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重组人源化抗CD52单克隆抗体补体依赖的细胞毒性检测方法的建立及验证
目的 建立重组人源化抗CD52单克隆抗体补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)检测方法,并对其进行验证.方法 将系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体加入已接种表达CD52抗原的人淋巴瘤靶细胞中,再加入人血浆冻干补体后,采用ATP显色法定量检测靶细胞的活细胞数目.对试验条件进行优化,并对方法进行专属性、准确性、精密度、线性验证.结果 重组人源化抗CD52单克隆抗体在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:Y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D.方法经过优化后,确定人淋巴瘤RAMOS细胞为靶细胞,抗体稀释初浓度为120.μg/mL,稀释倍数为1∶1.4.不同浓度的无关抗体均对靶细胞无细胞毒性,方法专属性良好.理论CDC活性为50％、75％、100％、125％、150％的试样测定的相对CDC活性分别为(51.33±4.36)％、(75.80±6.31)％、(97.7±7.45)％、(133.27±10.7)％和(158.77±14.13)％,回收率均在80％～120％范围内,相对CDC活性和回收率的RSD均小于10％,方法准确性良好.将100％相对CDC活性试样重复测定6次,6次测定的相对CDC活性为(101.18±8.90)％,RSD小于10％,样品重复性良好.3个不同日期中同一实验员分别检测5个理论CDC活性为50％、75％、100％、125％、150％的试样的相对CDC活性的RSD均在10％以内,时间精密度良好.同一日期中2名不同实验员分别检测5个理论CDC活性为50％、75％、100％、125％、150％的试样的相对CDC活性的RSD均在10％以内,人员精密度良好.线性方程为y=1.065 6x-4.026,r2=0.983 7,线性良好.结论 成功建立了重组人源化抗CD52单克隆抗体CDC检测方法,该方法具有良好的专属性、准确性、重复性、中间精密度和线性,可作为重组人源化抗CD52单克隆抗体CDC活性的常规检测方法.
