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不同储存条件对结核亚单位疫苗参考品免疫原性的影响
目的 评价不同储存条件对结核亚单位疫苗参考品(简称参考品)免疫原性的影响.方法 按以下抗原与佐剂比例配制1人份疫苗参考品:[10 μg Ag85b蛋白+10 μg EC蛋白+50 μg PloyIC+0.2 mg Al (OH)3]/0.2 ml.将疫苗参考品于-70及4℃分别保存1、6、9、12个月,并于每个时间点免疫BALB/c小鼠,实验分4组:PBS组、冷藏组(4℃保存参考品)、冻存组(-70℃保存参考品)及现配组,均经小鼠后肢内侧肌肉注射,0.2 ml/只,共免疫3次,每次间隔10 d,末次注射10 d后,收集小鼠脾淋巴细胞,并经眼球采血,分离血清.ELISPOT法检测抗原特异性的IL-2、IFNγ水平,CCK-8法检测细胞增殖水平,间接ELISA法检测血清IgG抗体效价.结果 经Ag85b和EC刺激,现配组各月间的斑点形成细胞数(spot forming cells,SFCs)及脾细胞增殖指数(stimulating indox,SI)差异无统计学意义(P＞0.05),且均显著高于PBS组(P＜0.05),表明免疫学检验模型成立且稳定,各试验组与现配组结果具有可比性.经4℃冷藏12个月,参考品的Ag85b及EC特异性IL-2、IFNγ相对水平及脾淋巴细胞相对增殖水平均显著低于冷藏1个月的参考品(P＜0.01),经-70℃冻存12个月,参考品的Ag85b、EC特异性IL-2、IFNγ相对水平及脾淋巴细胞相对增殖水平与冻存1个月的参考品差异无统计学意义(P＞0.05).与现配组比较,冷藏组及冻存组Ag85b和EC特异性抗体水平相对平稳,各月间差异均无统计学意义(P＞0.05),且两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 -70℃冻存12个月内的参考品的细胞及体液免疫水平均未明显降低,可作为该参考品的长期保存条件.不同保存条件对疫苗免疫保护力的影响需进一步考察.
