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竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖的含量
目的 采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法.方法 用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性.结果 霍乱灭活疫苗中LPS的含量与疫苗保护力呈正相关.结论 采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,能够反映疫苗的保护力,为进一步替代小鼠免疫力试验方法奠定了基础.
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柯萨奇病毒A组16型疫苗免疫后中和抗体检测方法的比较
目的 采用3种方法检测灭活的柯萨奇病毒A组16型(CA16)疫苗的免疫保护性抗体水平,旨在构建评价疫苗免疫保护的检测平台.方法 CA16候选株疫苗(3726,4430和4432)按0、4、6、8周,经腹腔接种小鼠、大鼠和豚鼠,采集0、4、6、8周和10周血样.通过竞争抑制ELISA、细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护实验评估免疫血清中和抗体水平,利用SPSS16.0软件分析3种检测方法相关性.结果 血清中和抗体在首次加强免疫2周后达到峰值；竞争抑制ELISA和细胞微孔病变实验测得中和效价的相关系数为0.861;竞争抑制ELISA和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.8；细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.89.结论 竞争抑制ELISA检测中和抗体与“金标准”相比具有灵敏、快速、大量、低廉等特点,具有广阔的应用前景.
关键词： 柯萨奇病毒A组16型 竞争抑制ELISA 中和抗体 -
抗人硫氧还蛋白-1单克隆抗体的制备与鉴定及初步应用
目的:制备抗硫氧还蛋白-1(TRX-1)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:以原核表达的TRX-1为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合.采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析,用Western blot法对mAb的特异性进行鉴定.结果:得到筛选出3株能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株B6、D5和E3,免疫球蛋白亚类均为IgG>(к),腹水mAb效价均在106以上,3株抗体分别针对不同抗原表位.用mAb建立的竞争抑制ELISA灵敏度达1.22 μg/L.结论:获得3株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株,为研究TRX-1在人类细胞、血液、组织中的表达及定位提供了可能,并为探索相关炎症、癌症发病机制及新治疗方法提供了强有力的工具.
