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丙氨酸氨基转移酶参考品定值方法的初步研究
目的研究丙氨酸氨基转移酶参考品活性浓度的定值.方法用IFCC推荐的方法测定该酶活性浓度,从9个厂家生产的试剂盒中选择3种,首先进行实际K值的测定,然后对该参考品定值. 结果瓶间变异CV小于1.0%.丙氨酸氨基转移酶的催化浓度以95%可信限赋值,复溶的冻干参考品为201±4.9U/L.结论该定值对于本品的试用和认证是有价值的.
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猪肾γ-谷氨酰基转移酶(GGT)的提纯及其稳定性
目的提纯活性稳定的GGT,制备用于GGT测定的参考品.方法用差速离心法从猪肾皮质中分离刷状缘微绒毛膜,用Triton X-100溶解膜结合的酶,用抗GGT亲和层析柱提纯GGT,检测提纯品的有关特性.结果提纯品GGT比活600IU/mg蛋白,得率45.5%,未测出临床常测的酶,在不同方法间的活性比与人血清GGT相似,在特定介质中制成冻干品,经加速变性试验,在-20℃和4℃预期年失活率分别为0.02%和0.25%.结论本法提纯GGT速度快,得率高,几乎不含杂酶,稳定性好,在不同方法间与人血清酶有互换性,是用于制备酶参考品提纯GGT的理想方法.
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α-淀粉酶及门冬氨酸氨基转移酶参考品赋值方法的初步研究
目的初步研究α-淀粉酶和门冬氨酸转移酶参考品活性浓度的赋值方法.方法两种酶的活性浓度用IFCC推荐的方法测定,由南京市内的8个实验室协助完成,在测定前进行生化分析仪实际K值的检测.结果瓶间变异CV小于1.1%.实验室间变异大于实验室日内或实验室日间变异.α-淀粉酶和门冬氨酸氨基转移酶的催化浓度以95%可信限赋值,复溶的冻干参考品分别为(1 048±42)U/L和(182±5)U/L;同样的液体参考品分别为(1 198±43)U/L和(17 2±3)U/L.将复溶型和液体型淀粉酶参考品用蒸馏水等量稀释,其值为(537 ±20)U/L和(598±22)U/L.结论此初步赋值对本品的试用和认证是有价值的.
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猪肾碱性磷酸酶的提纯及性质研究
目的:从猪肾中提取碱性磷酸酶(ALP),并对其能否作为参考品进行研究. 方法:从猪肾皮质中分离刷状缘微绒毛膜,用正丁醇溶解膜结合的酶,经硫酸铵沉淀,DEAE-Sephacel、ConA-Sepharose、Sephadex G-200及抗γ-谷酰基转移酶(GGT)免疫亲和层析提纯ALP. 结果:提纯的ALP比活达402 kU/g蛋白,几乎不含杂酶(未检出ALT、AST、ChE、AMY、CK、LDH,GGT仅含2 U/780 U ALP).其对底物4-硝基磷酸酚(4-NPP)的Km值为1.35 mmol/L,适pH值为10.40. 结论:提纯的猪肾ALP与人血清中的ALP酶动力学特性非常相似,为进一步研制ALP参考品奠定了基础.
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γ-谷氨酰转移酶参考品赋值方法的初步研究
目的:研究γ-谷氨酰转移酶(GGT)参考品活性的赋值. 方法:用临床化学国际联盟(IFCC)推荐方法测定该酶的活性,选择5种厂家生产的试剂盒,首先进行实际K值的测定,然后对该酶参考品赋值. 结果:瓶间变异系数(CV)<1.0%.GGT催化浓度以95%可信限赋值,复溶的冻干参考品为(138±8)U/L. 结论:该赋值对于本品的试用和认证是有价值的.
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酶参考品互换性在酶测定方法标准化中的意义及应用
目的:研究本室所提酶制品的互换性、影响因素及应用方法. 方法:采用数种常用的酶测定法(或试剂盒)测定多份血清及本室所提酶制品,以国际临床化学联合会(IFCC)推荐的方法为基准,对其他方法测定的结果进行回归分析,并对血清及本室酶制品的反应性进行比较,对不具互换性的原因进行分析. 结果:本室所提酶制品除在个别方法间不具互换性外,大多具有互换性. 结论:本室所提酶制品具备互换性,可作为酶参考品应用于临床.
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血清AST测定方法的比较及其与IFCC法结果转换的计算方法
目的:研究血清标本及校正品或标准品用不同方法测定天冬氨酸转氨酶(AST)结果间的关系以及转换成IFCC法结果的计算方法. 方法:采用八种常用的AST测定方法(试剂盒)测定87份血清标本,以IFCC推荐的方法H(不含磷酸吡哆醛)为基准,其他七种方法测定的血清AST值与之进行相关分析;并研究两种酶校正品(RANDOX、c.f.a.s)和一种酶参考品(ERM)与人血清AST的转换性. 结果:八种方法间血清AST测定值的相关性较好,相关系数(r)接近1.0,截距接近0.ERM在以上各方法间均与人血清AST反应性相近,具转换性;校正品RANDOX、c.f.a.s则与人血清AST反应性有差异,转换性欠佳. 结论:采用统一的合格的酶参考品可以大大减小各方法间测定值的离散度,是酶测定标准化的新途径.
