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真菌MALDI-TOF-MS蛋白质谱分析技术研究
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)已成为生命科学领域广泛使用的分析工具.在真菌MALDI-TOF-MS蛋白质谱分析中,从复杂基质中蛋白质的提取、双向电泳,到MALDI-TOF-MS分析,每个步骤不同技术的选择是实验成功与否的关键.本文对真菌蛋白质谱分析研究中的关键技术进行综述,为国内开展真菌蛋白质组学研究提供思路.
关键词： 真菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 蛋白质 -
沙门菌MALDI-TOF-MS标准菌库的建立及应用研究
目的 利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)构建标准沙门菌株数据库.方法 利用MALDI-TOF-MS对21株标准沙门菌进行质谱数据采集,建立标准菌株数据库.相关菌株质谱数据通过菌株在相同培养环境不同培养时间下所得质谱数据进行优化.通过血清型鉴定方法筛选出200株野生沙门菌,并利用自建数据库和现有数据库对200株野生沙门菌进行MALDI-TOF-MS检测,对自建数据库进行评价.结果 Bruker原有数据库、自建数据库及合并数据库对200株野生沙门菌鉴定,阳性率分别为87.5％、97.0％、97.5％.21株标准沙门菌株数据库按亲缘关系远近可分为3大类.主成分分析发现不同菌种之间质谱数据有一定的差异,个别菌种在不同培养条件下培养,质谱数据变化不明显.结论 本研究建立的标准菌库对野生沙门菌的鉴定准确性高,适用于实际检测.研究结果丰富了已有的数据库,同时也为其他细菌菌库的建立提供了很好的借鉴.
关键词： 沙门菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 鉴定 菌库建立 -
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
目的 研究基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-Ms)用于快速检测鉴定金黄色葡萄球菌及其耐药性的可行性.方法 用MALDI-TOF-MS和API Staph系统鉴定了40株临床分离的葡萄球菌,用Kirby-Bauer法检测金黄色葡萄球菌的耐药性.结果 40株临床分离的葡萄球菌中34株细菌用MALDI-TOF-MS鉴定为金黄色葡萄球菌,6株为其他葡萄球菌.与API Staph系统鉴定结果一致.Kirby-Bauer法耐药性检测显示其中11株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA),23株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA),34株金黄色葡萄球菌用MALDI-TOF-MS鉴定时聚类为2类,结果与耐药性检测结果一致.结论 结果提示MALDI-TOF-MS可以用于MRSA的快速鉴定.
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 金黄色葡萄球菌 耐药性 快速鉴定 -
飞行时间质谱技术在HIV诊断应用性研究
[目的]用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)技术分析HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱,建立HIV血清多肽指纹图谱诊断模型并探究其临床价值.[方法]选取的血清样本经Zip Tip C18层析预分离,运用MALDI TOF MS分析检测,获得HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱,用SPSS13.0软件对数据进行分析,建立诊断模型.[结果]在分子量为800～4000Da范围内,共发现500个多肽峰,其中11个多肽峰在HIV感染组、正常对照组中表达均有显著差异(P<0.05),5个在HIV感染组中表达上调(m/z 1 418.67,1 465.67,1 777.82,1 864.82和2080.23),6个在HIV感染组中表达下调(m/z 904.71,920.73,1 076.73,1 521.79,1 552.75和2080.78);(m/z2080.78+2080.23+1 777.82+1465.67)组合的P<0.05,回归系数、相对危险度都比较理想,其ROC曲线下面积是1.0,以此建立了HIV血清多肽指纹图谱诊断模型.[结论]本研究建立的诊断模型可以有效区分HIV感染者和健康人,为HⅣ的诊断与筛查提供了一条崭新途径.
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鉴定乳制品中厌氧芽胞杆菌的3种方法比较
目的 鉴定乳制品中的革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌.方法 采用生化鉴定、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定和16S rDNA测序三种方法,对乳制品中5株革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌进行鉴定.结果 生化方法鉴定出3株菌,而飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序法对5株菌都给出了鉴定结果.3种方法仅对其中1株菌的鉴定结果一致;飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序的鉴定结果一致性程度高,共有4株菌的鉴定结果一致;而生化方法的鉴定结果与这两种方法差异较大.结论 飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序可作为生化方法的补充,用于革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌的快速鉴定.
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建立MALDI-TOF MS鉴定的海洋致病性弧菌数据库样本前处理的适宜条件
目的 探讨建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定海洋致病性弧菌数据库前样本处理的适宜条件,为完善MALDI-TOF MS鉴定该菌入数据库提供参考.方法 将32株海洋致病性弧菌培养至24、48、72 h时,分别用直接转移法、扩展的直接转移法、甲酸提取法得到上机样品,然后用MALDI-TOF MS进行采图鉴定,用SPSS20.0软件进行统计学分析,对样本不同培养时间及3种处理方法的鉴定结果进行比较评价.结果 培养24 h鉴定分数平均值为2.321,属水平鉴定正确率为96.88％,种水平鉴定正确率为90.63％;培养48 h鉴定分数平均值为2.315,属水平鉴定正确率为93.75％,种水平鉴定正确率为90.63％;培养72 h鉴定分数平均值为2.316,属水平鉴定正确率为93.75％,种水平鉴定正确率为87.50％,3种不同培养时间的前处理方法鉴定至属(P=0.129)、鉴定到种(P=0.078),差异均无统计学意义.直接转移法鉴定分数平均值为1.986,属水平鉴定正确率为78.13％,种水平鉴定分数为59.38％;扩展的直接转移法鉴定分数平均值为2.135,属水平鉴定正确率为90.63％,种水平鉴定正确率为78.13％;甲酸提取法鉴定分数平均值为2.306,属水平鉴定正确率为96.88％,种水平鉴定分数为90.63％,3种不同上机前样本处理方法鉴定到属时差异有统计学意义(P=0.006);鉴定到种时差异有统计学意义(χ2=8.691,P=0.013).结论 建立MALDI-TOF MS海洋致病性弧菌数据库时,选择培养时间24 h的甲酸法提取菌体蛋白的前处理方法较适宜,可得到高质量的蛋白指纹图谱和鉴定正确率.
关键词： 海洋 弧菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 细菌数据库 -
约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白的二维电泳-质谱分析
目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白,找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白.方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,BIO-RAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软件分析,差异蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其肽质指纹图谱,用Mascot在相应的查询条件下搜索NCBInr数据库.结果获得了分辨率和重复性均较好的一维和二维蛋白图谱.凝胶扫描结果发现未感染蚊中肠有135个蛋白点,感染蚊中肠有158个蛋白点,相同有107个,pI偏酸性.未感染蚊唾液腺有178个蛋白点,感染蚊唾液腺有201个蛋白点,相同有167个,pI分布较均匀.选择7个差异蛋白点进行分析,得到了6个蛋白肽质指纹图谱,查询数据库初步鉴定疟原虫来源的蛋白质有5个,另1个来源于蚊组织.疟原虫来源蛋白为一些表面蛋白、代谢和运动相关的蛋白等.结论建立了一种较好的疟原虫子孢子蛋白分离和鉴定方法,并证明约氏疟原虫唾液腺子孢子表达大量差异表达蛋白,部分可能与其识别、侵入宿主细胞有关.
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腋淋巴结阳性乳腺浸润性导管癌差异蛋白的质谱分析
目的 筛选可能用于判断乳腺浸润性导管癌发生腋淋巴结转移的血清蛋白标志物.方法 收集2015年3月—2016年5月天津市宝坻区人民医院收治的乳腺浸润性导管癌患者血清样本24份,按照是否发生腋淋巴结转移分为两组,每组各12份.将每组的12份血清等量混合,利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术鉴定差异蛋白质,对2D-PAGE图谱与MALDI-TOF-MS质谱进行分析.结果 2D-PAGE图谱分析筛选出差异蛋白点11个;经MALDI-TOF-MS质谱分析鉴定出高可信度的蛋白5种,表达上调的为T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)、组织蛋白酶K(CatK)、血管内皮生长因子B(VEGF-B)、肌动蛋白相关蛋白复合物3(ARPC3),表达下调的为抑癌蛋白Necdin(覆盖率分别为Tiam1蛋白29％,CatK蛋白12％,VEGF-B蛋白34％,ARPC3蛋白26％,Necdin蛋白18％).结论 乳腺浸润性导管癌发生腋淋巴结转移后其蛋白质表达谱也发生了变化,所鉴定出的差异蛋白有可能成为判断其是否发生腋淋巴结转移的血清蛋白标志物.
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飞行时间质谱技术鉴定丝状真菌的研究进展
侵袭性真菌感染与免疫力低下患者的高发病率和高病死率密切相关,其早期诊治对提高患者救治率至关重要.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser-desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术通过检测真菌中固有的特异性蛋白从而实现对丝状真菌快速、准确的鉴定.本文从技术原理、标本前处理、鉴定效果及影响因素等方面对MALDI-TOF MS技术鉴定丝状真菌的研究进展作一综述.
关键词： 丝状真菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 影响因素 鉴定效果 -
幽门螺杆菌动物模型驯化菌株SS1与其初始菌株的差异蛋白质组分析
目的: 比较H pylori动物模型适应菌株SS1与其初发菌株10700间蛋白质组差异, 试图获得H pylori在小鼠体内适应过程中可能与定植能力增强相关的蛋白特征.方法: 在相同件下培养SS1菌株及其初始菌株, 并制备全菌蛋白样品, 相同实验条件下重复3次, 样品经二维电泳分离, 扫描获得数字化的电泳胶图像并用ImageMaster2D图像分析软件比较分析, 识别SS1与初始菌株间的差异蛋白点. 取3次制备的样品间的共同差异点进行胶内酶解, 经基质辅助激光电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)获得肽质量指纹图谱, 用Mascot软件在Swiss-Prot和NCBI数据库中搜索匹配蛋白.结果: 表达量有明显下降的11个点, 经鉴定对应10个蛋白: 4个属于H pylori的氧化还原系统, 即过氧化氢酶、超氧化物双歧酶、硫氧环蛋白和环氧蛋白还原酶;5个蛋白与代谢有关,即脯氨酸肽酶(proline peptidase)、果糖磷酸氢盐醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase)、无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase)、3-含氧酸辅酶A转移酶亚单位B(3-oxoacid CoAtransferasesubunit B)和延伸因子(elongationfactor P);另1个蛋白为假想蛋白HPAG0942.结论: H pylori在小鼠体内的定植适应过程中,伴有代谢酶表达的降低和抗氧化水平的减弱,提示代谢和抗氧化能力适度下调可能与菌株的定植力增强相关.
关键词： 幽门螺杆菌 动物模型 二维电泳 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 -
应用2D-DIGE及MALDI-TOF-MS筛选胰腺癌血清标志物
目的 利用比较蛋白质组学的方法对胰腺癌患者血清和对照组血清例进行分析,寻找胰腺癌潜在的特异性候选标志物.方法 采用双向差异凝胶电泳分离40例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者、10例良性肿瘤患者和40例健康体检者外周血清蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对差异显著的蛋白进行鉴定.结果 成功鉴定出2个胰腺癌差异表达蛋白:转甲状腺素蛋白和载脂蛋白E.该组蛋白在胰腺癌组中呈高表达,在正常对照组、慢性胰腺炎组和良性肿瘤组中呈低表达.结论 双向差异凝胶电泳联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术筛选胰腺癌患者外周血清中的特异性生物标志物的方法具有较好的重复性和稳定性.检测鉴定的差异蛋白质载脂蛋白E、转甲状腺素蛋白可能是胰腺癌早期诊断潜在的血清特异性生物标志物.
关键词： 胰腺癌 蛋白质组学 双向差异凝胶电泳 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 标志物 -
构巢曲霉致肺曲霉病患者二例临床特征和病原学分析
目的 探讨构巢曲霉致肺曲霉病的临床及病原学特点.方法 收集首都医科大学宣武医院2017年1月2例住院慢性阻塞性肺疾病患者的病例信息,分析患者的临床资料和实验室对病原菌的分离鉴定并复习相关文献.结果 两例患者均有慢性阻塞性肺部疾病史及多种基础疾病,临床表现为发热、咳嗽、喘息等,胸部影像学显示肺部斑片状高密度影;实验室检测G试验和GM试验均为阳性;痰液直接涂片镜检可见隔菌丝,分支45°角,分离菌经质谱和测序分析确定为构巢曲霉.临床根据病原学结果改用伏立康唑治疗后患者症状及体征好转出院.结论 构巢曲霉致肺曲霉病相对少见,病原学诊断对临床早期有效治疗肺曲霉病很重要.
关键词： 构巢曲霉 肺曲霉病 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 -
分离胶法与十二烷基硫酸钠法在血培养阳性瓶基质辅助激光解析电离飞行时间质谱病原菌直接鉴定中的应用
目的 评估分离胶促凝管法和十二烷基硫酸钠(SDS)法两种阳性血培养瓶前处理方法联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定病原菌的临床应用.方法 收集2016年11月至2017年5月首都医科大学宣武医院微生物室阳性血培养需氧瓶120例和厌氧瓶80例(经革兰染色镜检确认为单一菌),利用分离胶促凝管和0.5％SDS前处理后与转种纯培养菌落MALDI-TOF MS鉴定比较,评价两种方法的鉴定准确率.结果 分离胶法和SDS法质谱鉴定与培养鉴定的符合率为86.0％和87.0％;分离胶法鉴定需氧瓶和厌氧瓶中病原菌的准确率为86.7％和85.0％,SDS法为85.0％和90.0％,两者鉴定需氧瓶中病原菌的鉴定率差异无统计学意义,SDS法鉴定厌氧瓶中细菌的准确率显著高于分离胶法(χ2=11.13、P<0.05);分离胶法和SDS法对革兰阴性杆菌的鉴定准确率(94.3％和94.3％)显著高于革兰阳性球菌(80.6％和83.3％)和真菌(50.0％和63.6％),差异均有统计学意义(χ2=24.7、40.3、15.1,P均<0.01);分离胶法和SDS法鉴定革兰阴性菌和阳性菌的准确率差异无统计学意义,而SDS法鉴定真菌和厌氧菌的准确率显著高于分离胶法(χ2=11.05、P<0.01,χ2=14.05、P<0.05);分离胶法和SDS法鉴定分值>2.0分者分别占37.5％和45.0％(χ2=20.48、P<0.05),1.6～2.0分者分别占33.0％和25.0％(χ2=11.14、P<0.05),差异均具有统计学意义;而<1.6分者分别占15.5％和17.0％,差异无统计学意义(χ2=5.9、P>0.05).结论 分离胶法和SDS法均可快速直接鉴定阳性血培养瓶中常见病原菌,显著缩短鉴定时间,在真菌和厌氧菌鉴定时以SDS法前处理MS鉴定效果较好.
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质谱分析仪对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型的应用研究
目的：评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（M RS A ）分子分型的应用价值。方法收集2009年1月－2012年3月来自上海、重庆、广州、沈阳、乌鲁木齐、北京6个城市共270株 MRSA ，经多位点序列分析（MLST ）表型主要为 St239、St5、St59、St454个基因型，使用ClinProTools软件建立模型，并用剩余菌株验证得出模型的敏感性和特异性；随机选取试验组35株St239，对照组43株包括20株S t5、15株S t59、8株S t45构建模型S t239；随机选取试验组8株S t45，对照组35株包括11株S t5、8株S t59、16株S t239构建模型S t45。结果154株S t239、72株S t5、30株S t59、14株S t45经检测显示，模型S t239、S t45、S t5的交叉效度和可接受度均为100．0％，仅模型S t59的交叉效度为90．5％，其可接受度也为100．0％；模型St45能正确区分出St45的敏感性和特异性均为100．0％，模型St239能正确区分出St239的敏感性是95．8％以及特异性为93．2％，模型S t59能正确区分出S t59的敏感性为86．7％以及特异性为91．7％，模型S t5能正确区分出S t5的敏感性为50．0％以及特异性为95．8％。结论 MALDI-TOF MS分型与MLST具有较好的一致性，且具有操作简便、快速、低成本、重复性好、稳定性高的优点。
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VITEK MS基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在病原菌鉴定中的应用评价
目的 使用VITEK MS质谱鉴定系统对临床分离的病原菌进行鉴定,并评价其性能,为病原菌的快速鉴定提供新的方法.方法 收集2014年4-7月医院临床分离病原菌共948株,经VITEK-2 Compact细菌鉴定仪及16S rRNA、rpoB、hisA、ITS基因片段测序确认,使用VITEK MS基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定,并对8株真菌连续检测测试质谱仪稳定性.结果 共分离到链球菌属191株、肠球菌属94株、葡萄球菌属144株、肠杆菌科细菌193株、非发酵革兰阴性菌170株、临床常见其他菌36株、酵母菌属102株和丝状真菌18株.VITEK MS对入选菌株的鉴定总准确率达97.10％,但其对沙门菌属和鲍氏不动复合群的鉴定仅能到菌属或复合群水平;对酵母菌属的准确鉴定率为100.00％,丝状真菌中除链格孢外(数据库未包含此菌),88.89％的丝状真菌得到准确鉴定;VITEK MS质谱仪对真菌连续5d检测结果一致,稳定性良好.结论 VITKE MS表现稳定、准确率高、耗时短,尤其在真菌的鉴定上凸显优势,可作为临床细菌快速鉴定的手段.
关键词： VITKE质谱仪 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 细菌鉴定 -
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在快速鉴定真菌中的临床应用研究
目的：总结基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术（MALDI‐TOF MS）应用于临床真菌鉴定的特点，为评估其在真菌快速鉴定方面的重要性及临床应用价值。方法采用VITEK MS鉴定仪对2013年1月－2014年9月临床检出真菌进行鉴定，获取真菌全细胞蛋白（主要是核糖体蛋白）质谱，通过与数据库中已知菌质谱进行比较、分析，获得鉴定结果并对数据进行统计分析。结果共鉴定出真菌1254株，质谱技术鉴定真菌共1198株，占95．53％，未鉴定出真菌占4．47％；应用质谱技术鉴定的真菌中以假丝酵母菌属为主，共1125株占93．91％。结论 MALDI‐TOF MS技术鉴定真菌种类多，操作流程简单、快速，而且还具有很好的可重复性和准确性，是传统真菌鉴定方法的有力补充，为真菌鉴定提供了新的选择。
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 真菌 快速鉴定 -
评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对葡萄球菌属的鉴定能力
目的：评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）在临床鉴定常见葡萄球菌属的能力。方法采用MALDI-TOF MS对2011-2013年收集的151株葡萄球菌属进行分析比较；对鉴定结果不一致的菌株，用16S rRNA测序方法进行后鉴定，评价 MALDI-TOF MS的鉴定能力。结果151株葡萄球菌属用MALDI-TOF MS与VITEK-2鉴定结果一致的有135株，符合率为89．4％，两种鉴定方法对39株金黄色葡萄球菌、34株表皮葡萄球菌及1株施氏葡萄球菌的鉴定符合率为100．0％；对16株结果不一致的随即用16S rRN A作进一步分析，其中15株鉴定结果与MALDI-TOF MS结果一致，MALDI-TOF MS与16S rRNA测序法对葡萄球菌属的鉴定能力符合率更高。结论与传统的VITEK-2鉴定方法比较，MALOT-TOF MS具有简便、快速、敏感、准确等优点，可用于葡萄球菌属的鉴定。
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 VITEK-2 葡萄球菌属 鉴定 -
应用MALDI-TOF-MS技术分析HIV感染者血清多肽变化
目的 用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术,分析艾滋病病毒(HIV)感染者和健康人血清多肽图谱的变化.方法 选取20例HIV感染者、24例健康对照者的血清,经Zipplate C18层析预分离后,运用MALDI-TOF-MS分析检测,获得HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱,并用SPSS 13.0软件对数据进行分析.随后,用质谱串联技术(MS/MS)对两个差异表达显著的多肽峰测定肽序列,在SWISS-PROT数据库进行多肽鉴定.结果 在分子量为800～4 000D范围内,共发现500个多肽峰,其中11个多肽峰在HIV感染者组、正常对照组中表达均有显著差异(P<0.05),5个差异多肽在HIV感染者组中表达上调(m/z l 418.67、1 465.67、1 777.82、1 864.82和2 080.23),6个差异多肽在HIV感染者组中表达下调(m/z 904.71、920.73、1 076.73、1 521.79、1 552.75和2 080.78);经质谱串联技术对两个表达显著差异的多肽峰测定肽序列,鉴定结果分别是纤维蛋白多肽(Fibrinopeptide)、激肽原(Kininogen processor).结论 HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱有显著差异,通过多肽指纹图谱找到的HIV相关多肽,为今后开发HIV诊断试剂和治疗药物,提供科学依据.
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应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱源后衰变技术鉴定蛋白质
目的应用源后衰变(PSD)技术结合数据库检索鉴定二维蛋白质电泳(2DE)胶上的蛋白质斑点.方法用已知多肽(ACTH)18～39肽段和TPA被胰酶降解后的1个肽段建立了PSD-MALDI-TOF-MS方法.结果应用已建立的PSD-MALDI-TOF-MS法分别将2DE分离后胶上的2个未知蛋白质斑点鉴定为40S核糖体蛋白S12和dnaK抑制蛋白.结论PSD技术在蛋白质组学研究中有较大的应用前景.
关键词： 蛋白质组学 源后衰变 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 肽质量指纹谱 多肽测序 -
儿童感染沙门菌耐药特点及鉴定方法的研究
目的 研究引起儿童感染的沙门菌耐药特点及快速鉴定方法.方法 选择沙门菌75株,使用标准生物化学和血清学试验对所有菌株进行鉴定;使用16S rRNA基因测序法鉴定;使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)法鉴定,以上两种方法结果与传统培养方法结果进行比对分析.使用Kerby-Bauer纸片扩散法对常用抗生素进行敏感性试验,使用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)测定对广谱β-内酰胺类药物耐药的基因.结果 75株沙门菌中,鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌检出率高,分别为32株和26株.16SrRNA基因测序法与传统培养法的符合率为100％.MALDI-TOF-MS法的属符合率为100％,其中鉴定率在99.9％以上的为17株,90％以上的为32株,80％以上的为26株,结果均可信,但其对具体血清型的符合率不高.75株沙门菌中,耐药率高的是氨苄西林(69.3％,52/75),其次是氨苄西林/舒巴坦(44.0％,33/75),第三是萘啶酸(42.7％,32/75).75株沙门菌中共检出19株对广谱β-内酰胺类药物耐药,占25.3％.19株中有15株携带blaCTX-M基因(8株为blaCTX-M-14,2株为blaCTX-M-9,1株为blaCTX-M-34,2株为blaCTX-M-3,2株为blaCTX-M-15),8株携带blaTEM-1基因,4株携带blaOXA-1基因.结论 16S rRNA基因测序法作为细菌鉴定的金标准,以其快速准确著称,可作为传统鉴定法的补充方法.MALDI-TOF-MS法可以快速鉴定沙门菌,但仅在科研模式下指向性地提示血清型,因此需采用其他辅助技术进行鉴定.引起儿童腹泻的沙门菌对多种抗生素耐药,对3代头孢菌素类的耐药主要由blaCTX-M型引起.
