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应用蚀斑法滴定17D黄热疫苗效力
目的用蚀斑法代替小鼠法滴定黄热疫苗效力.方法用Vero细胞蚀班法与小鼠法同时滴定14批黄热疫苗.结果两种方法滴定结果差异无显著意义(t=1.14,P>0.05),二法呈正相关(r=0.5289,PFU与LD50的比率为5.75,在WHO推荐的3～30之间[1]).判定结果时间由原来的21d缩短为6d.结论蚀斑法具有快速、经济、操作简单、重复性好诸多优点,可以代替小鼠法.
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滴定痘苗病毒的噬斑血吸附法的优化
目的 对滴定痘苗病毒的噬斑血吸附法进行优化,克服该方法稳定性差、结果数据偏差大的问题.方法 通过预试验确定痘苗病毒的佳稀释倍数、病毒吸附温度及鸡血球加入方法等参数.采用优化的噬斑血吸附法,对天坛株痘苗病毒的原始种子批、主种子批、工作种子批和参考苗进行滴定,计算变异系数(CV),确定试验内、试验间和不同实验人员间的精密度.利用Qstat软件分析本次与以往滴定结果之间的关系.结果 病毒的佳稀释度为10-6,佳吸附温度为25～30 ℃,加入鸡血球的佳方法为病毒吸附72 h后,弃去部分培养液,再加入鸡血球.4种样品测定结果的试验内、试验间和不同实验人员间的变异系数均小于5%,病毒滴度分别为(7.12±0.18)Lg PFU/ml、(7.79±0.21)Lg PFU/ml、(7.88±0.17)Lg PFU/ml和(7.64±0.14)Lg PFU/ml,均高于以往滴定结果.本次与以往滴定结果之间存在线性相关性.结论 优化了滴定痘苗病毒滴度的噬斑血吸附法,确定了天坛株痘苗病毒的原始种子批、主种子批、工作种子批和参考苗的滴度,为天花疫苗多项检定试验提供了可靠依据.
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肠病毒71型空斑检测方法的建立
目的 建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段.方法 将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Veto细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度.通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较.结果 采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测.96 h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1～2 mm和0.5～1 mm.连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%.空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为γ=0.972,P=0.006.结论 已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法.
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人呼吸道合胞病毒荧光PCR检测方法的建立和评价
目的 建立人呼吸道合胞病毒(hRSV)荧光PCR(FQ-PCR)检测方法,并确定其低检出限.方法 针对hRSV N基因相对高度保守的序列,采用引物和探针设计软件Primer Express v2.0,设计1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针,组装成荧光PCR检测试剂.以此试剂检测345份咽拭子样品,与ELISA法检测hRSV IgM抗体比较,确定低检出限.结果 该方法的低检出限是传统的病毒滴度测定的104.79倍.与IgM抗体检测法相比,对于感染早期患者具有更高的检出率.结论 建立的hRSV FQ-PCR检测方法具有简便、快捷的特点,适用于hRSV感染的早期诊断.
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国产水痘减毒活疫苗的稳定性观察
目的 观察国产水痘减毒活疫苗的稳定性.方法 取40批上海生物制品研究所有限责任公司(以下简称上海公司)2007～2013年生产的水痘减毒活疫苗,按照国家食品药品监督管理局批准的水痘减毒活疫苗注册标准和《中国药典》的要求进行各项检定:在0月进行热稳定性试验;在0和18月进行鉴别试验、物理检查、水分检测、无菌检查、异常毒性检查、牛血清白蛋白残留量检测、抗生素残留量检测(2010年10月以后生产的疫苗);在0、6、12、18月进行病毒滴定.结果 上海公司2007～2013年生产的水痘减毒活疫苗在有效期内各项指标检定结果均符合水痘减毒活疫苗注册标准和《中国药典》的相关要求.结论 上海公司生产的水痘减毒活疫苗质量稳定,安全有效.
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乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴定用BHK21细胞密度和代次的确认
目的 确定乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗病毒滴定使用的BHK21细胞的密度和代次范围.方法 抽取20批不同代次BHK21细胞在6孔细胞板内培养成单层,进行细胞计数,计算细胞密度,滴定同批次乙脑病毒滴度国家参考品.将BHK21细胞从P95传代至P105,观察细胞形态及生长情况,与已用于检定的BHK21细胞(
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国产麻腮风联合减毒活疫苗的稳定性观察
目的 观察国产麻腮风联合减毒活疫苗(麻腮风疫苗)的稳定性.方法 取24批上海生物制品研究所有限责任公司(上海公司)2008—2017年生产的麻腮风疫苗,按照国家食品药品监督管理总局批准的麻腮风疫苗注册标准和中国药典的要求进行各项检定:在0个月进行热稳定性试验;在0和18个月进行鉴别试验,外观、水分、无菌、异常毒性检查,牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量(2010年10月以后)、细菌内毒素(2013年12月以后)、pH值和渗透压摩尔浓度(2015年12月以后)检测;在0、6、12、18个月进行病毒滴定.同时对新、老车间生产的各3批疫苗进行加速稳定性与长期稳定性试验,重点考察水分和病毒滴度.结果 麻腮风疫苗在有效期内各项指标检定结果均符合注册标准和药典要求.新、老车间生产的疫苗质量相似.疫苗水分都不高于3.0％,麻疹、腮腺炎、风疹病毒滴度分别为3.3～4.3、4.6～5.6、3..3～4.3 lg半数细胞培养感染量/ml.结论 上海公司10年间生产的麻腮风疫苗质量稳定、安全有效.
关键词： 麻疹-腮腺炎-风疹疫苗 稳定性 病毒滴定 -
栀子等中药治疗小鼠病毒性心肌炎实验研究
目的观察栀子等中药抗Balb/c小鼠Coxsakie B3病毒(CVB3)感染的急性病毒性心肌炎的疗效.方法将Balb/c小鼠随机分为模型组、栀子组、黄连组、黄芩组、大青叶组、复方组及正常对照组,腹腔注射CVB3建立病毒性心肌炎模型,用上述中药进行灌胃治疗7 d,检测小鼠心脏CVB3,病毒滴定、心肌病变形态定量分析及电镜观察细胞超微结构改变.结果中药治疗各组病毒滴定、心肌病变面积及细胞超微结构改变均较模型组减轻,复方组轻.结论上述中药对小鼠病毒性心肌炎有一定治疗作用.
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麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响
目的 了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围.方法 用DMEM培养液将Veto细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验.结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85％以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果:137～ 169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异(P＞0.05),170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异(P＜O.01).结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗佳细胞代次.
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应用微量滴定法测定天花疫苗效力
微量滴定法代替血球吸附法测定天花疫苗效力.通过对Vero细胞接种浓度和细胞病变判定时间的优化,确定了微量滴定法测定天花疫苗效力的方法,用Vero细胞微量滴定法和血球吸附法测定14批天花疫苗.两种滴定方法的检测结果差异有显著意义(P＜0.05),二者存在正相关(r=0.76, 0.001＜P＜0.05)和直线回归(b=0.45, 0.001＜P＜0.05)关系,直线回归方程为=4.61+0.45x.微量滴定法变异系数CV为1.25%～2.89%.因此,微量滴定法敏感、可靠、操作简单、重复性好,可以代替血球吸附法.
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注射用胸腺肽灭活/去除可能的污染病毒的工艺
目的 制备注射用胸腺肽,并评价其病毒灭活/去除工艺的可行性和可信度.方法 将麻疹病毒(Mv)、水痘带状疱疹病毒(VZV)和甲肝病毒(HAV)作为指示病毒,分别在pH值3.2±0.3于-20℃冻存21 d、80℃加热5min灭活病毒、在进压0.15 MPa、回流压0.05 MPa下先后用截留相对分子质量10kD的中空纤维柱和膜包滤器循环超滤去除病毒,并于病毒灭活/去除前后分别取样感染宿主细胞,做病毒滴定,以病毒是否灭活/去除或病毒量下降是否大于4.0 Log作为病毒是否有效灭活/去除的标准.结果 经过酸沉灭活后,3种指示病毒的滴度均有所降低；经过加热灭活后,MV和VZV均未检出,滴度下降大于4.0 Log；经超滤去除病毒后,3种指示病毒均未检出,滴度下降均大于4.0Log,且经盲传复壮后均未检出病毒.结论 注射用胸腺肽生产工艺中的低pH孵放法、加热法、超滤法的联合运用可以有效地灭活/去除病毒.
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应用病毒蚀斑法滴定狂犬病毒毒力的方法验证
目的:建立病毒蚀斑法作为狂犬病毒毒力滴定的比较精确的方法.方法:我们采用比较法,平行测定35批狂犬病Vero细胞疫苗,比较病毒蚀斑法与NIH小鼠法测定狂犬病毒滴度的结果.结果:病毒蚀斑法和NIH小鼠法具有一定相关性,且判定结果时间由NIH小鼠法测定的21天缩短为病毒蚀斑法测定的10天.结论:病毒蚀斑法具有快速、经济、操作简单、重复性好等诸多优点,适用于狂犬疫苗生产研究中的病毒毒力滴定.
