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宿主菌基因组DNA文献资料
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Real-time PCR检测核酸疫苗中宿主基因组残留DNA
目的 建立Real-time PCR方法,用于定量检测核酸疫苗中宿主基因组的残留DNA.方法 以Lightcycler平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立基于SYBR Green I荧光染料的Real-time PCR 检测方法,并用于核酸疫苗纯化过程中间产物的检测.结果 整个检测过程可在30 min内完成,特异性强,检测灵敏度可达10 fg/μl,其标准曲线的相关系数为-0.99.结论 该方法可用于核酸疫苗中宿主基因组残留DNA的检测.
关键词： Real-time PCR 宿主菌基因组DNA 核酸疫苗 -
实时定量PCR检测重组技术产品中宿主基因组DNA残留
目的:建立Real-time PCR方法,用于定量检测重组技术产品中宿主基因组DNA的残留.方法:以ABI 7500 FAST平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立基于SYBR Green I荧光染料的real-time PCR检测方法,用于重组技术产品宿主DNA残留的质量控制.结果:该法检测宿主DNA残留灵敏度可达到1 fg(1×10-6 ng),DNA浓度在1×10-5～100 ng·μL-1范围内线性良好,其标准曲线的相关系数为0.99以上.应用该法对4批重组人粒细胞刺激因子进行测定,外源DNA残留量分别为每剂量6.699×10-3,7.948×10-3,9.362×10-3,7.506×10-3 ng.结论:该方法具有操作简便、灵敏度高等优点,可用于重组产品中大肠杆菌残余DNA的定量测定.
