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  • WCX纳米磁珠在宫颈鳞癌血清蛋白质组中的应用及其临床意义

    作者:郑智国;夏婷;李永哲;高谮;牟瀚舟;许沈华;许洋

    目的 研究宫颈鳞癌患者血清蛋白,筛选差异蛋白并建立诊断模型,探讨其临床意义.方法 用WCX纳米磁珠联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱检测77例宫颈鳞癌,13例宫颈上皮内瘤变Ⅲ级患者和52名健康人的血清.用Biomarker Wizard软件分析并找出差异蛋白,再用Biomarker Patterns软件建立诊断模型.同时与SCC-Ag作比较.结果 建立了由3974、3398和13732等差异蛋白峰组成的宫颈癌诊断模型,其敏感性为100%(32/32),特异性为93.8%(30/32).扩大样本验证,其敏感性为77.8%(35/45),特异性为75%(15/20).另外13例CINⅢ级患者有11例被检出,34例SCC-Ag阴性的患者中有30例被检出.结论 由3974、3398和13732三个差异蛋白组成的诊断模型有助于区分宫颈鳞癌,CINⅢ级患者与健康人.同时也能检出SCC-Ag阴性的宫颈鳞癌患者.

  • WCX磁珠联合MALDI-TOF-MS技术在结直肠癌诊断中的应用

    作者:王秀丽;高春芳;范乃军

    目的:比较结直肠癌与正常人血清蛋白质谱的变化,筛选特异性蛋白标志物,建立结直肠癌诊断分类树模型.方法:收集血清样本133例(其中结直肠癌67例,正常人66例),随机分为建模组和验证组.运用弱阳离子纳米磁珠(magnetic beadweak cation exchange,MB-WCX)联合基质辅助激光解吸离子飞行质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS),建立结直肠癌与正常人血清蛋白质谱.用Flex Analysis 2.4 软件收集数据,应用ClinproTools 2.2软件对建模组34例结直肠癌和33例正常人血清差异蛋白质谱进行定量分析,应用Genetic Algorithm 算法建立结直肠癌诊断模型,应用所获取的诊断模型对验证组样本(33例结直肠癌和33例正常人)进行分类诊断,以评价诊断模型的诊断价值.结果:通过比较分析结直肠癌与正常人血清蛋白质谱,发现共有33个差异蛋白峰(P<0.05),其中在结直肠癌中表达上调25个,表达下调8个.利用其中5个差异峰(Mr分别为759,3 316,4 645,4 248,2 645 Dr)建立诊断模型,获得了94.12%(32/34)敏感性和96.97%(32/33)的特异性,经独立样本双盲验证,其灵敏度为93.94%(31/33),特异度为96.97%(32/33).结论:基于磁珠分离和MALDI-TOF-MS技术能直接检测出结直肠癌患者血清差异表达蛋白,建立的诊断模型具有较高的敏感性和特异性,对提高结直肠癌的诊断具有一定的临床意义.

  • 质谱在乳腺癌血清蛋白组中的应用及其临床意义

    作者:颜怀军;郑智国;孟旭莉;丁小文;许沈华;陈斌;许洋

    目的 研究乳腺癌患者血清蛋白,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在乳腺癌早期诊断中的临床意义.方法 对48例乳腺浸润性导管癌患者和26例乳腺良性肿瘤患者与52名健康人血清,采用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱,检测各血清标本获得蛋白指纹图谱;用Biomarker Wizard找出差异蛋白,再用Biomarker Patterns建立诊断模型;扩大样本量,通过盲法分析进一步验证诊断模型.结果 初步筛选出6个差异蛋白峰,差异有统计学意义(P<0.01),建立由3164、3403m/z两个差异蛋白峰组成的乳腺癌诊断模型,其敏感率为90.0%,特异性为93.3%;扩大样本盲法验证结果其敏感性为77.8%,特异性为90.9%;另外26例乳腺良性肿瘤患者中有21例可以检出.结论 由两个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可以区分乳腺浸润性导管癌、乳腺良性肿瘤患者与健康人.

  • 血清多肽谱对高级别浆液性卵巢癌诊断价值分析

    作者:郑智国;夏婷;牟瀚舟;姜志明;朱笕青

    目的 寻找高级别浆液性卵巢癌相关的血清标志,并评价其诊断价值.方法 收集2006-07-17-2011-03-30浙江省肿瘤医院卵巢癌血清样本165例,均经病理确诊.采用纳米磁珠结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,检测95例高级别浆液性卵巢癌患者、34例其他上皮性卵巢癌患者、36例卵巢良性肿瘤患者和70名健康志愿者血清样本,并获得血清多肽谱.采用Biomarker Wizard软件分析所获得的多肽谱找出差异蛋白,进一步采用SPSS 12.0中ROC曲线分析差异蛋白,评价其诊断灵敏度和特异性.结果 通过34例高级别浆液性卵巢癌患者和34名年龄匹配的健康人群血清多肽谱比较筛选出8个差异峰,P<0.000 1.进一步扩大样本量,经分析ROC曲线面积>0.9的有2 742、8 568和8 692 m/z 3个差异峰;当差异峰2 742m/z取临界值24.31时,其诊断敏感性和特异性分别为90%和84.2%,其中早期卵巢癌诊断敏感性为82.35%.早期(Ⅰ、Ⅱ)与晚期(Ⅲ、Ⅳ)高级别浆液性卵巢癌比较有3 163、4 180和4 288m/z 3个差异峰,P<0.01,其ROC曲线面积均>0.7;其中3 163 m/z鉴别早晚期高级别浆液性卵巢癌敏感性和特异性分别为52.9%和88.5%.高级别浆液性卵巢癌患者与其他上皮性卵巢癌患者比较无明显差异峰.高级别浆液性卵巢癌患者和卵巢良性肿瘤患者比较有13 745、15 930和28 111 m/z 3个差异峰,P<0.01,ROC曲线面积>0.7的差异峰有15 930和28 111 m/z;其中15 930 m/z的鉴别诊断敏感性和特异性分别达到52.6%和80.6%.结论 2 742m/z差异蛋白对于早期高级别卵巢癌具有较高的诊断价值,3 163m/z在早期和晚期高级别浆液性卵巢癌患者的鉴别诊断中有一定价值,15 930m/z对于高级别浆液性卵巢癌和良性卵巢肿瘤鉴别诊断有一定的价值.

  • 纳米磁珠技术相关毒理实验研究

    作者:王欣;张黎明

    目的 研究纳米磁珠相关毒理,了解其在大鼠体内分布代谢情况.方法 选取24只健康成年大鼠随机分为8组,每组3只,一组未做任何处理作为空白对照组,一组注射生理盐水作为阳性对照组,其余6组注射纳米氧化铁磁珠作为实验组.观察各组大鼠生长发育情况、行为学及神经功能改变情况.采用HE染色及普鲁士蓝染色观察实验组大鼠脏器结构是否改变,是否造成局部炎性反应等病理性改变及磁珠在动物主要脏器中的分布情况.另选取10只大鼠随机分为两组,每组5只,分别注射氧化铁磁珠和生理盐水,通过水迷宫实验观察大鼠认知功能.另取4只健康新西兰家兔,观察注射氧化铁磁珠后血清学相关指标的变化情况.结果 实验组大鼠与空白对照组均未见生长、外观异常表现;Longa评分均为0分,未见异常变化.水迷宫实验逃避潜伏期和穿越平台次数评分组间差异无统计学意义(P>0.05).各实验组大鼠脏器形态未见结构及病理改变,氧化铁磁珠在注入大鼠体内5 min后已经离开循环系统进入各种脏器,磁珠大部分分布在脾脏及肝脏.与未注射氧化铁磁珠的家兔相比,注射65 d后家兔肌酐值增加,差异有统计学意义(P<0.05),但肌酐值仍在家兔血液化验指标正常范围内.其他血清生化指标、铁系列指标及血常规指标比较差异均无统计学意义(P> 0.05).结论 纳米磁珠技术在大鼠和家兔体内未见明显毒理反应,但纳米磁珠技术相关毒理仍有待进一步探究.

  • 磁珠分离结合生物质谱分析代谢综合征早期肾损害尿液蛋白谱

    作者:高碧霞;李明喜;刘雪娇;蔡建芳;樊晓红;杨啸林;李雪梅;李学旺

    目的 应用纳米磁珠联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)寻找代谢综合征(MS)早期肾损害尿液生物标志物并建立诊断模型.方法 样本来源于北京平谷地区MS肾损害流行病学研究,应用弱阳离子交换磁珠富集8h过夜尿液蛋白,MALDI-TOF-MS建立尿蛋白谱图,采用Wilcoxon检验和随机森林算法寻找差异蛋白峰,分别联合遗传算法和支持向量机构建诊断模型.结果 入选者包括MS无肾损害54例和MS早期肾损害46例,Wilcoxon检验和随机森林算法分别显示20及12个蛋白峰在MS早期肾损害患者尿液高表达.遗传算法和支持向量机构建模型对MS早期肾损害诊断的敏感性分别为82.6%和89.2%,特异性分别为84.3%和81.1%,准确性分别为83.5%和85.5%.两种机器分类学习方法构建的诊断模型共同包含4个蛋白峰,质荷比分别为2756.98、3019.11、9077.04和10 054.26.结论 采用弱阳离子交换磁珠联合MALDI-TOF-MS建立了MS早期肾损害患者尿蛋白谱图.多种机器分类学习方法显示尿液差异蛋白峰,并建立了识别率较好的诊断模型,为差异蛋白的鉴定和功能研究奠定了基础.

  • 应用纳米免疫磁珠检测早期肺癌循环血中肿瘤细胞

    作者:王晓光;胡红;刘又宁

    免疫纳米磁珠的诞生为肿瘤细胞生物诊断提供了先进的分离手段[1].本研究旨在探讨建立一种应用纳米免疫磁性分离技术(IMS),通过外周血液能快速、灵敏、简便地检测早期肺癌患者循环肿瘤细胞(CTC)的方法,以利于发现早期肺癌患者隐性微转移、监测术后患者肿瘤复发与转移、评估患者预后以及制定治疗方案.

  • 纳米磁珠辅助红细胞膜垂钓技术及其在当归活性成分筛选中的应用

    作者:何嘉辉;茆睿智;唐铖;徐亮;肖学凤

    目的 为提高天然产物中活性成分的筛选效率,利用活性成分与细胞膜(CMs)受体间具有特异性亲和的性质,建立一种新型、高效的纳米磁珠(MNPs)辅助CMs垂钓的方法.方法 将MNPs与兔红细胞CMs结合形成纳米磁珠-细胞膜复合物(MN-CMs),利用MN-CMs垂钓当归水提取液中的活性成分,通过GC-MS对垂钓结果进行分析.结果 自制MNPs平均粒径为(250.6±3.3) nm(n=3),且粒径分散均匀,多分散指数(PDI)为0.010±0.003(n=3),具有较强的磁性和良好的超顺磁性,饱和磁化强度值为83.4 emu/g.MNPs能与CMs稳定结合,10 mg MNPs的大吸附量为1.02 mg CMs,同时可以有效保持一定的CMs酶活性.GC-MS结果表明,MN-CMs从当归水提取液中垂钓出的潜在活性成分为藁本内酯,出峰时间为20 min,同时该新型垂钓方法能够有效避免非活性成分的干扰.结论 建立的MNPs辅助CMs垂钓方法能够特异性垂钓出当归中活性成分藁本内酯,弥补了传统药物筛选方法的缺点,也为其他天然产物的活性成分筛选提供一种新方法.

  • 深圳市青年同型半胱氨酸及其他临床指标与MTHFR C677T基因的多态性

    作者:毕佳佳;张思韵;罗雯媛;关幸求

    背景:N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydro-fotate reductase,MTHFR)基因发生突变,易引起高同型半胱氨酸血症,而高同型半胱氨酸血症为脑卒中的独立危险因素。
      目的:分析深圳地区青年人群同型半胱氨酸水平与MTHFR C677T基因多态性之间的关系,并探讨高同型半胱氨酸血症与其他临床资料之间是否具有相关性。
      方法:分别收集101例高同型半胱氨酸血症患者作为实验组,101例同型半胱氨酸血值正常者作为对照组(20-45岁)。收集入组人员的口腔唾液标本,用纳米磁珠法提取DNA,PCR扩增目的片段,并将扩增产物送与公司测序。
      结果与结论:实验组和对照组MTHFR C677T基因的CC型、CT型、TT型3种基因型总体分布频率具有显著性意义(P <0.01),说明深圳地区青年人群同型半胱氨酸水平与MTHFR C677T的多态性具有一定的相关性。实验组中TT型基因频率及T等位基因频率均明显高于对照组,且实验组TT基因型的受试者同型半胱氨酸水平明显高于CT基因型及CC 基因型受试者,差异均有显著性意义(P <0.05),说明TT型比CT型更能影响同型半胱氨酸水平。实验组收缩压、舒张压值显著高于对照组(P<0.05),表明高同型半胱氨酸血症可引起血压值增高;试验并不能确定高同型半胱氨酸血症能增高血脂水平。

  • 纳米磁珠法与试剂盒法分析载脂蛋白E基因的多态性

    作者:吴婷;易黎;黄莹;吴军

    背景:相对于血液标本,口腔拭子标本更利于大规模载脂蛋白E基因多态性分析的研究,但目前对口腔拭子标本基因组DNA的提取尚无统一方法。
      目的:探索合适的口腔拭子标本基因组提取方法以分析载脂蛋白E基因的多态性。
      方法:收集50例散发性阿尔茨海默病患者口腔拭子标本,每份标本分别应用纳米磁珠法与PicoDNA微量核酸提取试剂盒法提取基因组DNA,对比分析两种方法获得的基因组DNA纯度和浓度,后续进行PCR反应,应用DNA电泳确认有无成功扩增出目的条带,通过DNA测序方法分析载脂蛋白E基因的多态性。
      结果与结论:两种方法提取的基因组DNA纯度均较好,纳米磁珠法提取的基因组DNA浓度要高于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法所得浓度(P<0.05)。两组获取的基因组DNA均可成功进行PCR扩增,但电泳结果示纳米磁珠法扩增的目的条带更清楚。两组PCR产物DNA测序结果一致,载脂蛋白E基因ε2、ε3、ε4基因型的比例分别是6%,71%,23%。表明纳米磁珠法相对于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法提取口腔拭子标本基因组DNA更适合用于大样本载脂蛋白E基因多态性的研究。

  • 口腔鳞癌相关血清多肽的筛选和鉴定

    作者:刘莹;谈亦然;杨丞喆;朱东旺;钟来平;张陈平;张志愿

    目的:探讨口腔鳞癌不同发展阶段的差异血清多肽谱.方法:采用基质辅助激光解析飞行时间质谱结合弱阳离子纳米磁珠,检测120例健康正常人、37例早期口腔鳞癌患者、129例晚期口腔鳞癌患者血清多肽指纹图谱,应用ClinProtToolsTM 2.1软件对检测结果进行分析,建立差异多肽的鉴别诊断模型,对模型中的差异多肽进行质谱分析,以IPI数据库检索确定相应蛋白质名称.结果:在3组间的两两比较中,共筛选出385个差异多肽,初步建立口腔鳞癌与健康正常人及口腔鳞癌早、晚期的鉴别诊断模型.早期口腔鳞癌与健康正常人之间的鉴别诊断模型包括5个差异多肽峰,分别是FGA、ITIH4、PKM2、SCARA5和SDPR,诊断敏感度和特异度为82.4%和98.5%;晚期口腔鳞癌与早期口腔鳞癌之间的鉴别诊断模型包括4个差异多肽峰,诊断敏感度和特异度为98.5%和88.2%,分别是FGA、PKM2、ITIH4和ALB;晚期口腔鳞癌与健康正常人之间的鉴别诊断模型包括5个差异多肽峰,其中3个为SERPINA1、TrR和SDPR,诊断敏感度和特异度为89.4%和85.1%.结论:采用多肽组学方法,鉴定了部分口腔鳞癌不同发展阶段的差异多肽,为进一步开展血清多肽验证和差异蛋白质的机制研究奠定了基础.

  • 用纳米磁珠吸附富集样本中结核分支杆菌

    作者:王相栋;邵吉宝;施旭东;程仿颉;周光明;刘梦璐

    目的 制备纳米磁珠用以吸附富集样本中结核分支杆菌(MTB),有效提高培养的阳性率和实验操作安全性.方法 用化学共沉淀法制备表面包被PEG600或油酸的纳米Fe3O4颗粒,在基本密闭系统下培养MTB,观察比较两种磁珠在3种pH下吸附能力的差异;并对包被PEG600的纳米磁珠的吸附容量进行测定.结果 自制的两种磁珠具备显著的MTB吸附能力,两种磁珠之间以及不同pH下无明显差异,但pH 5.3条件下油酸纳米磁珠富集的MTB菌落形成较小.自制PEG600纳米磁珠的吸附能力为每100 μL1 ~ 10μg MTB磁珠悬液.结论 自制的纳米磁珠能有效地吸附MTB,以PEG600纳米磁珠为优,并能够有效避免环境污染.

  • 使用生物纳米磁珠对低浓度目标细菌的磁捕获

    作者:田菊霞;解宇;楼忠明;杨艳宏;王文香

    目的 以从磁性细菌体内提取的纳米磁珠为载体,对低浓度大肠杆菌O157:H7进行快速磁捕获与分离.方法 从磁性细菌中获取生物纳米磁珠,然后将大肠杆菌O157抗体接种于该磁珠表面,形成免疫磁珠后,对细菌混合液中浓度约为1cfu/10ml的大肠杆菌O157:H7进行快速磁捕获与分离.结果 菌源性纳米磁珠表面大肠杆菌O157抗体的包被固定量为132μg/mg磁珠.当大肠杆菌O157免疫磁珠浓度为50μ g/ml以上时,即有较好的捕获和分离效果,而且特异性较高,显著强于传统的离心分离法(P<0.01),当浓度达到100μg/ml以上时捕获和分离效果更好.结论 利用磁性细菌由来的生物纳米磁珠,可将目标细菌抗体包被于生物纳米磁珠表面,制成免疫磁珠后,通过外磁场诱导可快速、准确地进行低浓度目标细菌的捕获与分离.

  • MB-WCX联合SELDI-TOF-MS在胃癌诊断中的应用

    作者:刘博学;程欢欢;董召刚;王华阳;尹作花;宋庆旭

    目的 研究WCX纳米磁珠联合表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)对胃癌及其癌前病变诊断的意义.方法 应用纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS对26例胃癌、35例癌前病变患者(萎缩性胃炎15例,胃溃疡20例)及30例正常人血清标本进行分析,Swiss蛋白数据库搜索鉴定差异蛋白,建立诊断模型.结果 与健康对照相比较,质荷比为2741.2、7 963.6和15904.3的蛋白质分子随病变程度表达上调,质荷比为13 732.6的蛋白质在癌前病变组无统计学差异,但在胃癌患者中下调.质荷比2 741.2、7963.6、15904.3及13 732.6的蛋白质组成的诊断模型可以准确鉴别胃癌与正常对照,敏感性为92.3%,特异性为96.7%.结论 WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS是筛选胃癌早期诊断标志物的有效手段,2 741.2、7963.6、15904.3及13 732.6的蛋白质组成的诊断模型有可能成为潜在的胃癌早期诊断标志物.

  • WCX纳米磁珠在子宫内膜癌血清蛋白质组中的应用

    作者:栾力;管尚慧;杨圣思;程欢欢;王娜娜;董召刚;程玉峰

    目的 利用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析子宫内膜癌患者血清蛋白质谱,筛选潜在的特异性肿瘤标志物,探讨其临床意义.方法 应用WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS对24例子宫内膜癌患者及28例正常人血清标本进行蛋白质质谱分析,用Biomark Wizard软件分析差异蛋白峰,并在Swiss蛋白数据库中搜索鉴定差异蛋白,受试者工作特征(ROC)曲线评价该技术的应用价值.结果 在质荷比(m/z)2000-20000范围内,子宫内膜癌患者血清中筛选出与正常人血清有统计学意义的差异蛋白11个(P<0.05),其中6个高表达:m/z分别为4 175、5 315、7 970、8 047、15 930、16074;5个低表达:m/z分别为4 592、4675、7 019、9188、9 358.m/z为7 970的差异蛋白与子宫珠蛋白(UG)相符.应用ROC曲线分析,确定11个差异蛋白对子宫内膜癌有中等诊断价值,灵敏度为70.5%~96.4%,特异度为89.3%~100%.结论 WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS能在子宫内膜癌患者血清中筛选出灵敏度和特异度较好的差异表达蛋白,其有助于子宫内膜癌的筛查、早期诊断及预后监测.

  • 纳米磁珠免疫分析技术的建立及其检测人红细胞血型Mia(MNS7)抗体的初步实验

    作者:田晶晶;丁少华;王红梅;段生宝;陈晔洲;李勇

    目的 制备偶联人红细胞Miltenberger血型抗原多肽的免疫磁珠,以之为基础建立快速便捷的Miltenberger血型抗体检测技术.方法 利用水热合成法合成纳米磁珠,在其表面包被二氧化硅层,并进行氨基化修饰;利用碳酰二亚胺盐(EDC)分别将人免疫球蛋白G(IgG)及牛血清白蛋白(BSA)偶联于磁珠表面,优化偶联条件,并通过流式细胞仪检测荧光标记的抗IsG来评价偶联效果;将人红细胞Miltenberger血型Mia(MNS7)抗原多肽偶联于磁珠表面,检测血清中的抗体.结果 纳米磁珠平均粒径为400nm,包被二氧化硅层后可有效提高磁珠分散性,经氨基化修饰氨基含量约260 μmol/g;在提高偶联效率同时保证蛋白与磁珠间的非特异吸附低,确定了0.01 mol/L PB溶液(pH=7.4)为偶联BSA、0.1mol/L PB溶液(pH=7.4)为偶连人IgG的适反应溶剂,非特异性吸附小;经荧光素标记抗人IgG检测,偶联人IgG磁珠的荧光信号值约为偶联BSA磁珠的荧光信号值的100倍;Mia抗原多肽免疫磁珠对阴性、阳性血清检测的荧光信号差别可达10倍.结论 成功制备偶联人红细胞Miltenberger血型系统Mia抗原多肽的免疫磁珠,并确定其在检测人血清抗体中的应用价值.

  • 免疫磁珠酶催化新技术在H7N9流感病毒高灵敏检测中的应用

    作者:刘键;王艳丽;赵勇;吴学敏

    目的:H7N9型禽流感是一种致病性较强的流感病毒亚型,该型流感病毒于2013年3月底在我国发现以来,已造成多人死亡,目前对此病毒还没有疫苗,没有特效药,死亡率一直居高不下.在当今病原体检测的主要方法中,病原体培养分离法、核酸扩增法以及ELISA方法灵敏度较高,但需要专业仪器设备和专业的实验室;胶体金法检测快速、操作简便,但是,胶体金检测灵敏度低.因而,结合当前国内外的新科学发展,寻求一种快速、高灵敏、可现场检测的新技术尤为迫切.方法:本研究结合海关口岸对传染病病原体检验检疫的需求,利用纳米磁颗粒具有酶催化活性的特点,结合免疫层析技术,以H7N9病原体为检测样本,分析该新技术对H7N9病原体检测的敏感性与可靠性.结果:该新技术检测的敏感度比胶体金法可提高12个数量级.结论:该方法兼具胶体金技术的快速、简便、可现场应用的优点,又具有高灵敏度的特性,具有发展为我国海关口岸检验检疫新技术平台的潜力.

  • 纳米磁珠提取法在骨骼DNA提取中的应用

    作者:彭皓明;王祥;王锟;张毅;王海生

    目的 对纳米磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果进行比较评价,为方法选择提供应用参考.方法 取泥土掩埋、水中浸泡1~10年不等的25根长骨,经水洗、刮净,液氮冷冻研磨器将骨骼研磨成粉末状,分别应用纳米磁珠提取法和KingFisher仪器自动化提取法提取DNA,Identifiler@Plus试剂盒进行扩增,ABI 3100遗传分析仪进行STR分型检测;对两种方法提取的DNA定量和经扩增、分型检测的结果进行比较.结果 骨骼样本采用纳米磁珠法提取到的样本DNA(1.237 5ng/μL±0.319 2ng/μL),较之KingFisher法的浓度(0.506 2ng/μL±0.280 5ng/μL)更高,两种方法间差异具有统计学意义(P<0.05);而纳米磁珠法的分型成功率亦更高,两种方法间差异具有统计学意义(P<0.05).结论 用纳米磁珠提取纯化骨骼DNA,能得到高质量DNA模板,有利于提高分型检验的成功率,可在实际检案中选择使用.

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