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大肠杆菌变种的两种分子生物学检测方法分析
目的:对大肠杆菌的一种重要的变种--肠出血性大肠杆菌O157-H7的几种检测方法进行比较研究.方法:以自动免疫磁珠收集系统(AIMS)、自动酶标免疫测试系统(VIDAS)与传统常规的分离方法进行对比分析.结果:运用自动免疫磁珠收集系统(AIMS)方法对80份可能含有肠出血性大肠杆菌O157-H7的实样进行检测,检出份数为6份,检出率为7.5％,而且在一周之内可以全部对上述检出实样进行鉴定.AIMS法能够检出浓度在10cfu/mL模拟实样之中的肠出血性大肠杆菌O157-H7,然后将此法与CHROMagar 0157琼脂板相结合,其效果则更为明显.而自动酶标免疫测试系统(VIDAS)与传统与的分离方法则检测的效果不佳,检出率为0.自动免疫磁珠收集系统(AIMS)检测方法与自动酶标免疫测试系统(VIDAS)、传统与的分离方法在检出率方面存在显著的统计学差异,P＜0.01.结论:运用自动免疫磁珠收集系统(AIMS)结合CHROMagar 0157琼脂板对出血性大肠杆菌O157-H7进行检测,检出率较高、灵敏度较高且快速便捷,可以用于O157-H7外环境检测与食品污染源的实际调查之中,应该对其加以广泛地推广并应用.
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肠出血性大肠杆菌O157:H7多重PCR快速检测研究
[目的]建立能快速、特异检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的多重PCR技术. [方法]选用针对大肠杆菌O157志贺样毒素1、2(sh1/sh2)基因、溶血素(hlyA)基因、和0157特异性基因(rfbE)的4对引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了猪肉模拟样品检测. [结果]该方法扩增目的基因片段分别为348,584,250 bp和497 bp,特异性和灵敏度均高.细菌纯培养物的检测灵敏度为103cfu/ml,猪肉模拟样品37℃预增菌4 h后检测灵敏度能达到100cfu/ml. [结论]初步建立了快速、灵敏、特异地测定肠出血性大肠杆菌EHEC O157:H7的多重pCR检测技术.
关键词： 多重PCR 肠出血性大肠杆菌O157-H7 毒力基因 rfbE基因
