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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗在动物体内的免疫原性及安全性评价
目的 评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strain,sIPV)在动物体内的免疫原性和安全性.方法 利用篮式生物反应器在Vero细胞上培养Sabin株脊髓灰质炎病毒,收获病毒液,经超滤浓缩、柱层析纯化、病毒灭活后,制备三价sIPV,参考《中国药典》三部(2010版)相关附录方法检测宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)、宿主细胞DNA及牛血清白蛋白残留量,HPLC法检测纯度;采用SDS-PAGE、Western blot法及透射电子显微镜对病毒的特异性进行鉴定;将sIPV于第0和21天免疫Wister大鼠,微量中和法检测免疫后大鼠血清中和抗体水平,并与野毒株IPV(IPV derived from wild strain,wIPV)组进行比较;通过观察ICR小鼠单次肌肉和静脉注射给予sIPV后产生的毒性反应及豚鼠反复给予sIPV后出现的速发型全身过敏反应,评价疫苗的安全性.结果 sIPV残余牛血清白蛋白、宿主细胞DNA、HCP检测结果分别低于2.5 ng/ml、100 pg/ml和100 ng/ml,疫苗纯度达95％以上;病毒形态及直径大小与脊髓灰质炎病毒一致,兔抗脊髓灰质炎病毒多克隆抗体可与对应型别的脊灰病毒的VP1、VP2、VP3发生特异性抗原抗体结合反应,相对分子质量分别在31 000～38 000、27 000～ 32 000和26 000 ～ 28 000之间;二免后,sIPV大鼠血清中和抗体阳转率及GMT均高于wIPV组;小鼠的急性毒性和豚鼠全身主动过敏反应均为阴性.结论 制备的sIPV具有良好的免疫原性和安全性.
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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗毒种的遗传稳定性
目的 分析Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine,sabin strain,sIPV)毒种(亚主种子、工作种子)及疫苗代次病毒(SO+4)的遗传稳定性.方法 比较疫苗株Sabin Ⅰ、Ⅱ型及PfizerⅢ型亚主种子、工作种子及疫苗代次病毒的感染性滴度及D抗原含量的变化情况,并对上述病毒进行全基因组测序.结果 各代次Sabin株病毒滴度均维持在7.62～8.62 lgCCID50/ml,D抗原含量均维持在30 ～ 128 DU/ml.与GenBank上登录的Sabin Ⅰ(AY184219.1)、Ⅱ(AY184220.1)、Ⅲ型(AY184221.1)减毒株原始种子(SO)基因序列相比,Sabin株亚主种子(SO+2)、工作种子(SO+3)及疫苗代次病毒(SO+4)均未出现碱基突变.结论 sIPV毒种及疫苗代次病毒的全基因序列与原始种子相比,均未发生变化,毒力均一,遗传性状方面保持了较好的稳定性.
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Sabin株和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗在恒河猴体内不同免疫方案的比较
目的 评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(Wild strain inactivated poliovirus vaccine,wIPV)在恒河猴体内不同免疫方案的免疫原性.方法 将25只恒河猴随机分为5组:sIPV组(免疫3剂sIPV)、sIPV/口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral attenuated poliovirus vaccine,OPV)组(免疫2剂sIPV后,再免疫2剂OPV)、wIPV组(免疫3剂wIPV)、wIPV/OPV组(免疫2剂wIPV后,再免疫2剂OPV)和对照组(免疫3次稀释液M199),每组5只.OPV口服接种,IPV和M199经上臂三角肌处肌肉注射,2剂间免疫间隔时间为1个月.首次免疫前和每剂免疫后1个月采血,分离血清,采用微量中和试验法测定血清中抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体效价.结果 除对照组外的4个试验组全程免疫结束后,恒河猴血清中均可检出较高水平的中和抗体,且所有恒河猴血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体全部阳转.Ⅰ型和Ⅲ型抗体免疫应答中,接种sIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种wIPV的2个试验组(P＜0.05)；Ⅱ型免疫应答中,接种wIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种sIPV的2个试验组(P＜0.05).采用wIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体免疫应答均可获得与单独接种wIPV同样的效果；而采用sIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ型抗体免疫应答效果低于单独接种sIPV,Ⅱ型抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ型抗体第4剂免疫后水平也有所上升.结论 sIPV和wIPV在恒河猴体内均可诱导良好的免疫应答,初步证实了IPV/OPV序贯免疫的可行性,为今后免疫策略的制定提供了一定的实验依据.
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感染复数对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响
目的 观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞巾增殖的影响.方法 分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度.结果 病毒感染Vero细胞后48 h,3组MOI(0.001、0.01、0.1)细胞病变均达(州).Ⅰ型病毒增殖高峰出现在接种后72 h,3组MOI病毒滴度分别为(8.690±0.190)、(8.690±0.190)和(8.315±0.185)IgCCID50/ml;Ⅱ型病毒增殖高峰出现在接种后96 h,3组MOI病毒滴度分别为(8.355±0.097)、(8.440±0.310)和(8.285±0.155)IgCCID50/ml;Ⅲ型病毒增殖高峰出现存接种后48～96 h,3组MOI病毒高滴度分别为(7.500±0.250)、(7.500±0.250)和(7.750±0.250)igCCID50/ml.结论 不同MOI对3型病毒增殖影响不大,可以采用低MOI(0.001)制备疫苗.
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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗对大鼠的免疫效果
目的 比较不同浓度Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)3针免疫大鼠的中和抗体效价,为确定Sabin IPV的佳免疫方案提供参考.方法 用不同浓度的Sabin IPV对52只Wistar大鼠进行3针免疫,每针间隔1个月,每次免疫后30 d采血并分离血清,采用微量中和试验测定血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型的中和抗体效价.结果 大鼠经3针Sabin IPV免疫后,其Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度均显著上升,2针免疫后抗体阳转率已经达到100%,且原倍疫苗与稀释疫苗免疫大鼠后,产生的中和抗体水平差异有显著意义.结论 Sabin IPV在大鼠中有良好的免疫效果,经3针免疫可产生高水平的中和抗体.
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Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性
目的 探讨Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性.方法 用Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别以0.01、0.1和1 MOI接种Veto细胞,进行传代培养,共传13代.采用微量细胞病变法测定病毒滴度;双抗体夹心法测定D抗原含量;免疫Wister大鼠,采用微量中和试验测定病毒的免疫原性.结果 Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型在Vero细胞上连续传13代,病毒滴度基本稳定;D抗原含量呈下降趋势;免疫原性下降迅速.结论 用Sabin株脊髓灰质炎病毒制备灭活疫苗,在Vero细胞上传代的代次越低越好.
