和增殖、胰腺的空间分布等各个方面,其作用贯穿于胰腺的整个发育过程.不同状态的内皮细胞在不同的作用时间窗所起的作用不同,可影响内皮细胞与胰岛细胞之间的信号交联,进而影响胰腺内分泌细胞的分化、胰岛的形态及其功能.内皮细胞可分泌肝细胞生长因子、1-磷酸-鞘氨醇等细胞因子,并且可产生层黏连蛋白、Ⅳ型胶原等细胞外基质成分,这些分子在胰岛的发育和功能调控中发挥重要作用.此外,内皮细胞还可参与调控干细胞的自我更新和定向分化.内皮细胞在促进干细胞向胰岛细胞分化方面的作用是糖尿病再生医学领域备受关注的研究方向.
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肠道L细胞的研究进展
L细胞作为肠道内分泌细胞的一种,零散分布于胃肠道,分泌胰高血糖素样肽-1( GLP-1)、胰高血糖素样肽-2( GLP-2)、多肽YY( PYY)等多种重要的肽类激素,可以促进胰岛素分泌、控制食欲,有利于控制血糖和体质量.近年研究显示,2型糖尿病患者存在GLP-1分泌受损,以GLP-1为基础的药物已应用于2型糖尿病的临床治疗.本文着重介绍有关L细胞的研究进展.一、L细胞的来源、形态学特征和分布规律研究显示,包括肠道内分泌细胞在内的四种肠道上皮细胞均由小肠隐窝内的多潜能干细胞分化而来[1].一些生理和药理物质(福斯高林、伊屋诺霉素等)均可刺激隐窝细胞分泌GLP-1和PYY,提示L细胞来源于肠道隐窝细胞[2].人L细胞分布在整个肠道,数量从小肠近端向大肠远端逐渐增加.疾病状态下,L细胞的形态、分化过程和分布规律有何变化尚待研究.
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获得组织再生需要细胞类型的多种途径
创伤与一些慢性疾病均可导致组织器官的功能障碍,组织再生存在极大的社会需求[1～4].组织再生的核心问题是如何获取充足的目的细胞.基于现实的研究基础,从获得的策略上讲,可以分为3个层面:①具有多向分化能力的干细胞分化为特定组织细胞类型;②诱导已分化细胞发生去分化,使其再次进入细胞周期,满足组织再生的需求;③使机体易于获得、扩增的细胞重编程为目的细胞类型.
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2011版NCCN软组织肉瘤临床实践指南解读
诊断和分类目前认为,大部分肉瘤都来源于间充质干细胞,而不是由成熟的组织细胞逆分化而来.在肿瘤的形成过程中,肿瘤干细胞分化出何种细胞的特性就定性为何种肿瘤.所以,更准确地讲,软组织肉瘤的诊断和分类依据应该是肿瘤的分化特征,而不是肿瘤的来源.显微镜下的形态学评估仍然是软组织肉瘤诊断的金标准,一份完整的病理报告应该包括肿瘤的诊断、部位、深度、组织学分级、坏死情况、切缘大小、淋巴结状态、有丝分裂程度、脉管癌栓等等.
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麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响
[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响.[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干预14 d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应(qPCR)方法,检测各组GFP-BMSC细胞肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白-5(AQP-5)蛋白及mRNA的表达.[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组(P<0.01),其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组(P<0.01).[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制.
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EZH2在胚胎干细胞和肿瘤方面的研究进展
PcG蛋白家族成SEZH2是PCR2复合物的催化活性亚单位,通过甲基化核小体组蛋白H3的27位赖氨酸残基,沉默下游基因.这些下游靶基因大部分具有抑制肿瘤发生和调控干细胞分化的作用,它们的沉默将导致肿瘤的发生和干细胞多向分化潜能障碍.EZH2介导的基因沉默机制和DNA甲基转移酶(DNMTs)以及组蛋白脱乙酰酶(HDACs)之间存在密切的联系.现就EZH2在胚胎干细胞、肿瘤研究和临床应用前景作一综述.
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干细胞治疗1型糖尿病:问题与前景
背景:1 型糖尿病是以胰岛 β 细胞被破坏为特点的自身免疫性疾病,患者需要依靠外源性胰岛素才能生存,目前仍缺乏特效的治疗方式.目的:综述各类干细胞的来源、分化能力、自身排斥以及存在的问题,从而为1型糖尿病的再生治疗提供依据.方法:以"type 1 diabetes melitus,stem cel,stem cel therapy,regeneration treatment,stem-cel differentiation,stem-cel transplantation, immune suppression,insulin secreting cels,isletβ-cels, therapeutic effect"为英文检索词,由第一作者检索2003至2015年PubMed数据库,查阅干细胞治疗1型糖尿病的相关文献,终保留了42篇文献进行分析.结果与结论:干细胞治疗 1 型糖尿病引起了相当多的关注,目前理想的治疗方式就是通过外源性干细胞移植使β细胞再生,即通过干细胞在体外适当的培养条件下诱导分化为具有内分泌功能的胰岛β细胞.通过各类研究,既阐述了干细胞的来源、定向分化、纯化、免疫抑制等特点以及存在的问题,还针对 1 型糖尿病的发生发展进行讨论,以选出佳的干细胞来源,从而有助于治疗该疾病.
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从进化论角度探讨干细胞分化及其干细胞巢分布规律
背景：造血干细胞、神经干细胞和诱导多能干细胞等越来越多的干细胞被发现，目前尚未出现关于干细胞分类和干细胞分化的统一理论；造血干细胞巢、肠上皮干细胞巢和毛囊干细胞巢等越来越多的干细胞巢被发现，目前尚未出现公认的干细胞巢形成和分布的统一理论；20年过去了，“不同种类干细胞巢的有序分布构成中医经络系统”的观点未能得到干细胞研究者(特别是中国的)重视。
目的：从进化论角度探讨干细胞分化及其干细胞巢分布规律。
方法：参阅《黄帝内经》等中医经典理论著作和人体解剖学著作，再一次从中医经络学说方向阐明干细胞巢在组织中的分布规律。参阅现代动物分类学著作，根据生物重演律、物种进化树和中医经络学说等探讨干细胞分化的规律。
结果与结论：高等动物胚胎发育的三胚层阶段以极其简洁的方式直接跨越其无脊椎动物祖先的演化史，生物重演律描述的基本对象首先应该是两条干细胞分化链C11→C132→C164→C1448→C1448×C1n=C1448n(n≤7)和C11→C17→C1448(n≤7)和经络系统中干细胞巢分布的演变。现今公认的物种进化树将后口动物的祖先设想为某种原始两侧对称动物是完全错误的，从干细胞分化角度来看违背了达尔文进化论原理，物种进化树不可能分叉形成顶部互不相干的两大分支--原口动物和后口动物，蟑螂、矛尾鱼和银杏等不可能是活化石，物种的起源是多源的，物种的进化是多层次波浪式向前推进。 -
中性粒细胞在肺部感染中的作用及其研究进展
中性粒细胞是重要的固有免疫细胞,处于机体抵抗微生物入侵、特别是抵抗化脓性细菌入侵的第一线.中性粒细胞在骨髓中从干细胞分化成包含大量颗粒的成熟中性粒细胞后数小时内进入血液循环.如果病原体突破皮肤和粘膜构成的物理屏障进入组织,在感染部位的病原体和巨噬细胞产生信号激活内皮细胞,内皮细胞能捕获循环中的中性粒细胞,诱导它们穿过内皮细胞与病原体结合.从血液中迁移到组织后,中性粒细胞免疫功能增强,同时激活中性粒细胞能产生特异性活性物质吸引更多的炎症细胞包括中性粒细胞、巨噬细胞和T细胞等向炎症部位积聚并调节它们的活性,激活后的中性粒细胞通过多种机制如脱颗粒释放活性蛋白质对病原体产生致命打击,但同时常导致正常组织的巨大损伤[1].目前随着研究深入,已经认识到中性粒细胞结构复杂、功能多样并具有强大的合成功能,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁.很多肺部疾病都是以中性粒细胞主导的炎症反应为特征,如肺炎、支气管扩张合并感染病人等气道管壁及肺组织中有大量中性粒细胞存在[2],且中性粒细胞在气道和肺组织的集聚和浸润程度与肺部感染的严重程度及进展有关[3],因此深入理解中性粒细胞在肺部感染性疾病中的作用非常重要.
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Rho激酶抑制剂用于脑损伤治疗的初步实验研究
目的：探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对神经干细胞增殖分化的影响。方法：分离培养大鼠神经干细胞并进行鉴定，设置对照组、LPA组、Y27632组，连续培养2周，观察细胞单克隆个数、单克隆形成率、Ki67和GFAP的基因表达量及蛋白质表达水平。结果：分离培养的神经干细胞经免疫荧光检测Nestin、CD133均为阳性；软琼脂实验发现，LPA组单克隆个数及单克隆形成率较对照组及Y27632组显著升高（P＜0.05），而Y27632组的单克隆个数及单克隆形成率与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）；荧光定量及Western blotting结果显示，与对照组相比，LPA组GFAP基因表达量没明显变化（ P＞0.05），Ki67基因表达量升高（ P＜0.05），而Y27632组GFAP基因表达水平显著升高（ P＜0.05），而Ki67基因表达无变化（ P＞0.05）。结论：Rho激酶抑制剂Y27632可提高体外培养神经干细胞的GFAP表达水平，对于损伤神经细胞的修复具有重要作用。
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基底微拓扑结构对细胞生物学行为的影响
与常规的细胞体外培养器皿不同,细胞在体内生长时,其微环境并不是简单的平面形式,每一种组织都有其特定的三维微结构.这类具有微结构的微环境是细胞增殖、分化的重要调控因子.近年关于基底微拓扑结构影响细胞生长、分化等行为研究的文献迅速增加.研究发现,具有微拓扑结构的基底可改变细胞的铺展、迁移、取向等行为,引导细胞骨架的重排,调控干细胞分化潜能,相关研究对于体外组织构建以及医学植入材料的表面处理具有指导性意义.本文就有关基底微拓扑结构影响细胞生物学研究的新进展进行了综述.
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肝干细胞研究进展
绝大多数肝干细胞的研究集中在胚胎来源肝干细胞或卵圆细胞.近研究人员从成体肝脏中鉴定并分离出肝祖细胞,这些细胞也有着双向分化潜能并能多次分裂[1],从而使肝干细胞定义更加复杂.目前,存在于成体的干/祖细胞群的作用尚未明确,关于对干细胞分化和器官发育的过程的理解亦存在分歧.本文重点讨论从不同发育阶段肝组织中分离的或损伤模型反应性产生的多种肝脏来源干细胞或祖细胞群.
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干细胞研究热点
干细胞是指具有自身复制和多向分化潜能的细胞,包括全能的受精卵及其分化后代,直至组织器官谱系特异性干细胞.干细胞的等级分化概念表述了干细胞的发育过程.从全能的受精卵经过卵裂产生桑椹胚后就失去全能性,囊胚期的内细胞团中只有能向三胚层分化的多能十细胞.多年来.从内细胞团中分离和建立胚胎干细胞系为阐明干细胞的等级分化过程作出了巨大贡献.证明多能干细胞经过胚层特化阶段发育为组织器官特异性干细胞.可见干细胞是一个包含连续发育阶段的不均一细胞群体.由于干细胞的自身复制和多向分化潜能及其在保持组织器官稳态和修复损伤的作用.使干细胞作为再生医学研究的种子细胞倍受学术界重视.近年不仅报道了各种来源的干细胞群的分离和应用研究,也对干细胞发育的基础理论有更深入的了解,尤其在决定干细胞命运的分化机制方面及细胞在保持和获得干性的分子机制方面有了长足进展,为干细胞应用奠定了坚实基础.
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甲状旁腺胚胎期发育的分子信号通路与甲状旁腺功能减退疾病
甲状旁腺发育有关的分子Hoxa3、Pax 1/9、Eya1、Six1/4构成了甲状旁腺、胸腺两个器官共同原基胚胎早期形成的调节通路.Shh-Tbxl-Gcm2通路则在甲状旁腺域的特化中起重要作用,参与调节CaSR表达并与MafB协同激活PTH表达.GCMB、GATA3、Tbxl、SOX3、GNA11等基因突变或缺失是人类原发性甲状旁腺功能减退症的病因.甲状旁腺前体细胞标志HoxA3、Pax1、Eya1和Six,甲状旁腺细胞样细胞标志Gcm2、CaSR和PTH,可作为鉴定干细胞分化为甲状旁腺细胞样细胞的指标,为干细胞分化为甲状旁腺细胞样细胞研究和寻找作为治疗甲状旁腺功能减退症的供体细胞研究奠定基础.
