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35-37kDa形式可溶性MHCⅠ释放机制研究
目的:探讨35-37 kDa形式的可溶性MHCⅠ释放机制,为开展造血系统恶性肿瘤免疫干预治疗研究奠定理论基础.方法:以细胞表面标记、免疫沉淀、免疫印迹和增强化学发光法探讨EGTA和蔗糖对THP1细胞释放43和35-37 kDa可溶性MHC Ⅰ的影响;以超速离心法纯化外排小体,并用免疫沉淀、免疫印迹和增强化学发光法检测43和35-37 kDa可溶性MHC Ⅰ;用Quantity One软件对43和35-37 kDa可溶性MHC Ⅰ进行相对定量分析.结果:EGTA同时显著抑制43和35-37 kDa可溶性MHC Ⅰ产生;蔗糖同时显著促进43和35-37 kDa可溶性MHC Ⅰ产生;43 kDa可溶性MHC Ⅰ存在于外排小体上,而35-37 kDa可溶性MHC Ⅰ在外排小体上检测不到.结论:35-37 kDa可溶性MHCⅠ与外排小体都来源于细胞内多泡小体同质膜的溶合后释放,但35-37 kDa可溶性MHCⅠ并不包含在外排小体的泡囊中,而是独立于外排小体释放.
关键词： 主要组织相容性复合体Ⅰ 金属蛋白酶 外排小体 多泡小体 -
肿瘤exosome诱导的细胞毒性T细胞的特异性杀伤作用
目的:检测癌细胞来源的外排小体exosome在体外刺激细胞毒性T细胞(CTL)特异性杀伤癌细胞的能力.方法:从外周静脉血中分离和培养树突细胞(DC),分离纯化舌鳞癌Tca-8113细胞培养上清液中的exosome,并将exosome负载至DC上,诱导T淋巴细胞活化为细胞毒性T细胞(CTL),把CTL加入到靶细胞(Tca-8113和95-D)培养体系中,18 h后利用MTT比色法测定CTL对靶细胞的杀伤活性.结果:从外周静脉血中分离的单核细胞,经粒细胞-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)的培养可分化为DC,经exosome冲击后,诱导的CTL对Tca-8113细胞具有显著的杀伤作用,在效靶比为20:1时,18 h平均杀伤率为(43.60±5.66)%(P＜0.01),但对95-D细胞无明显杀伤作用,杀伤率为(29.7±8.78)%(P＞0.05).结论:肿瘤细胞分泌的exosome,负载到DC上后,可以活化T细胞,使之成为抗原特异性的CTL,并具有特异性的杀伤肿瘤细胞的功能.
