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MTT法测定细胞因子信号负调控因子3稳转乳腺癌细胞株对他莫昔芬的耐药性
目的 MTT法检测细胞因子信号负调控因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)稳转乳腺癌细胞株对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)的耐药性.方法 用慢病毒LV-SOCS3(5775-1)感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,经氨苄西林筛选及扩增后,建立SOCS3稳转乳腺癌细胞株.常规培养正常及SOCS3稳转入乳腺癌MDA-MB-231细胞,并分别加入不同浓度的TAM(0、10、20、30、40 μmol/L),采用MTr法检测各组细胞的相对增殖率.结果 相同TAM浓度下,SOCS3稳转人乳腺癌MDA-MB-231细胞的相对增殖率明显低于人乳腺癌MDA-MB-231细胞(P＜0.05).结论 SOCS3稳转细胞株对TAM耐药性显著降低,为内分泌治疗耐药的乳腺癌患者提供了一种新的治疗方法.
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山慈菇水煎剂对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响
目的 探讨山慈菇水煎剂对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、细胞周期、凋亡和迁移的影响.方法 运用MTT法观察药物处理对MDA-MB-231细胞生长增殖情况的影响;应用流式细胞术检测山慈菇水煎剂对MDA-MB-231细胞增殖周期的影响;应用荧光显微镜观察山慈菇水煎剂作用前后对MDA-MB-231凋亡情况的影响;划痕实验检测不同质量浓度的山慈菇水煎剂对MDA-MB-231细胞迁移的影响.结果 不同质量浓度(100、200、400、800 mg/mL)的山慈菇水煎剂作用MDA-MB-231细胞48 h后,对细胞增殖的抑制率分别为13.34％、22.19％、37.14％、79.76％;流式细胞术结果显示,山慈菇水煎可以使MDA-MB-231细胞的细胞周期各个时相发生改变,G1期细胞百分数下降,G2期细胞百分数明显增加;300 mg/mL和550 mg/mL的山慈菇水煎剂作用48 h后,荧光显微镜下可见MDA-MB-231细胞核染色质凝集,分布在细胞核的外周,为早期细胞凋亡的改变;划痕实验结果显示,300 mg/mL和550 mg/mL山慈菇水煎剂作用24h和48 h,乳腺癌MDA-MB-231细胞的划痕距离未见明显愈合.结论 山慈菇水煎剂可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,并可将细胞周期阻滞在G2期,同时可以促进细胞凋亡,并有效抑制其迁移.
关键词： 山慈菇水煎剂 人乳腺癌MDA-MB-231细胞 细胞增殖周期 细胞凋亡 细胞迁移 -
黄癸素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及对NF-κβ、P65、P53蛋白表达的影响
目的 探讨黄癸素(α-羟基-δ-癸酰乙基磺酸小檗碱)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及对核转录因子(NF)-κβ、P65、P53蛋白表达的影响.方法 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,分别加入不同终浓度黄癸素(0.4 mg/L、0.8 mg/L、1.6 mg/L、3.2 mg/L、6.4 mg/L)处理作为实验组,未用黄癸素处理的细胞作为对照组.采用噻唑蓝(MTT)比色法、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法、碘化丙啶(PI)单染流式细胞术、AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术、Western bolt法,分别检测黄癸素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用、细胞凋亡形态、细胞周期各时相细胞比例、细胞凋亡水平和NF-κβ、P65、P53蛋白表达水平的影响.结果 经黄癸素处理后,5个浓度实验组MDA-MB-231细胞增殖抑制率随黄癸素浓度的增加而递增(P＜0.01),呈药物剂量依赖性;不同浓度实验组培养48 h的细胞增殖抑制率明显高于培养24 h(P均＜0.01);培养24 h的半抑制浓度(IC50)=3.03 mg/L,培养48 h的IC50=2.00 mg/L.1.6 mg/L和3.2 mg/L两个实验组作用48 h后,随黄癸素浓度的增加(0→1.6 mg/L→3.2 mg/L),MDA-MB-231细胞G0/G1期百分数递增(P＜0.01),G2/M期百分数基本不变(P＞0.05),S期细胞百分数则递减(P＜0.01);细胞凋亡率递增(P＜0.01);NF-κβ表达水平递减,P53、P65蛋白表达水平递升;均呈剂量依赖性.结论 黄癸素具有明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的作用,且呈药物-剂量依赖性,其可能通过下调NF-κβ,上调P65、P53蛋白表达诱导细胞凋亡.
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重组人促红细胞生成素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其作用机制研究
目的 探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其作用机制.方法 将人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞进行培养.传至5～6代,细胞生长状态稳定后,收集人乳腺癌 MDA-MB-231细胞用于MTT实验.采用MTT法检测 5 组(阴性对照组、rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组)MDA-MB-231细胞增殖的情况.用10 μmol·L-1p38MAPK抑制剂SB203580、ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125和NF-κB 抑制剂PDTC预处理人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞后,用MTT法检测经100、200、300和400 U·mL-1的rh-EPO(PDTC+EPO 组、SB203580+EPO 组、SP600125+EPO组和U0126+EPO组)诱导后细胞增殖的情况.结果 阴性对照组、rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组 72 h PI值分别为:1.000 0±1.000 0、1.231 8±0.133 0、1.323 9±0.136 0、1.351 7±0.146 0和1.423 1±0.084 0;96 h PI值分别为:1.000 0±1.000 0、1.352 5±0.036 0、1.359 7±0.112 0、1.387 2±0.063 0和1.410 8±0.060 0.rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组 72、96 h PI值与阴性对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).PDTC+EPO 组、SB203580+EPO 组72、96 h PI值均较EPO组明显降低(均P＜0.05),SP600125+EPO组、U0126+EPO组72、96 h PI值与EPO组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 rh-EPO可能是通过NF-κB、MAPK传导通路发挥效应,促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖.
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小叶莲有效成分对人乳腺癌细胞增殖、细胞周期及线粒体膜电位的影响
目的:探讨小叶莲提取物、有效成分及成分组合对人乳腺癌细胞增殖的影响及机制.方法:采用酸性磷酸酶法测定小叶莲4种提取物[乙醇提取物(Xc)、乙醇提取物石油醚萃取物(Xp)、乙醇提取物乙酸乙酯萃取物(Xe)、乙醇提取物正丁醇萃取物(Xz)]、5种有效成分[鬼臼毒素(S1)、去氧鬼臼毒素(S2)、4-去甲去氧鬼臼毒素(S3)、8-异戊烯基山柰酚(S4)、8,2′-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚(S5)]以及3种有效成分组合{组合1[S1-S2-S3-S4-S5(2:4:1:4:32),Z1]、组合2[S2-S4(1:1),Z2]、组合3[S3-S4(1:4),Z3]}对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪检测上述样品对MDA-MB-231、MCF-7(或T47D)细胞周期和细胞线粒体膜电位的影响.结果:小叶莲有效成分组合Z1对MDA-MB-231、MCF-7细胞具有显著抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(0.27±0.2)、(0.11±0.1)μg/mL;提取物Xc、Xp、Xe,有效成分S2、S4以及成分组合Z2、Z3对MDA-MB-231、MCF-7(或T47D)细胞的增殖均有较强抑制作用,IC50均小于15μg/mL;各提取物和有效成分均可阻滞MDA-MB-231、MCF-7细胞周期于G2/M期;各有效成分组合均可阻滞MDA-MB-231、T47D细胞周期于G0/G1期,并能降低MDA-MB-231、T47D细胞线粒体膜电位.结论:小叶莲有效成分及成分组合可通过影响细胞周期和线粒体膜电位,从而抑制乳腺癌细胞的增殖.
