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A型肉毒毒素轻链文献资料
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A型肉毒毒素轻链蛋白的表达及纯化
目的 构建A型肉毒毒素轻链表达载体重组质粒,在大肠埃希菌中表达后,利用金属螯合层析柱纯化.方法 以pGEM-BoNT/AL轻链质粒为模板,PCR扩增BoNT/AL基因,克隆至表达载体pET-28(a)中,构建重组质粒pET-28(a)-BoNT/AL,转化E coli BL21(DE3),分别于37、30、25℃IPTG诱导表达,表达产物经Chelating Sepharose 4Fast Flow(Cu2+)层析柱纯化,纯化产物经尿素梯度复性.结果 质粒pET-28(a)-BoNT/AL经酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,主要以包涵体形式存在,37℃诱导表达量高,占菌体沉淀总蛋白的41％;包涵体经2％ Trition-X100和2 mol/L尿素洗涤后,可去除部分杂蛋白,8 mol/L尿素能溶解大部分包涵体;经再次浓缩后,蛋白浓度可达89μg/m1,纯度达90％.结论 成功克隆及表达了BoNT/A轻链基因,为制备抗BoNT/A轻链单链抗体以及研究肉毒中毒机制和治疗方案奠定了基础.
