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水痘-带状疱疹病毒(VZV84-7株)在人二倍体细胞(2BS株)中感染复数的分析
目的 探讨水痘-带状疱疹病毒(VZV84-7株)在人二倍体细胞(2BS株)上的感染活性,确定感染复数(MOI).方法 使用100 ml小方瓶培养人二倍体细胞(2BS株),待长成致密单层后,接种病毒滴度为5.5 lgPFU/ml的水痘-带状疱疹病毒(VZV84-7株),每瓶接种量分别为0.02、0.1、0.3、0.5、0.8、1、1.5和2 ml,于显微镜下连续观察细胞病变情况及病变比例,并连续记录收获时间;采用蚀斑法测定病毒滴度.结果 当病毒接种量为0.02 ml时,细胞大部分生长正常,呈极性排列,无形态典型、广泛的病变,通过延长收获时间也无法获得形态典型、广泛的病变;当病毒接种量不低于0.1ml时,呈典型、广泛的病变,随着病毒接种量的增加,收获时间逐渐缩短;仅病毒接种量为0.02 ml组细胞的病毒滴度低于3.7 lgPFU/ml;确定MOI在0.004 0 ～0.019 9之间,均可制备出质量稳定、符合成都生物制品研究所有限责任公司《水痘减毒活疫苗制造及检定规程》要求的毒种.结论 确定了水痘-带状疱疹病毒(VZV84-7株)感染人二倍体细胞(2BS株)合适的MOI,为水痘疫苗生产工艺的优化提供了参考依据.
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EV71灭活疫苗(人二倍体细胞)毒种FY23-KB株的遗传稳定性
目的 探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗(人二倍体细胞)毒种FY23-KB株在KMB-17细胞中连续传代的遗传稳定性.方法 比较疫苗株FY23-KB在Vero细胞中生长的第2代(FY23-V-2)与在KMB-17细胞中适应性生长的第12(FY23-KB-12)、14(FY23-KB-14)、16(FY23-KB-16)代,以及FY23-KB-14与在KMB-17细胞中适应性生长的第19(FY23-KB-19)、20(FY23-KB-20)、21(FY23-KB-21)代的VP1区序列及毒力变化情况,分析该疫苗株的遗传稳定性.结果 与在Vero细胞上分离的原始毒株FY23-V-2相比,在KMB-17细胞中适应性生长的FY23-KB株的原始种子(第12代)、主种子(第14代)和工作种子(第16代)的VP1区序列出现了3个碱基突变,引起2个氨基酸改变,分别为VP1的第226位的Ser突变为Pro和第282位的Asn突变为Asp;与第14代基因序列相比,第19、20、21代的VP1区序列,分别有6、8和11个碱基突变,其中大部分为无意义突变,仅在第21代出现了两个位点(P134和P230)的氨基酸改变;所有代次的病毒滴度均维持在6.5～7.0 lgCCID50/ml.结论 EV71灭活疫苗(人二倍体细胞)毒种FY23-KB株在KMB-17细胞中连续传代,VP1序列未发生明显变化,毒力均一,遗传性状方面保持了较好的稳定性,从分子水平证明了该疫苗的安全性.
