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脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化的研究
目的:诱导脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化.方法:胶原酶法分离培养脐带华通胶间充质干细胞,第3代细胞以含2-巯基乙醇的分化培养基培养,应用RT-PCR和流式细胞仪从mRNA和蛋白水平检测Flk1阳性细胞分化水平.结果:脐带华通胶间充质干细胞Flk1mRNA及蛋白表达极低,分化培养基培养后表达上调,48h达高峰(P＜0.05),之后表达降低.结论:2-巯基乙醇可诱导脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化,为从中分选Flk1阳性细胞进行进一步研究提供了依据.
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血管内皮生长因子2型受体胞外1～3区核酸疫苗的构建及对H22肿瘤生长的抑制作用
背景与目的:大多数实体肿瘤的生长转移都需要新生血管的支持,血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤的血管生成中居中心地位,而 flk1(fetal liver kinase 1)是 VEGF发挥作用的关键.阻断 VEGF同 flk1的结合可望达到抑制肿瘤生长的目的.我们构建了小鼠 flk1胞外 1～ 3区核酸疫苗,并检验疫苗对肝癌细胞 H22小鼠移植瘤生长的抑制作用.方法: RT-PCR法克隆 flk1胞外 1～ 3区基因片段,将片段插入质粒 pcDNA3.1(+ ),构建核酸疫苗 pcDNA3.1(+ ) flk1-Domain1-3;脂质体转染 COS7细胞, Western blot法检测 flk1-Domain1-3的真核表达;采用标准 4 h 51Cr释放实验检验疫苗免疫小鼠特异性 CTL. 30只小鼠分为疫苗接种组 ,pcDNA3.1(+ )接种组和生理盐水接种组.股四头肌肌肉丰厚处接种 10天后再皮下接种 H22细胞,记录肿瘤的生长情况、体积、湿重、微血管密度、小鼠死亡时间,观察疫苗对小鼠 H22皮下移植瘤生长的抑制作用.结果: PCR扩增出 1 252 bp大小的基因片段,测序证明所获基因序列阅读框架与 GenBank所公布的 flk1胞外 1～ 3区一致. Western blot显示转染疫苗的细胞中有分子量约为 44 kDa的蛋白表达,与 flk1胞外 1～ 3区蛋白大小一致; 51Cr释放实验提示 ,疫苗可引起针对内皮细胞的特异性 CTL反应.疫苗对肿瘤的预防作用实验发现,肿瘤出现时间疫苗组为( 5.2± 0.9)天,空质粒组为( 4.0± 0.7)天,生理盐水组为( 3.8± 0.6)天;小鼠生存时间疫苗组为( 24.5± 3.2)天,空质粒组为( 14.7± 2.6)天,生理盐水组为( 14.3± 2.0)天;微血管密度疫苗组为 10.1± 1.7,空质粒组为 27.3± 3.3,生理盐水组为 25.3± 4.6;肿瘤湿重疫苗组为( 1.4± 0.1) g,空质粒组为( 1.8± 0.2) g,生理盐水组为( 1.8± 0.2) g;疫苗组各项指标与空质粒组和生理盐水组比较差异具有显著性( P< 0.05);空质粒组和生理盐水组各项指标比较差异无显著性( P >0.05).结论: pcDNA3.1(+ )-flk1-Domain1-3可以引起针对内皮细胞的特异性 CTL反应,通过杀伤内皮细胞,抑制血管生成对 H22细胞小鼠移植瘤的生长产生较强的延缓作用.
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CD105和Flk1在尖锐湿疣组织中的表达
目的:研究CD105和Flk1(fetal liver kinase-1)在尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)组织中的表达及其可能作用.方法:采用鼠抗人CD105单克隆抗体和兔抗人Flk1多克隆抗体,应用免疫组化方法检测CD105和Flk1在27例CA组织和17例正常包皮组织中的表达.结果:CD105在血管内皮细胞膜上表达,CA组织中CD105标记的血管数比正常包皮组织明显增多,有显著差异(t=10.601,P＜0.001);Flk1在CA组织的角质细胞胞浆和血管内皮细胞膜上均有表达,而正常包皮组织中仅在角质细胞胞浆呈弱表达,差别也有显著意义.结论:CD105和Flk1在CA组织中有过度的表达,可能与血管生成有关.
