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人和BALB/c小鼠对梭子蟹过敏组分的比较及主要过敏原的分离纯化
目的 比较人和BALB/c小鼠对梭子蟹过敏的组分差异,评价用小鼠构建过敏模型对研究人类过敏症的可靠性,并对主要过敏原进行分离纯化.方法 制备梭子蟹蛋白浸液,经皮下注射建立小鼠过敏模型,获得特异的小鼠IgE(sIgE)血清,同时收集蟹过敏患者血清,采用Western blot法鉴定蟹的过敏组分,通过硫酸铵分段盐析和DEAE离子交换层析对主要过敏组分进行分离纯化.结果 用梭子蟹蛋白浸液成功建立了BALB/c小鼠过敏模型,并获得了高效价的sIgE血清.梭子蟹中有一相对分子质量为89 000的蛋白组分为人和小鼠共有的主要过敏原,通过硫酸铵分段盐析法和DEAE离子交换层析法分离到了该组分.结论 小鼠和人对梭子蟹过敏的组分基本一致,提示小鼠过敏模型可成为人类过敏症研究的可靠动物模型,纯化单一的过敏原组分有望提高讨敏症诊断和治疗的特异性.
关键词： 梭子蟹 过敏原 特异性IgE DEAE离子交换层析 Balb/c小鼠 -
河虾中主要过敏原组分鉴定及分离纯化
目的鉴定并分离纯化河虾中引起过敏反应的主要蛋白组分.方法河虾蛋白浸液皮下注射建立小鼠过敏模型,获得高效价特异性IgE血清用于免疫印迹分析.用饱和硫酸铵分段盐析和DEAE离子交换层析纯化目的蛋白.dot-ELISA及竞争ELISA检测纯化目的蛋白的过敏原活性.结果河虾蛋白浸液皮下注射成功建立了虾过敏小鼠模型.免疫印迹分析显示虾中有一分子量36kD的蛋白组分为主要过敏原.用硫酸铵分级沉淀和DEAE离子交换层析的方法成功分离到目的蛋白.dot-ELISA证明目的蛋白能与特异性IgE反应.竞争ELISA检测纯化目的蛋白与河虾蛋白浸液竞争结合特异性IgE的活性,大竞争抑制率可达60%.结论本实验成功鉴定并分离到河虾中一分子量为36 kD的主要过敏原组分,为过敏原的分析研究提供了一套比较完整的方法.
关键词： 过敏原 特异性IgE 免疫印迹 DEAE离子交换层析
