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P 蛋白文献资料
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乙型肝炎病毒P蛋白在大肠杆菌中的分段表达及纯化
目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)P基因分段重组原核表达质粒,并进行目的蛋白的表达和纯化.方法 PCR扩增HBV P基因的不同片段(1～534、1008～2040和2043～2526 bp).分别经双酶切后克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行可溶性分析.用Ni~(2+)-NTA凝胶亲和层析柱纯化融合蛋白,并进行Western blot分析.结果 重组原核表达质粒经酶切及测序证明构建正确.表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,表达量分别约占菌体总蛋白的34%、40%和36%.经Ni~(2+)-NTA纯化的目的蛋白纯度达90%以上,且具有良好的反应原性.结论 已成功构建了HBV P基因分段重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了重组蛋白,为研究HBV P蛋白的功能及病毒复制机制奠定了基础.
