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霍乱病毒B亚单位作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果的影响
目的 研究霍乱病毒B亚单位(cholera toxin subunit B,CTB)作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型(herpes sim-plex virus type 2,HSV-2)DNA疫苗pgD免疫效果的影响.方法 将CTB片段克隆至真核表达质粒pcDNA3Kan(pKan)中,构建基因佐剂pcDNA3Kan-CTB(pCTB).将BALB/c小鼠随机分为pCTB无疫苗组、pgD/pCTB佐剂组、pgD/pKan空载体组及PBS对照组,经后腿肌肉多点注射,共免疫3次,每次间隔2周.于末次免疫2周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测HSV-2特异性IgG水平及IgG1、IgG2a亚型抗体滴度;制备小鼠脾细胞,MTS法检测小鼠脾脏T细胞增殖能力;将病毒稀释后经腹腔接种小鼠,于免疫2周后,进行HSV-2致死剂量攻毒试验.结果 pCTB经双酶切及测序鉴定证明构建正确;pgD/pCTB佐剂组小鼠血清中HSV-2特异性IgG水平明显高于其他3组(P＜0.001),IgG1和IgG2a滴度均明显高于pgD/pKan空载体组(P＜0.001),其中IgG2a增幅更明显,IgG2a/IgG1比值与pgD/pKan空载体组相比,由(1.176±0.11)增加至(1.316±0.07)(P＜0.05);pgD/pCTB佐剂组小鼠脾细胞在HSV-2刺激下诱导的特异性T细胞增殖反应明显强于PBS对照组及pgD/pKan空载体组(P＜0.05);攻毒14d内,pgD/pCTB佐剂组小鼠存活率高达100％.结论 pCTB作为基因佐剂能够显著提高pgD诱导小鼠产生抗原特异性IgG抗体水平,增强HSV-2特异性T细胞增殖反应,并介导以细胞免疫为主的Th1/Th2混合型免疫反应.
关键词： 霍乱病毒B亚单位 单纯疱疹病毒2型(HSV-2) DNA疫苗 基因佐剂
