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细胞培养/链特异性逆转录聚合酶链式反应文献资料
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细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度
目的 建立检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度的细胞培养/链特异性逆转录聚合酶链式反应(strand-specific reverse transcriptase-polymerase chain reaction,strand-specific RT-PCR)方法.方法 根据甲型肝炎病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条特异性引物.将甲型肝炎减毒活疫苗原液感染2BS细胞,收获增殖高峰期的HAV,提取RNA,进行2轮链特异性PCR扩增,检测HAV复制过程中的负链RNA,通过Reed-Muench公式计算HAV病毒滴度,并对建立的细胞培养/链特异性RT-PCR法进行特异性及敏感性验证,同时用该方法检测4批冻干甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度,并与《中国药典》三部(2010版)中甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度检测方法(细胞培养时间为28 d/ELISA法)进行比较.结果 HAV负链RNA经2轮扩增获得阳性扩增条带,大小与预期相符.该方法检测HAV复制过程中的负链RNA,特异性、敏感度均较好.两种方法检测的病毒滴度接近,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 建立的细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测周期短,灵敏度、特异性好,可用于疫苗的滴度检测.
