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RH血型系统遗传学研究进展
1940年Landsterner和Wiener用印度恒河猴红细胞免疫兔子，发现兔子的抗恒河猴红细胞抗血清，可以凝集大部分白人的红细胞，进而发现了RH血型系统。半个世纪以来，关于RH血型遗传机理的假说，众说纷纭。其中比较著名的有Fisher-Race学说及Wiener学说等。20世纪90年代，随着分子生物学技术的发展，科学家提出了崭新的观点来解释RH血型系统的遗传。RH系统由1号染色体短臂上两个高度同源的基因RHD和RHCE编码。本文就RH血型系统近几年的研究作一综述。
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广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析
目的 分析广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征.方法 收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测RhCE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序.结果 发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960G＞A(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致.结论 首次在广州地区人群中发现了RHD* 960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D.
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利用基因定点突变技术构建RHD变异型克隆的初步研究
目的 利用基因定点突变技术构建RHD变异型克隆,克服RHD变异型克隆难以获得的问题.方法 提取总RNA并反转录后,扩增获得RHD和RHCE混合cDNA,从克隆质粒中筛选RHD;根据弱D12、弱D25和弱D33的特异性突变位点设计引物,分别进行PCR扩增反应,诱导目的基因突变,DpnI酶处理PCR产物,转化后测序验证.结果 克隆测序的结果显示,质粒中分别存在830A、341A和520A的突变,证实已经通过基因定点突变技术成功获得了弱D12、弱D25和弱D33的克隆.结论 通过基因定点突变可以改造野生型RHD-cDNA,获得变异型的RHD-cDNA,为血型研究打开新的路径.
