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奎宁鎓肟类化合物的合成及抗梭曼作用/芥子气兔眼角膜损伤模型的建立/素高捷疗眼膏治疗芥子气角膜损伤的实验/表皮生长因子对芥子气兔眼角膜损伤的治疗/芥子气诱导大鼠小肠上皮细胞的凋亡
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溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型细胞增殖的影响
目的:观察溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型细胞增殖的影响.方法:应用三硝基苯磺酸灌肠法复制溃疡性结肠炎大鼠模型,3d后采集血液,分离血清,作为损伤剂作用于Caco-2细胞一段时间,模拟细胞炎性损伤模型,MTT法观察不同浓度溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型细胞增殖的影响.结果:与模型血清组比较,10%,5%,2.5%,1.25%,0.625%溃结灵含药血清作用Caco-2细胞损伤模型24h后,有促进其增殖的作用,尤以10%溃结灵含药血清效果佳(P<0.05).结论:溃结灵含药血清可促进Caco-2细胞炎性损伤后细胞增殖.
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心肌损伤动物模型的建立及应用
为适应不同研究的需要,目前已有很多种心肌损伤的动物模型,现将常用的心肌损伤动物模型的建立方法、病理机制及其应用作一综述.1 实验动物的选择常用的实验动物主要有各年龄层次的鼠、家兔和狗等,其中大鼠为常用.大鼠价格低,易于饲养管理,基本可用于各种心肌损伤模型,但由于体积小,如需手术制作模型,则易损伤其他组织器官.家兔易于手术操作,但较脆弱,术中易猝死,不能耐受慢性模型的制作过程.狗等大型动物易于实验外科手术操作,有利于血流动力学监测和多次采血、多项指标测定,还可用于制作急、慢性心肌损伤模型.根据所做的实验选择合适的动物是实验成功的基础.
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小剂量阿司匹林所致大鼠胃黏膜损伤ICAM-1表达的研究
目的:应用小剂量阿司匹林灌服大鼠制备胃黏膜损伤模型,观察小剂量阿司匹林对胃黏膜的损伤、小剂量阿司匹林对胃肠道的危险性,了解细胞间黏附分子(ICAM-1)是否参与小剂量阿司匹林引起的胃黏膜损伤.方法:用5.021 mg/kg小剂量阿司匹林灌服大鼠,观察大鼠胃黏膜损伤情况,同时应用免疫组化,检测ICAM-1在胃黏膜细胞的表达.结果:用5.021 mg/kg小剂量阿司匹林灌胃后3 d实验组开始出现胃黏膜损伤的表现,损伤指数为9.11±0.62,14 d损伤达高峰,损伤指数为23.52±0.53.在灌服小剂量阿司匹林的48只实验组大鼠中,有40只出现胃黏膜损伤的改变,损伤的发生率为83.3%.免疫组化结果显示ICAM-1在用药后3 d开始表达,7 d后逐渐升高,21 d达高峰,28d及35 d仅有少量表达.实验组用药后与用药前比较ICAM-1表达水平有明显差异;对照组与实验组比较ICAM-1均明显呈低水平表达;对照组之间ICAM-1表达水平无明显差异.结论:用5.021 ms/kg小剂量阿司匹林可以成功地制备胃黏膜损伤动物模型;小剂量阿司匹林可造成胃黏膜损伤、小剂量阿司匹林对大鼠胃黏膜具有一定的危险性;ICAM-1在小剂量阿司匹林引起的胃黏膜损伤的发病机制中具有一定的作用.
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IL-6与整合素家族细胞黏附分子在大鼠急性坏死性胰腺炎合并多器官损伤模型中的表达
目的:检测IL-6与整合素家族细胞黏附分子LFA-1,Mac-1在大鼠急性坏死性胰腺炎合并多器官损伤中表达的动态变化.方法:应用放免法连续测定大鼠急性坏死性胰腺炎合并多器官损伤模型血清IL-6的变化.应用流式细胞仪,于多个时相点检测整合素家族细胞黏附分子LFA-1,Mac-1在SD大鼠急性坏死性胰腺炎合并多器官损伤血中性粒细胞表面表达的变化并检测血浆淀粉酶及胰腺、肺和肾脏的病理学损害.结果:IL-6,LFA-1和Mac-1在炎症组中各个时相点的表达均明显高于对照组,LFA-1:1 h,7.6±0.4 vs 22.7±1.6(P<0.01);3 h,7.9±0.5 vs 26.7±5.5(P<0.01);6 h,13.5±1.8vs 30.3±1.66(P<0.01);12 h,9.7±0.7 vs 20.3±4.2(P<0.01);24 h,10.1±1.1 vs 15.9±0.7(P<0.01).Mac-1:1 h,6.2±1.1 vs 7.0±2.5(P<0.05);3 h,6.3±0.8 vs 36.0±1.5(P<0.01);6 h,7.9±1.2 vs 27.1±1.4(P<0.01);12 h,6.4±0.4 vs 22.5±2.1(P<0.01);24 h,7.1±0.4 vs 20.6±1.6(P<0.01).IL-6:1 h,65.6±3.2 vs 72.4±4.0(P<0.05);3 h,68.2±5.5 vs 155.3±16.3(P<0.01);6 h,69.3±2.6 vs 229.2±16.4(P<0.01);12 h,73.4±2.6 vs 287.7±13.9(P<0.01);24 h,76.93±3.3 vs289.5±16.1(P<0.01).炎症组中血浆淀粉酶明显高于对照组,并有明显的胰腺、肺和肾脏的病理学改变.结论:IL-6和整合素家族细胞黏附分子LFA-1,Mac-1均参与了急性坏死性胰腺炎继发多器官功能损伤的过程.
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大鼠胃黏膜损伤修复时早期应答基因c-Jun及c-met的表达
目的:建立无水乙醇急性胃黏膜损伤大鼠模型并观察早期应答基因c-Jun和c-met对胃黏膜损伤修复的影响.方法:采用无水乙醇1 mL胃饲诱发急性胃黏膜损伤大鼠模型,并于伤后0,4,8 d分别处理一组大鼠,观察损伤模型自然修复过程,免疫组织化学技术检测早期应答基因c-Jun和c-met的表达.结果:在损伤模型自然修复过程中,损伤后4,8 d组大鼠胃黏膜损伤指数(LI)为32±7,18±3,均显著低于损伤模型组75±11,(P<0.05);免疫组织化学显示损伤后8 d组大鼠胃黏膜c-Jun的阳性表达率为87.5%,显著高于正常对照组的12.5%,c-met的阳性表达率为62.5%,均显著高于正常对照的0及损伤模型组的0(P<0.05).结论:早期应答基因c-Jun和c-met的表达能促进急性胃黏膜损伤的修复,对黏膜损伤的自愈具有重要作用.
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左旋精氨酸对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨左旋精氨酸(L-arg)对大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法:将24只SD大鼠随机分为对照组(n=12)和灌喂精氨酸组(n=12).制备大鼠肝I/R损伤模型,观察损伤后谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)和肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化及肝组织病理变化.结果:L-arg组:ALT、AST、LDH明显下降t分别为3.66,14.28,6.22(P<0.01).MDA含量明显降低(t=3.21,P<0.01),SOD及NO活性明显升高(t=3.71,8.93,P<0.01),组织的病理改变也轻于对照组.结论:左旋精氨酸具有减轻肝I/R引起的肝功损害和脂质过氧化损害,其机制可能与血清NO含量增加有关.
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雷帕霉素对大鼠球囊损伤后血管平滑肌细胞迁移及内膜增殖的抑制作用
本文通过建立大鼠腹主动脉球囊损伤模型,应用新型免疫抑制剂雷帕霉素进行干预,观察雷帕霉素对损伤后大鼠在体血管平滑肌细胞(VSMC)迁移及内膜增殖的抑制作用.
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内质网应激在唯BH3蛋白Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用
目的:探讨内质网应激在唯BH3蛋白Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。
方法:在体外原代培养出生1-3天的大鼠心肌细胞,并用抗ɑ-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。用脂质体转染法将Bim-siRNA转染心肌细胞,制作缺血缺氧损伤模型(转染48 h后给予缺氧12 h处理)。实验分组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+阴性对照siRNA组;(4)缺氧+脂质体组;(5)缺氧+Bim-siRNA组。用MTT法观察细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度变化情况;用Western blot检测心肌细胞中Bim及内质网应激标志分子 Caspase-12和InSP3蛋白的表达情况。 -
溶血磷脂酸抑制过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞的凋亡研究
目的:干细胞移植是近年来缺血性心脏病治疗的新策略,移植后细胞存活率低下是限制其疗效的关键问题。本研究针对移植干细胞所面临的氧化应激心肌微环境,利用过氧化氢(H2O2)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)凋亡的细胞氧化应激损伤模型,探讨一种内源性生物活性分子-溶血磷脂酸(LPA)对氧化应激诱导的BMSC凋亡的保护作用及其信号机制。
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旁分泌机制在脂肪间充质干细胞移植治疗心肌梗死中的作用
目的:探讨旁分泌机制在脂肪间充质干细胞(ADSC)移植治疗心肌梗死中的作用。
方法:原代分离和培养人ADSC,将经鉴定的第3~5代的ADSC用于实验。①用8~10周龄(20~24 g)的雄性C57B/L小鼠,结扎左前降支建立心肌梗死(MI)损伤模型,实验分假手术组,MI+DMEM/F12组和MI+ADSC-CM(条件培养液)组(n=12)。在MI处理的小鼠心肌梗死边缘区分别注射DMEM/F12和ADSC-CM,观察动物生存率、TTC染色测量心肌梗死面积、超声评价心功能变化、TUNEL染色检测心肌细胞凋亡等方法评价心肌梗死的治疗效果。②用H2O2建立乳鼠心肌细胞(NRVM)体外损伤模型,观察ADSC-CM对心肌细胞的保护作用。实验分对照组,H2O2+DMEM/F12组和H2O2+ADSC-CM组(n=5)。分别用caspase-3蛋白定量和TUNEL染色检测心肌细胞凋亡。 -
沉默唯BH3蛋白Bim的表达对缺氧致大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的:探讨唯BH3蛋白Bim在缺氧致大鼠心肌细胞凋亡中的作用。
方法:在体外原代培养出生1~3天的大鼠心肌细胞,并用抗ɑ-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。用脂质体法将Bim-siRNA瞬时转染细胞,制作缺血缺氧损伤模型(转染48 h后给予缺氧12 h处理)。实验分组:①正常对照组;②缺氧组;③缺氧+阴性对照siRNA组;④缺氧+脂质体组;⑤缺氧+Bim-siRNA组。用倒置显微镜观察并记录心肌细胞搏动频率与节律;用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量,以判断细胞损伤情况;用MTT法检测细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用Western blot检测Bim、Bax、Bcl-2和p-P38MAPK在心肌细胞中的表达情况。 -
一氧化氮在兔肺动脉栓塞再灌注肺损伤中的作用
一氧化氮是近年来研究较多的一个具有自由基性质的生物信息分子.近年来研究发现一氧化氮与急性兔动脉栓塞再灌注损伤关系密切,但具体机制不十分明确,为此,我们应用新西兰白兔建立急性肺血栓栓塞再灌注损伤模型,探讨一氧化氮在肺血栓栓塞再灌注损伤发生发展中的作用机制.
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缬沙坦与卡托普利抑制动脉损伤后内膜增生作用的比较
通过血管紧张素Ⅱ(AngII)受体阻滞剂缬沙坦(valsartan)和血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)卡托普利(catopril)对兔颈总动脉球囊损伤模型的作用,比较二者对内膜增生的影响 .
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中枢和外周神经损伤后再生早期神经元胞体基因表达的差异
目的:基因芯片技术在进行功能基因组的研究方面具有高通量、大规模、相关性分析等其他方法所不可比拟的优势.我们应用CLONTECH公司的AtlasTM 1.2大鼠cDNA microarray试剂盒及Image 3.0软件分析了大鼠脊髓和坐骨神经损伤后神经元分布区组织的基因表达谱,发现有多种结构和功能基因表达存在差异.我们将筛选出的部分基因用RT-PCR的方法在动物模型中进行了验证.方法:雄性Wistar大鼠,体重200±20克,随机分为坐骨神经夹伤和脊髓半横断损伤两组.伤后7d取相应的神经元胞体分布区神经组织,提取总RNA;根据脊髓损伤和坐骨神经夹伤后神经元胞体区神经组织cDNA microarray分析筛选的结果,选择的基因有即刻早期基因(Fos,Jun-B)、与信号转导有关的分子(14-3-3PGS,GPR12,FRAG1)、与细胞增殖有关的分子(PC-NA)、参与细胞凋亡调节的分子(Bcl-2,Bcl-X)、与神经细胞可塑性有关的分子(NCAM)以及胶质细胞来源的分子(MBP).用RT-PCR的相对定量的方法检测不同损伤模型中胞体区神经组织基因表达的水平,并进行分析对比.结果:(1)筛选出的基因在坐骨神经损伤后表达呈增加趋势的多与促进生长有关,包括GAP43,PCNA,NCAM,Bcl-2等;(2)脊髓损伤后其相应的皮层感觉运动区神经组织基因表达变化的种类与坐骨神经损伤后脊髓相应节段有所不同:即早基因Jun-B、与细胞内信号转导有关的分子14-3-3PGS、GPR12及FRAG1基因表达上调;(3)胶质细胞源性的分子BMP(myelin basic protein)在中枢和外周神经损伤后表达均呈上升趋势,提示轴突损伤后受损神经元胞体周围的胶质细胞也受到影响.结论:脊髓和坐骨神经损伤后相应胞体分布区神经组织基因表达确实存在差异,进一步动态观察这些基因在整体和离体损伤模型中表达的变化规律、进行多基因相关性的分析以及进行功能研究将有可能使我们更加明确这些基因变化在神经再生调控中的作用.
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细胞生物学治疗方法在椎间盘退行性病变方面的研究
在近几年几种以细胞为基础的治疗来刺激椎间盘再生过程得到倡议:造血干细胞( haematopoietic stem cells HSC )、胎儿脊柱细胞( fetal spine cells )、永生性髓核细胞系( immor-talized NP-cell lines )、自体椎间盘软骨细胞( autologous IVD chondrocytes )、胚胎干细胞( embryonic stem cells SC ),诱导性多能行胚胎干细胞( induced pluripotent SC )、嗅觉胚胎干细胞( olfactory SC )和来源于骨髓或脐带血的细胞的MSC已经被证明具有促进椎间盘再生/修复的潜力。髓核祖细胞(从髓核中单独分离得到的大约具有1%的比率)可分化为软骨形成细胞和神经源性细胞系,表明具有促进椎间盘再生的潜力[1]。除了椎间盘再生之外,祖细胞可能起到保护性作用。在调节椎间盘的炎症方面,在体外共同培养的纤维环细胞与巨噬细胞中研究发现家兔髓核祖细胞被证明可降低促炎性细胞:IL-6、IL-8以及iNOS的表达水平[99]。对于椎间盘再生而言,MSC为主要的具有吸引力的替代细胞类型,部分是因为它们能够做为自体移植物。在犬类动物模型的研究中,MSCs能够增加Ⅱ型胶原的表达同时降低椎间盘内细胞凋亡的数量。在家兔模型中, MSCs能够在椎间盘中保持24周左右。但是移植性MSCs的数量为关键。犬类动物模型中,每个椎间盘含有的MSCs细胞数量非常关键,每个椎间盘中会有106个MSCs为理想,因为105个MSCs可导致细胞的生存能力下降,而107个MSCs可诱导细胞凋亡。除了MSCs的多种分化能力之外其与免疫调节相关的作用已经得到证明。 MSCs在炎症中的作用是建立在它们作为细胞因子释放工厂直接与损伤细胞相互作用的积极作用[2]。在一项小鼠的肺损伤模型中研究中,MSCs被发现可分泌IL-1Ra或在小鼠梗死模型中产生有能力的抗炎症蛋白:TNF-α刺激基因/蛋白6( TNF-αstimulated gene/protein 6 TSG-6)。有趣的是在全身性应用MSCs之后,TSG-6也被鉴定为大鼠角膜损伤模型中的关键因子。将MSCs移植入小猪、兔、犬椎间盘后,在FaS配体(其他的免疫特免位点发现的一种蛋白质)表达重新恢复,表明MSCs可能分化为细胞表达FasL,也可能刺激新生的髓核细胞产生这种FasL,这样会促成在退变性椎间盘中免疫特免位点的恢复。
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体外膜肺氧合过程中心脏顿抑的动物实验
随着医学和科学技术的进展,体外膜肺氧合(ECMO)成为治疗的有效手段之一。ECMO大量应用的过程中发现不少问题需探讨,心脏顿抑(cardiac stun)就是其中之一〔1,2〕。我们的实验拟探讨心脏顿抑的可能机制。 材料和方法杂种犬13条(解放军总医院动物中心提供),体重13~26?kg。2.5%硫贲妥钠静脉麻醉,气管插管,呼吸机辅助呼吸。随机分3组:A组为ECMO加冠状动脉(冠脉)结扎再灌注组,犬7条,正中切口,建立右心房-主动脉径路ECMO转流,流量每分钟100?ml/kg,灌注平均压97.5mm?Hg(1?mm?Hg=0.133?kPa),平稳后结扎冠状动脉左前降支主干及第一对角支15?min,松开造成泵衰再灌注损伤模型,行ECMO辅助。B组为ECMO组,犬3条,ECMO转流指标同A组,对心脏不进行任何损伤。C组为冠脉结扎再灌注组,犬3条与A组同样结扎,造成泵衰再灌注损伤模型。 实验中测左室压,心电图,动脉、冠状静脉窦、膜肺出口处血气,用硫代巴比妥酸显色法测血浆丙二醛(MDA)含量,描记压力曲线。 所得数据均以**±S**表示,采用自身前后对照,以每组初始状态为对照,两时点间比较用t检验,P<0.05为差异有显著性意义,P<0.01为差异有极显著性意义。 结果实验犬实验过程中无术中死亡犬。 1.心电图改变 A组结扎冠脉10?min出现ST段弓背抬高的特征性缺血改变,ECMO辅助120?min ST段恢复正常。B组未出现特征性缺血改变。ECMO 240?min心率与对照值相比明显减慢,差异有显著性意义(P<0.05)。C组结扎冠脉10?min左右ST段抬高,再灌注30、60?min心率与对照值相比明显减慢,差异有极显著性意义(P<0.01)。 结扎冠脉后出现的室颤、T波倒置、QRS波加宽,ECMO辅助后均可恢复。 2.A、B组膜肺出口处与动脉血氧分压的差值的变化 A组ECMO 10?min时该差值为(331±40)?mm?Hg,随ECMO延长,逐渐减小,ECMO 120?min为(37±10)?mm?Hg,与对照值相比差异有极显著意义(P<0.01)。B组ECMO 10?min时(307±26)?mm?Hg,120?min为(66±20)?mm?Hg,与对照值相比差异有显著意义(P<0.05)。C组结扎冠状动脉15?min时动脉氧分压降至(88±7)?mm?Hg,与对照值相比差异无显著意义(P>0.05)。 3.冠状窦内氧分压变化 A组结扎冠脉10?min为(29±4)mm?Hg,ECMO180?min时增至(46±5)mm?Hg。B、C组未测本指标。 4.血浆丙二醛(MDA)含量的变化 A、C组血浆丙二醛在再灌注1?h后与对照值相比差异有显著意义(P<0.05),松开冠脉即刻与对照值相比差异无显著意义。B组各时点与对照值相比差异无显著意义(P>0.05)。 5.血流动力学变化 A组在ECMO辅助1.5?h时,股动脉压力波形近乎直线,左心室极少射血入主动脉,一般3~4个心动周期左室才有少量排血,ECMO流量增加,主动脉压(AP)明显增加,心脏胀,左室壁活动弱(图1);ECMO辅助3.5?h,AP波形曲线恢复,左室有较多血射入主动脉。B组在ECMO期间AP波形变化不大。C组在结扎冠脉10?min后AP波形稍降低,再灌注60?min恢复术前水平。 超声心动示A组在ECMO 1.5?h左右主动脉瓣开放受限,3~4次心动周期中仅有一次主动脉瓣开放,其余心动周期主动脉瓣完全关闭或开放受限,左室射血极少,左室扩大,心脏指数由0.40降到0.21,每搏输出量由14?ml降到5?ml;B、C组未出现类似现象。
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细胞外基质沉积在高氧致新生鼠肺损伤中的动态变化
细胞外基质(extracellular matrix,ECM)是存在于细胞之间结构和功能高度复杂的生命大分子,主要由胶原、糖蛋白(如纤维连接蛋白)及蛋白聚糖(如透明质酸)组成.本研究以高浓度氧致足月鼠肺损伤模型为对象,动态观察肺组织的形态学变化,并同步测定肺组织中Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及透明质酸(hyaluronic acid,HA)的含量,旨在探讨ECM在高氧致足月鼠肺损伤发生中的意义.
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高氧致新生鼠肺损伤中基质金属蛋白酶8和基质金属蛋白酶抑制剂1的动态表达及对Ⅲ型胶原的影响
基质金属蛋白酶类(matrix metalloproteinases,MMPs)是维持细胞外基质(extracellular matrix,ECM)稳定的一蛋白酶家族,它们与其特异性抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)结合,共同参与组织重塑等过程.MMP-8是一种胶原酶,能降解间质性胶原,在成人纤维化中起重要作用[1].本研究以高氧致新生鼠肺损伤模型为对象,动态观察肺组织中MMP-8、TIMP-1蛋白和mRNA表达以及Ⅲ型胶原蛋白含量的变化,以探讨在高氧致新生鼠肺损伤中MMP-8/TIMP-1对Ⅲ型胶原(collagen,Col)的作用.
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细胞外基质沉积在高氧致新生鼠肺损伤中的动态变化
目的探讨细胞外基质(ECM)沉积在高氧致新生鼠肺损伤发生、发展中的动态变化.方法将新生足月鼠60例随机分为实验组和对照组,应用酶联免疫吸附法测定肺组织中Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白(FN)及透明质酸(HA)的含量,并同时观察肺组织的形态及肺内胶原沉积变化.结果实验组肺组织初期仅表现为肺泡炎症反应,继之肺间质细胞开始增生,晚期大量成纤维细胞增生及肺内胶原沉积.实验组Ⅰ型胶原水平7 d明显增加(P<0.01),14 d持续升高,21 d达高峰(P<0.001);FN水平3 d开始升高(P<0.05),7 d达高峰(P<0.01),21 d降至正常;HA水平1 d开始升高(P<0.05),3 d达高峰(P<0.01),14 d恢复至正常水平.结论(1)高氧致足月鼠肺损伤模型在病理过程和病理变化上符合肺纤维化的发生、发展特点;(2)ECM沉积伴随于高氧致足月鼠肺损伤的全过程,早期肺内HA沉积可能参与肺泡的炎症反应,继之FN及Ⅰ型胶原沉积可能是导致肺纤维化的病理机制之一.