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重症肌无力患者胸腺增生组织中11000条带的蛋白质组学分析
目的:探讨重症肌无力(MG)患者胸腺增生组织中相对分子质量为11 000差异(异常)条带的蛋白质组成.方法:采用非还原性SDS-PAGE制备型电泳对11 000条带进行筛选和富集;应用双向电泳得到蛋白质二维图谱,并对差异蛋白点进行质谱分析;应用免疫组化法比较20例MG胸腺增生组织和10例正常对照组织中4.1R蛋白的表达水平.结果:MG患者胸腺增生组织中目标条带的阳性率为72.7%(8/11),该条带由(30±6)个蛋白点组成,质谱分析显示有16个高表达差异蛋白点,其中3个蛋白得到鉴定,分别为4.1R蛋白、自整合抑制因子1和胆碱乙酰转移酶.免疫组化结果显示,与正常对照组的(0.98±0.18)相比,MG患者胸腺增生组织中4.1R蛋白表达水平为(1.55±0.46)明显增高(t=3.054,P=0.016).结论:MG胸腺增生组织11 000条带由多个蛋白点构成,这些蛋白主要功能涉及细胞骨架的组成、细胞内信息传递和乙酰胆碱合成等.
关键词： 重症肌无力 蛋白质组学 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 双向电泳 4.1R蛋白 -
宫颈鳞状细胞癌与食管鳞状细胞癌患者血清蛋白质谱比较
目的:探讨宫颈鳞状细胞痛和食管鳞状细胞癌同时高发的地区(河南豫北地区)2种肿瘤患者血清中相关蛋白的改变,筛选与2种肿瘤相关的分子标志物.方法:采用弱阳离子交换磁珠(MB-WCX)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAIDI-TOF-MS)仪及配套软件对48例宫颈鳞状细胞癌、38例宫颈上皮内瘤变、44例食管鳞状细胞癌、37例食管黏膜不典型增生患者及50例对照人群的血清样本进行蛋白质谱分析.结果:宫颈(食管)鳞状细胞癌组中有4种共同差异蛋白且表达下调,质荷比为M1 865.58、M2 104.84、M4 070.93、M4 209.83;宫颈上皮内瘤变和食管黏膜不典型增生组中有5种共同差异蛋白,质荷比为M2 660.10、M4 209.83、M2 862.82的3个蛋白表达下调,质荷比为M1 349.67、M1 740.76的2个蛋白表达上调;在人乳头瘤病毒(HPV)16(+)食管鳞状细胞癌与HPV(-)食管鳞状细胞癌组中有16种差异蛋白.且质荷比M4 209.83的蛋白为鳞状细胞癌、癌前病变、HPV16(+)/HPV(-)食管鳞状细胞癌组共同的差异蛋白.结论:宫颈(食管)鳞状细胞癌患者血清中有相同的蛋白改变,提示在2者同时高发的地区2种肿瘤存在相似的发病机制.M4 290.83可能为HPV16引起的靶蛋白,并且参与了2种肿瘤的发生发展过程.
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失血性休克大鼠血浆蛋白质的差异分析
目的 应用蛋白质双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis, 2-DE) 技术分析在急性重度失血性休克(acute severe hemorrhagic shock, ASHS)条件下大鼠血浆蛋白质组表达的差异.方法 16 只雄性 Wistar大鼠随机分成对照组(sham hemorrhage shock, SHS)和ASHS模型组,每组8只.采用股动脉放血的方法制备模型,在规定时间内处死大鼠并收集血浆,去除血浆中的高丰度蛋白后进行 2-DE,运用 Image Master 2D Platinum v 5.0 凝胶图像分析软件对 2-DE 凝胶图像进行差异表达分析,有意义的差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行肽质量指纹图谱分析,借助Swiss-prot 数据库进行蛋白质搜索和鉴定.结果 SHS 组和 ASHS 组肝脏的 2-DE 图谱分别平均识别到(570.0±0.9)和(578.0±1.4)个蛋白质点,SHS 组和 ASHS 组肝脏间平均匹配率达 83.6 %～86.2 %,共发现 8 个差异有意义的蛋白质点,鉴定出了白蛋白、甲状腺激素结合蛋白-D 链蛋白和信号素-3D 前体等 3 种蛋白质.结论 以 2-DE 技术得到重复性和分辨率都较好的 2-DE 图谱,并初步鉴定急性重度失血性休克后大鼠血浆去除高丰度蛋白后的差异表达蛋白质,为深入研究失血性休克的生理病理机制及寻找失血性休克预防和治疗的生物标志物提供了依据.
关键词： 失血性休克 蛋白质组 血浆 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 -
DICER基因多态性与食管癌淋巴结转移危险因素的关系
目的 探讨中国汉族人群中DICER基因rs3742330多态性与食管癌淋巴结转移危险因素的关系.方法 采用以医院为基础的病例-病例研究方法,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术分析85例有淋巴结转移的食管癌和270例无淋巴结转移的食管癌DICER基因rs3742330基因多态性,计算各种基因型与食管癌淋巴结转移的发生风险及其95％可信区间.结果 dICER rs3742330 A＞G多态三种基因型AA、AG、GG在食管癌淋巴结转移组的频率分别为31.76％、61.18％、7.06％,在无淋巴结转移组的频率分别为34.44％、48.15％、17.41％,与携带DICERrs3742330 AA基因型的个体相比较,DICER rs3742330 GG基因型显著减少食管癌淋巴结转移发生的危险.结论 DICER rs3742330 A＞G基因多态性可能是食管癌淋巴结转移的保护性因素.
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基质辅助激光解析电离飞行时间质谱应用于临床微生物快速鉴定诊断
传统的细菌鉴定是一个复杂的过程.当病人疑似细菌感染时,临床医生需要收集其流行病学信息、症状和体征,并及时采集病人样本(如血液、尿液、痰等)送微生物实验室进行验证性实验.检验人员需要对样本进行培养、分离,并根据形态学、生物化学、血清学和分子学方法等确定微生物种类及体外药敏试验,进而指导临床用药[1].这些方法耗时较长,仅鉴定过程就需要5～48 h;形态学方法主要依靠肉眼观察判定,生物化学方法则易受干扰物影响,分子生物学方法操作复杂,成本昂贵,不便于临床常规使用.因此,快速而高效的微生物诊断技术对于确定病人治疗方案、缓解患者病痛至关重要.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)仅需几分钟就可将微生物样品准确鉴定出种或属水平,打破了传统鉴定方法的繁琐流程,大大缩短了样本检测时间,为临床微生物诊断带来了重大变革.本文通过介绍该技术对细菌、酵母菌及丝状真菌等微生物进行快速鉴定,为临床微生物的快速诊断提供指导.
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 微生物 鉴定 诊断 -
儿童肝母细胞瘤潜在标志物载脂蛋白A-I的筛选及鉴定
目的：筛选并鉴定出小儿肝母细胞瘤（HB）血清生物学标记物，以助HB的早期诊断。方法使用弱阳离子磁珠技术处理30例HB患儿、20例全身炎症反应综合征（SIRS）患儿和20例正常儿童的血清样品，利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）平台筛选出肿瘤组和正常组的差异性蛋白。SDS-PAGE纯化分离出目标蛋白质后，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定出目标蛋白质的氨基酸序列，并通过SwissProt数据库查找与之匹配的蛋白质。后使用Real-time PCR和ELISA技术验证该蛋白质的表达情况。结果 SELDI-TOF-MS筛选并排除炎症因子干扰后，发现HB组和正常组存在质合比为9348 Da的差异性蛋白质，在HB组的表达较低（P<0.05）。经鉴定此蛋白为载脂蛋白A-I（Apo A-I）。Real-time PCR和ELISA验证Apo A-I基因和蛋白在HB组均低表达，在正常组高表达。结论 Apo A-I可作为HB非炎症性蛋白质标记物，对其早期诊断有意义。[中国当代儿科杂志，2016，18（12）：1205-1210]
关键词： 肝母细胞瘤 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 载脂蛋白 蛋白质生物学标记物 儿童 -
大肠癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型研究
目的：研究建立大肠癌（colorectal cancer，CRC)）唾液蛋白质指纹图谱新型分子诊断模型。方法采集34例肠癌患者、45例健康志愿者（正常组）的唾液标本，用弱阳离子交换型（WCX）纳米磁珠联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术进行检测，获得各标本的蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard软件分析所获得的蛋白指纹图谱找出差异蛋白，再用Biomarker Patterns 5.0.2建立鉴别诊断模型。结果共检测到312个肠癌差异蛋白质峰，两组比值大于3（肠癌/正常对照＞3，或者正常对照/肠癌＞3），其中有37个差异蛋白质峰有统计学意义（P＜0.05）；其中有7个差异蛋白质峰肠癌组表达上调，28个差异蛋白质峰肠癌组表达下调，有35个差异蛋白质峰有显著差异（P＜0.01）。筛选建立了由m/z为2501.26、4779.95、3140.39的3个差异蛋白峰组成的肠癌与正常组的诊断模型，该模型的灵敏度和特异度分别为88%（30/34）和98%(44/45)；通过交叉验证法进一步验证诊断模型的可靠性，结果该模型的灵敏度和特异度分别为85%(29/34)和88%(37/45)。结论用WCX结合MALDI-TOF-MS技术建立的唾液蛋白诊断模型为肠癌的诊断提供了新途径。
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VITEK-MS质谱仪直接检测BacT/ALERT 3D仪阳性血培养瓶微生物的实验研究
目的 评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(VITEK-MS)仪直接检测BacT/ALERT 3D仪阳性培养瓶微生物方法的可行性与准确性.方法 选取2016年9月-2016年11月安徽医科大学第一附属医院微生物室BacT/ALERT 3D全自动培养仪当天报告阳性的血培养瓶,差速离心法处理后直接用VITEK-MS进行检测,并与常规鉴定法进行比较.结果 150例阳性培养瓶中,除13例培养瓶中无细菌生长外,VITEK-MS直接鉴定法正确检测出97例(70.8%)菌株,错误检测出10例(7.3%)菌株,30例(21.9%)鉴定无结果.其中,革兰阴性杆菌正确鉴定出61例(88.4%)菌株,鉴定无结果8例(11.6%);革兰阳性球菌正确鉴定出36例(52.9%)菌株,鉴定错误10例(14.7%),鉴定无结果22例(32.4%).结论 利用VITEK-MS直接鉴定阳性血培养瓶的方法准确性高、特异性强,革兰阴性杆菌鉴定准确率远高于革兰阳性球菌,且鉴定时间短(只需2h).该方法可以作为快速诊断阳性血培养瓶的新方法.
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 血培养 直接鉴定法 -
MALDI-TOF MS技术在鉴定临床少见非发酵菌中的应用
目的 评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在快速鉴定临床少见非发酵菌中的应用价值.方法 选取2013年7月-2016年10月安徽医科大学第一附属医院检验科分离的67株临床少见非发酵菌,包括痰液分离的21株,尿液分离的13株,血液分离的9株,骨髓液分离的9株,分泌物分离的8株,腹透液分离的2株,脑脊液分离的1株,胆汁分离的1株,其他体液分离的3株.以16S核糖体RNA(16SrRNA)序列分析为金标准,比较MALDI-TOF MS与Vitek2 Compact鉴定系统鉴定的准确性.结果 67株临床少见非发酵菌中,MALDI-TOF MS将66株(98.5%)鉴定到种水平,1株(1.5%)鉴定到属水平;Vitek2 Compact鉴定系统将59株(88.1%)鉴定到种水平,8株(11.9%)未能鉴定;67株少见非发酵菌均扩增到16SrRNA目的基因片段并成功测序,67株(100.0%)都成功鉴定到种水平.以16SrRNA序列分析为金标准,MALDI-TOF MS和Vitek2 Compact鉴定系统正确鉴定到种水平准确性分别为98.5%(66/67)和88.1%(59/67).结论 与传统的细菌生化反应方法相比,MALDI-TOF MS技术操作简便、耗时短、费用低,鉴定结果与16SrRNA序列分析的符合率高,可以提高临床对少见非发酵菌鉴定的准确率.
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 非发酵菌 鉴定 -
双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI-H520蛋白质组成分
目的：建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统，并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法：用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系 NCI H520总蛋白，银染显色， PDQuest 2DE软件分析，对部分蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 ( matrix assisted laser desorption/ionization time of flying mass spectrometry， MALDI TOF MS) 测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱，用 PeptIdent软件查询 SWISS PROT数据库。结果：获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱，图像分析探测到 3块胶的平均蛋白质点数为 (1146± 116)，平均匹配的点数为 (851± 95)，匹配率达 73.7％， 3块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性， IEF方向的平均偏差为 (1.52± 0.22)mm， SDS PAGE方向的平均偏差为 (1.97± 0.13) mm。随机取 60个蛋白质点进行胶内原位酶解 - 质谱指纹图分析得到了 54个蛋白质点的肽质指纹图，查询数据库初步鉴定了 44个蛋白质，其中部分是与细胞周期有关的蛋白，部分是与信号传导有关的蛋白，部分是与癌基因相关的蛋白。结论：通过该研究建立了一套分辨率和重复性均较好的固向 pH梯度双向凝胶电泳分离细胞总蛋白和银染胶内原位酶解后 MALDI TOF MS肽质指纹图分析鉴定方法。通过该方法系统分析人肺鳞癌细胞 NCI H520蛋白质组成分而获得的资料将有益于人肺鳞癌细胞蛋白质组数据库的建立，从而为肺鳞癌的诊断、预防和治疗提供依据。
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基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪应用于鲍曼不动杆菌检测的研究进展
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)是一种新型的软电离生物质谱,其原理是用激光照射待测物与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子使其电离,让离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同可以推断出片段的大小,适用于混合物及生物大分子的测定.MALDI-TOF MS 具有灵敏度高、准确度高及分辨率高的特点,为生命科学等研究领域中的一种强有力的分析测试手段.近年来,MALDITOF MS已逐渐应用于临床微生物学细菌鉴定[1] 及真菌药敏的研究[2],尤其在非发酵革兰阴性杆菌的鉴定方面有着重要的作用[3].鲍曼不动杆菌是一种常见的革兰阴性非发酵杆菌,是当前国内外医院感染和社区获得性感染的主要条件致病菌[4-5].本文就近年来MALDI-TOF MS在检测鲍曼不动杆菌中的研究进展进行综述.
关键词： 鲍氏不动杆菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 综述 -
MALDI-TOF MS在氯吡格雷基因多态性检测中的应用
目的 探讨基因多态性与氯吡格雷个体化用药的相关性及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在氯吡格雷基因多态性检测中的应用价值.方法 选取2015-2017年武警重庆总队医院住院的急性冠状动脉综合征(ACS)及拟进行经皮冠状动脉介入术(PCI)的患者160例,在氯吡格雷抗血小板治疗后第5天测定血小板聚集率;同时采用MALDI-TOF MS技术检测CYP2C19*2*、CYP2C19*3、CYP2C19*4、CYP2C19*5、CYP2C19*17和ABCBI、PON1、CES1基因多态性.结果 根据血小板大聚集率(MAR)将研究对象分为氯吡格雷抵抗(CR)组(n=75)和非氯吡格雷抵抗(NCR)组(n=85).160份样本等位基因检出率为100％,两组均未发现CYP2C19*4、CYP2C19*5、CYP2C19*17突变;携带CYP2C19*2等位基因A及CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3代谢型发生氯吡格雷抵抗的风险较高,携带ABCB1等位基因A的GA、AA代谢型发生氯吡格雷抵抗风险较高,携带PON1等位基因T的CT、TT代谢型发生氯吡格雷抵抗的风险较高,携带CES1等位基因T的CT、TT代谢型发生氯吡格雷抵抗的风险较低,差异均有统计学意义(P＜0.05);携带CYP2C19*3等位基因A发生氯吡格雷抵抗风险较高,CYP2C19* 3/*3型发生氯吡格雷的风险较低,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CYP2C19*2、ABC-BI、PON1基因突变增加氯吡格雷抵抗的风险,CES1基因突变降低氯吡格雷抵抗风险;MALDI-TOF MS具有准确性高、检测通量大、速度快、成本低等特点,适用于氯吡格雷基因多态性检测,指导临床个体化用药.
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 氯吡格雷 基因多态性 -
应用MALDI-TOF MS 技术快速鉴定布鲁菌
目的 利用MicroflexTMLT 型MALDI-TOF质谱仪建立布鲁菌蛋白质量指纹图谱数据库,并评估其在布鲁菌临床分离株鉴定中的应用价值.方法 2013年10月该院微生物实验室分离到1株疑似布鲁菌,经VITEK?2 Compact全自动微生物分析系统及16S rDNA 基因测序确认为马耳他布鲁菌,按照厂家推荐方法自建了布鲁菌蛋白质量指纹图谱数据库.对2015年4月及2016年6月该实验室分离到的2株疑似布鲁菌进行革兰染色、柯氏染色及氧化酶、触酶、快速尿素酶等生化反应试验.使用MicroflexTMLT型质谱仪收集这2株及外院3株布鲁菌疑似菌株的质量图谱,比对分析图谱时在MALDI Biotyper数据库基础上添加自建数据库,同时使用16S rDNA基因测序法鉴定上述细菌.结果 按照自建库推荐操作流程成功获得了基于BRUxh1的自建布鲁菌质量指纹图谱数据库. 2015年4月及2016年6月分离到的布鲁菌疑似菌株,涂片染色镜检均为革兰阴性短小球杆菌,氧化酶阳性,触酶阳性,尿素酶阳性(5 min内).这5株疑似菌株的质谱鉴定结果均为布鲁菌(质谱评分分别为2.407 、2.475 、2.436 、2.466 、2.397) ,16S rDNA 基因测序确认这5株细菌为布鲁菌.其中来自外院的2株细菌于外院VITEK?2 Compact系统鉴定时均错误地鉴定为吉氏玫瑰单胞菌.结论 联合MALDI Biotyper数据库与自建布鲁菌数据库对临床分离株进行质量图谱比对分析,可以实现对布鲁菌属细菌的准确鉴定,该方法快速、灵敏,对布鲁菌病的临床快速诊断具有较高的应用价值.
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 自建库 布鲁菌 鉴定 -
皂素处理联合MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性病原菌
目的 评估皂素处理联合基质辅助激光解析电离飞行时间(MALDI-TOF MS)直接鉴定血培养阳性病原菌的可行性,以及比较与传统血培养联合MALDI-TOF MS法鉴定结果的符合率.方法 共收集阳性血培养=12标本240例,使用皂素处理方法裂解血细胞富集和纯化待测菌,采用MALDI-TOF MS对待测标本进行菌种鉴定,同时阳性血培养瓶也转移接种至血平板进行培养,纯菌落同样用MALDI-TOF MS鉴定菌种.结果 240例阳性血培养瓶有197例真阳性瓶和43例假阳性瓶.在193例单菌株感染血培养瓶中,菌株的鉴定符合率为69.9％.其中75例革兰阴性杆菌的鉴定率为84.0％;65例葡萄球菌属的鉴定率分别为78.5％;10例肠球菌属的鉴定率为80.0％.43例假阳性报警血培养瓶的鉴定符合率为86.0％.结论 皂素提取联合MALDI-TOF MS可作为一种快速鉴定血流感染常见菌的有效方法,有较高的鉴定符合率,且成本低廉,可为临床快速、合理选用抗菌药物提供依据.
关键词： 皂素 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 血培养 直接鉴定 -
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在血培养阳性标本鉴定方面的应用进展
如今，随着抗菌药物特别是广谱抗菌药物的广泛应用，细菌耐药问题已逐渐成为全球性问题。怎样及时而有效地选择抗菌药物成为临床医生面临的一个难题。特别是在菌血症或是脓毒症等严重感染患者中，早期选用敏感抗菌药物可以有效降低病死率［1］。但传统的细菌鉴定多采用手工法，依靠形态学、革兰染色镜检和生物化学反应，速度慢，不能满足临床诊断和治疗的需要。近年来新发展起来的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI‐TOF MS）为细菌鉴定带来了新的进展，特别是 MALDI‐TOF MS 技术对血培养阳性标本直接鉴定的应用，可以将原有血培养阳性标本的鉴定时间由24～48 h缩短为几十分钟（含标本预处理所用的时间），为临床用药提供了更及时的指导。本文就 MALDI‐TOF MS 在血培养阳性标本鉴定方面取得的进展予以综述。
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 血培养 鉴定 -
二维电泳-质谱分析斯氏按蚊中约氏疟原虫卵囊黑化相关的差异表达蛋白
目的用2-DE和PMF分离和鉴定约氏疟原虫卵囊黑化相关的斯氏按蚊中肠和血淋巴差异表达蛋白.方法用固相pH梯度二维电泳分离中肠和血淋巴差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,Image Master VDS-CL凝胶扫描和PDQuest 2D Elite软件分析,差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用PeptIdent软件查询SWISS-PROT数据库.结果获得了分辨率和重复性均较好的2-DE考马斯亮蓝图谱,吸硝喹糖水组蚊血淋巴和中肠蛋白点分别有101个和104个,感染组分别有115个和162个,匹配点分别为51个和44个.斯氏按蚊血淋巴和中肠蛋白质组中蛋白点分别主要分布于酸性端和碱性端,血淋巴和中肠差异蛋白也分别主要分布于酸性端和碱性端.随机取25个差异蛋白点进行胶内原位酶解-肽质指纹图谱分析得到了16个蛋白质肽质指纹图,查询数据库初步鉴定了8个蛋白质,分别为与抗疟免疫、黑化、结构、糖代谢、细胞通讯等相关蛋白.结论建立了一套重复性和分辨率较好的斯氏按蚊蛋白质分离和鉴定的二维凝胶电泳-肽质谱指纹分析法,约氏疟原虫卵囊黑化前后,斯氏按蚊血淋巴和中肠伴随大量差异表达蛋白,部分蛋白可能与黑化有关.
关键词： 斯氏按蚊 蛋白质组 二维电泳 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 黑化 -
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测广州地区感染性腹泻病原菌
目的 了解广州地区感染性腹泻细菌性病原谱和流行特征,为本地区细菌性腹泻防治提供依据.方法 收集2012年11月-2013年5月本院腹泻患者的粪便标本300份,首先按照传染病监测技术平台的要求用肠道病原菌选择平板分离培养,再利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪鉴定腹泻病原菌.结果 300份腹泻病人粪便中共分离到7个菌属67株致病菌,检出率22.33％.67株病原菌中居首位的是沙门菌,占44.78％ (30/67),其次为弯曲菌,占28.36％ (24/67)和气单胞菌,占14.93％ (10/67).病原菌的检出率随着气温的变化而变化.沙门菌是成人组和儿童组常见的腹泻病原菌,空肠弯曲菌仅在儿童组中检出,两者检出率差异有统计学意义(P＜0.05),性别间检出率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 除沙门菌之外,人和动物共患的弯曲菌和气单胞菌是重要的腹泻病原菌之一,建议在儿童腹泻中开展弯曲菌的检测.
关键词： 弯曲菌属 气单胞菌属 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 腹泻 -
应用MALDI-TOF-MS检测肺鳞癌患者血清多肽并分析其与化疗疗效相关性
背景与目的 晚期肺鳞癌(squamous cell carcinoma of lung,SCC)一线治疗以化疗为主,其标准铂二联方案化疗只能给患者带来有限的获益.并且不同的患者对于化疗药物的获益不同.所以实现化疗药物优选择达到个体化预见性治疗尤为重要.本研究应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorp-tion/ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)检测初治晚期SCC患者接受紫杉醇类联合铂类化疗前血清多肽,并分析其与化疗疗效的相关性.方法 初治晚期SCC患者接受紫杉醇类联合铂类方案化疗,每两周期进行疗效评价.评效为完全缓解(complete response,CR)或部分缓解(partial response,PR)患者定义为化疗敏感组,疾病进展(progressive disease,PD)患者定义为耐药组.留取SCC患者化疗前血清样本,81例患者按照3:1的比例随机分为训练组(敏感组I与耐药组I)和验证组(敏感组II与耐药组II),预处理训练组血清样本并进行MALDI-TOF-MS检测,得到血清多肽指纹图谱.经ClinProTools软件系统分析处理,得到敏感组I与耐药组I的差异多肽.应用软件内置的3种不同的生物学算法分别建立疗效预测模型,选取优算法建立疗效预测模型.运用验证组进行盲样验证.结果 训练组共纳入30例敏感组患者,31例耐药组患者;验证组共纳入敏感与耐药组患者各10例.训练组在敏感与耐药组有96个差异多肽,其中具有统计学意义的多肽有16个(P<0.001).由5个多肽(1,897.75 Da,2,023.93 Da,3,683.36 Da,4,269.56 Da,5,341.29 Da)建立疗效预测模型.该模型对化疗敏感组患者的识别率为95.11%,交叉验证率为89.18%.经验证组进行盲样验证,其模型的准确率为85%,灵敏度为90.0%,特异性为80.0%.敏感组I中位无进展生存期(progress free survival,PFS)为7.2个月(95%CI:4.4-14.5);耐药组I中位PFS为1.8个月(95%CI:0.7-3.5).结果发现:4,232.04 Da、4,269.56 Da的差异多肽与SCC患者PFS存在相关性(P<0.001).结论 应用MALDI-TOF-MS技术可检测到化疗敏感组及耐药组患者的血清多肽存在差异,初步建立的疗效预测模型可用于预测紫杉醇类联合铂类方案化疗疗效.但需进一步扩大样本量完善及验证模型.
关键词： 肺肿瘤 化疗 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 蛋白质组学 治疗疗效 -
晚期NSCLC患者EGFR-TKI治疗过程中血清多肽变化及其临床意义的探索性研究
背景与目的本研究旨在应用基质辅助激光解析离子化-时间飞行质谱仪（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-lfight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）检测晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者在接受表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factorreceptor tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKIs）治疗过程中血清多肽的变化并探索其临床意义。方法收集34例接受EGFR-TKI治疗的晚期NSCLC患者TKI治疗前、佳疗效时及疾病进展后的自身配对血清样本102份。处理血清样本并应用MALDI-TOF-MS检测，得到质谱图后使用CPT统计软件进行分析，鉴定出差异多肽，并对其临床意义进行分析。结果34例接受EGFR-TKI治疗的患者无完全缓解（complete response, CR）患者，部分缓解（partial response, PR）11例，疾病稳定（stable disease, SD）23例，中位无进展生存期（progression-free survival, PFS）为8.0个月（95%CI：6.6-11.2）；中位总生存期（overall survival, OS）为11.4个月（95%CI：10.6-16.5）。对TKI治疗的三个不同时间点的血清进行质谱检测，结果显示三个时间点多肽指纹图谱均不相同；配对分析佳疗效时与基线时质谱数据经CPT软件共鉴定出差异多肽峰87个，筛选出两组间有统计学差异[P<0.001、曲线下面积（area under curve, AUC）≥0.9]的多肽峰1个；疾病进展时与基线时共鉴定出差异多肽峰96个，筛选出两组间有统计学差异（P<0.001, AUC≥0.9）的多肽峰3个；佳疗效时与疾病进展时共鉴定出差异多肽峰115个，筛选出两组间有统计学差异（P<0.001, AUC≥0.9）的多肽峰4个。结论 NSCLC患者TKI治疗过程中血清多肽存在动态变化，差异多肽可能与治疗效果、疾病进展相关，差异多肽的特性、临床意义需进一步鉴定和验证。
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MALDI-TOF质谱筛查NSCLC患者血清特异性多肽的探索性研究
背景与目的 早期诊断是提高肺癌生存率的关键,传统的肺癌诊断技术仍存在一定局限性.鉴于近年来以质谱为核心技术的肿瘤蛋白组学在癌症诊断方面的初步研究,本研究探索性应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者和健康人群的血清差异多肽,以建立NSCLC的血清分类模型.方法 将年龄和性别匹配的133例NSCLC患者和132例健康者血清标本按照3∶1的比例随机分为两组:训练组由100例NSCLC患者和100例健康者血清标本组成,用以建立分类模型；测试组由33例NSCLC患者和32例健康者血清标本组成,用以验证模型.采用铜离子鳌合纳米磁珠提取血清多肽、MALDI-TOF-MS技术检测得到质谱图.ClinProToolsTM统计软件分析训练组NSCLC患者与健康者之间的多肽图谱,从中筛选出一组差异多肽并建立分类模型,后用测试组对模型进行盲样验证.结果 在训练组中观察到血清质荷比(m/z)在1,000 Da-10,000 Da范围内有131个差异多肽信号峰,在此范围内共得到14个有统计学意义的差异多肽峰(P＜0.000,001; AUC≥0.9),其中NSCLC患者与健康者相比,表达上调的多肽有2个,表达下调的有12个,由统计软件筛选出3个多肽峰(7,478.59 Da、2,271.44 Da、4,468.38 Da)建立分类模型,然后对测试组进行验证,其盲样验证敏感性100％,特异性96.9％,准确率98.5％.结论 本组研究显示NSCLC患者与健康人群的血清多肽存在差异,应用MALDI-TOF-MS技术可建立NSCLC的血清多肽分类模型且小规模验证具有较好的敏感性和特异性,希望大规模验证模型,并与传统诊断方法对照或结合,进而尝试建立一种新的NSCLC早期诊断模式.
