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组氨酸盐酸盐文献资料
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柱前衍生反相高效液相色谱法测定猴免疫缺陷病毒基因治疗产品中盐酸组氨酸含量
目的 建立柱前衍生反相高效液相色谱法(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法.方法 以正亮氨酸为内标,异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)为柱前衍生化试剂,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以醋酸钠缓冲液(pH 6.5)和80％乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长254 nm,进样量10μl,流速1.0 ml/min.用建立的方法检测样品中盐酸组氨酸含量,绘制标准曲线,并验证该方法的精密度、稳定性、专属性和准确性.结果 盐酸组氨酸在12.54 ～ 31.35 μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 9);3份供试品溶液,每份连续进样5次,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.77％;同1份供试品溶液0、3、6、12 h进样,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.03％;该方法可将甘氨酸、精氨酸和丝氨酸对照品有效分离;高、中、低浓度样品的平均回收率分别为103.37％、102.28％和102.91％.SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸3次检测的平均含量为9.66 mg/ml.结论 建立了柱前衍生RP-HPLC检测SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法,该方法重现性好,专属性强,精密度及准确度高,可对基因治疗产品中的盐酸组氨酸进行质量控制.
