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中蜂囊状幼虫病毒VP1基因的优化表达及其免疫原性分析
目的 原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性.方法 根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1 (wtVP1)基因进行优化(optiVP1),将基因wtVP1和optiVP1分别克隆至pGEX-6P-1原核表达系统,构建原核表达质粒pGEX-6P-wtVP1和pGEX-6P-optiVP1,分别转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并对诱导温度、IPTG终浓度及诱导时间进行优化,诱导蛋白经Western blot鉴定;重组蛋白经GSH-琼脂糖凝胶层析纯化;分别用PBS、纯化的GST标签蛋白、纯化的重组蛋白及CSBV纯化病毒免疫小鼠,经间接ELISA法检验各组小鼠的血清抗体效价.结果 优化后的VP1基因序列降低了密码子影响指数,提高了密码子适应指数;质粒pGEX-6P-wtVP1和pGEX-6P-optiVP1经鉴定证明构建正确;佳诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,30℃,220 r/rin诱导8h;诱导表达蛋白占菌体总蛋白百分比由wtVP1菌株(5.49±0.30)％提高至optiVP1菌株(59.7±0.51)％,纯化后纯度可达0.5 mg/ml;兔抗GST标签抗体及兔抗CSBV血清均与优化后的重组蛋白发生特异性反应;重组蛋白组小鼠二免后可产生较高水平抗体,明显高于PBS组和GST标签蛋白组(P＜0.05).结论 通过密码子优化实现了CSBV结构基因VP1的高效表达,表达蛋白可诱导小鼠机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性,为探讨CSBV感染的分子发病机制和制备抗CSBV病毒的多克隆抗体奠定了基础.
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克山病患者心肌肠道病毒VP1结构蛋白检测
目的探讨肠道病毒感染与克山病发病的关系.方法应用抗柯萨奇B5病毒(Coxsackie B5 virus,CVB5)VP1蛋白单克隆抗体,采用免疫组化方法,检测黑龙江、山东、云南省克山病病区急型、亚急型、慢型、潜在型克山病死亡病例心肌标本83例,风心病10例,冠心病10例,心肌炎21例,扩张型心肌病29例,非病区非正常死亡的正常人10例,病区发病季节非克山病死亡病例13例.结果克山病83例心肌标本中有74例VP1结构蛋白阳性,阳性率89.2%;风心病、冠心病、非正常死亡健康人VP1阳性检出率均为10%;心肌炎、扩张型心肌病VP1阳性检出率分别为66.7%和70%;病区发病季节非克山病死亡病人VP1阳性检出率为38.5%.结论来自3省份的各型克山病死亡病例心肌标本中均能检出肠道病毒VP1结构蛋白,克山病的发生与肠道病毒感染高度相关.
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人细小病毒B19IgM抗体间接ELISA检测方法的初步建立
目的：利用原核表达并纯化的人细小病毒B19（HPV B19）结构蛋白VP1初步建立HPV B19 IgM酶联免疫吸附试验（ELISA）的检测方法。方法以纯化的重组蛋白包被酶标板，建立IgM 间接ELISA检测方法，确定Cut-off值，并进行初步的应用。结果建立间接 ELISA方法Cut-off值为0．25，灵敏度为84．60％，特异性为99．70％，与对照试剂盒检测结果符合率为99．47％；用自产试剂盒检测115份孕妇和1700份健康献血志愿者血清中B19 IgM抗体，阳性率分别为12．17％和1．59％。结论通过包被 HPV B19-VP1蛋白建立的间接ELISA检测方法可用于 HPV B19早期感染或急性感染的辅助诊断。
