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人纤溶酶原饼环区5文献资料
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人纤溶酶原饼环区5蛋白的原核表达体系的建立
目的构建人纤溶酶原饼环区5(hPK-5)蛋白原核表达载体,并进行表达和鉴定,为获取大量高纯度、具有生物活性的hPK-5蛋白奠定基础.方法以纤溶酶原cDNA为模板,PCR扩增hPK-5基因,经酶切后构建表达载体pBV220/hPK-5,转入大肠杆菌JM109进行温控诱导表达,表达产物经纯化、复性后,检测其抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的生物学活性.结果带有pBV220/hPK-5的大肠杆菌表达的目的蛋白占菌体总蛋白的34.8%,其表达蛋白具有His-tag抗原活性和野生活性.结论已成功构建了pBV220/hPK-5重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.
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含凝血酶切点的 hTNFα -hPgnK5的原核表达及活性鉴定
目的在原核细胞中表达融合蛋白 hTNFα -hPgnK5并鉴定其活性。方法构建 hTNFα -hPgnK5基因的表达载体，并在大肠杆菌 DH5α中进行表达。以 MTT法测定该融合蛋白体外抑制肿瘤细胞或血管内皮细胞增殖的活性。结果成功地构建了 hTNFα -hPgnK5表达载体并获得表达。免疫印迹分析表明，该融合蛋白具有 hPgnK5的免疫活性。体外实验表明 ,该融合蛋白具有抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖的活性。结论 hPgnK5蛋白可与 hTNFα可共同表达，表达产物可抑制肿瘤细胞和血管内皮细增殖。
