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PPE36-p27蛋白文献资料
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结核分枝杆菌PPE36-p27蛋白的原核表达及其在结核诊断中的应用
目的 原核表达结核分枝杆菌标准菌株PPE36-p27蛋白,并应用于结核特异性细胞免疫检测.方法 以结核分枝杆菌H37RV基因组DNA为模板,采用PCR法扩增PPE36基因,纯化回收后插入至原核表达载体pEASY,将测序正确的重组质粒转入感受态E.coli BL21(DE3),诱导表达PPE36-p27蛋白,经SDS-PAGE鉴定及NI-NTA亲和层析柱纯化.将纯化后的PPE36-p27作为特异性刺激原,建立新型T细胞检测方法ELISPOT-IL-12技术.结果 重组质粒pEASY-PPE36经双酶切及测序鉴定,构建正确.PPE36-p27蛋白的相对分子质量约30 000,纯化后蛋白浓度为14.69 μg/mL.重组蛋白PPE36-p27应用于ELISPOT-IL-12检测方法时,可刺激机体产生细胞因子IL-12,与包被的抗IL-12抗体产生特异性结合,可见明显斑点.结论 PPE36-p27蛋白在原核表达系统成功表达,以其为刺激原建立了ELISPOT-IL-12检测技术,可应用于结核的早期诊断.
关键词： 结核分枝杆菌 PPE36-p27蛋白 酶联免疫斑点试验 白介素-12
