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溶氧对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其控制
目的探索溶氧对L-天冬酰胺酶发酵过程的影响及其控制方法.方法通过装液量试验、接种量试验、葡萄糖试验和氧载体试验,考察摇瓶发酵过程中溶氧对L-天冬酰胺酶合成的影响,采用通纯氧自控pH的发酵工艺进行溶氧控制和pH控制.结果采用通纯氧自控pH的发酵工艺,可延长发酵周期,有效防止菌体过早自溶,大大促进L-天冬酰胺酶的合成,较分批发酵提高产酶83%,达到110 u/ml.发酵动力学特性分析表明,该发酵方式L-天冬酰胺酶的合成与菌体生长不相关,控制比生长速率μ为0.15～0.301/h,均有利于L-天冬酰胺酶的合成,可使QPmax达到3922 mmol/g.h.结论溶氧对大肠杆菌L-天冬酰胺酶的合成有严重影响,已建立了控制溶氧的发酵工艺.
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大肠杆菌L-天冬酰胺酶的分离纯化及其特性
目的建立简单有效的L-天冬酰胺酶分离纯化工艺,研究L-天冬酰胺酶的特性.方法采用冷丙酮破壁处理,经稀碱液抽提、离子交换层析和亲和层析进行纯化.通过温度试验、pH试验、SDS-PAGE图谱、紫外吸收光谱等研究酶的特性.结果建立了简单高效的纯化工艺,可使L-天冬酰胺酶的纯度达94.4%,比活为520u/mg蛋白,总收率为65.7%.L-天冬酰胺酶的相对分子质量分别为143900和166700,均为有抗癌活性的EC-2组分,在270nm有大吸收.适作用温度为40～50℃,适作用pH为8.0～9.0,在40℃以下能保持稳定.结论建立了大肠杆菌L-天冬酰胺酶的分离纯化工艺,并研究了L-天冬酰胺酶的酶学特性.
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石刁柏细胞的L-天冬酰胺酶发酵条件的研究
优化了石刁柏细胞L-天冬酰胺酶发酵条件并对其粗提进行了探索.其佳产酶条件为:适培养基为MS+蔗糖(35 g/L)+6-(苄胺基)嘌呤(0.01 mg/L)+α-奈乙酸(3 mg/L)适pH值为6.4、适温度为27℃、适转速为110 r/min、接种量为5.0×104 个/ml.在此发酵条件下,L-天冬酰胺酶发酵液酶活力的峰值可达到22.37 U/ml、产酶稳定期持续7～8 d,利用吴氏提取工艺可以得到回收率为30.8%,纯化倍数为9.85,比活力为0.55 U/mg的L-天冬酰胺酶.
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L-天冬酰胺酶B细胞表位研究
采用ELISA竞争抑制法和光学干涉生物传感器试验对预测的7个段肽进行抗原性鉴定.结果表明7段合成肽中,f(192TPARKHTS199)和g(280AKNGTA286)肽段抗原性较强.研究探索了光学干涉生物传感器在B细胞表位研究中的应用,为进一步抗原位点精细定位打下良好的实验基础.
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重组L-天冬酰胺酶的鉴定
目的:对重组L-天冬酰胺酶进行鉴定.方法:用基因测序、氨基酸组成分析、N-末端氨基酸测序、胰肽图谱、IEF、分子量、紫外扫描等各种实验手段对重组L-天冬酰胺酶及其天然品进行了全面比较.结果:重组产品与天然品具有同质性.结论:重组L-天冬酰胺酶具有较好的应用前景.
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利用家蚕病毒颗粒表达和纯化抗肿瘤药物天冬酰胺酶
目的:通过家蚕病毒颗粒简化抗肿瘤药物L-天冬酰胺酶的生产纯化过程,为抗肿瘤的药物生产提供依据.方法:利用基因重组技术构建pF astdual-polh-da26-asp融合蛋白真核表达载体,利用杆状病毒表达系统在家蚕细胞中表达融合蛋白,奈氏试剂法检测L-天冬酰胺酶活性.结果:成功构建了重组表达载体,融合蛋白在家蚕细胞中顺利表达,并检测到L-天冬酰胺酶在家蚕细胞中表达,活性为2 113.52 U/mg.结论:重组病毒颗粒成功表达,且L-天冬酰胺酶具有一定的活性；可以利用家蚕颗粒病毒简化纯化抗肿瘤药物L-天冬酰胺酶.
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L-天冬酰胺酶的研究进展
L-天冬酰胺酶具有显著的抗肿瘤作用,尤其是广泛应用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的治疗.作者对L-天冬酰胺酶的分离纯化工艺、与ALL的治疗、酶的修饰等进行了综述.
关键词： L-天冬酰胺酶 儿童急性淋巴细胞白血病 分离纯化 修饰 -
抗肿瘤酶制剂L-天冬酰胺酶治疗白血病的研究进展
L-天冬酰胺酶具有显著的抗肿瘤作用.为了大限度地发挥酶疗法的优势,可以对天然酶进行化学改性、包埋或固定化.尤其值得重视的是固定化酶体外循环净化血浆技术,该研究对人类攻克白血病提出了一个新的思路与方法,具有广阔的应用前景.
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重组L-门冬酰胺酶与其野生型在体外和体内的抗肿瘤作用比较
目的:研究重组L-门冬酰胺酶对肿瘤细胞体外生长及实验性肿瘤的抑制作用.方法:体外培养肿瘤细胞(K562、L1210和P815),分别用倒置显微镜和透射电镜观察肿瘤细胞的形态学,MTT比色法观察细胞增殖率及抑制率,流式细胞仪分析DNA含量.同时根据移植性肿瘤研究方法小鼠接种L1210、P388、Heps及S180瘤株,观察给药后小鼠存活天数和瘤重.结果:体外细胞培养实验证明,重组L-门冬酰胺酶对K562、L1210和P815细胞生长具有显著抑制作用(P＜0.01).体内实验表明,重组L-门冬酰胺酶ip能显著延长移植肿瘤小鼠(L1210和P388)的存活天数(P＜0.01),并对小鼠移植性肝癌实体瘤(Heps)生长有明显的抑制作用(P＜0.01).重组L-门冬酰胺酶iv对小鼠Heps和S180肿瘤生长有明显的抑制作用(P＜0.01).结论:重组L-门冬酰胺酶对肿瘤细胞体外生长及受试肿瘤有明显抑制作用.本结果对重组L-门冬酰胺酶的临床应用提供实验依据.
