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抗IFITM1单克隆抗体的制备及检测
目的:制备抗干扰素诱导的跨膜蛋白-1 (interferon-induced transmembrane protein 1,IFITM1)的单克隆抗体,为检测IFITM1及进一步研究其在结肠肿瘤发生过程中的作用提供实验基础.方法:以结肠癌患者的癌组织为材料,提取总RNA,以RT-PCR扩增得到IFITM1 cDNA序列,经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后,克隆入pGEX-4T-3进行原核表达并纯化得IFITM1-GST;以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,淋巴细胞杂交瘤法制备单克隆抗体;采用ELISA、Western-blot及免疫组织化学法以制备的抗体检测结肠癌患者结肠癌组织中的IFITM1.结果:成功构建了IFITM1原核表达载体,获得了IFITM1-GST重组蛋白;制备得到了1株抗IFITM1单克隆抗体,腹水ELISA效价为1∶30000,抗体亚类为IgG1,可用于ELISA、Western-blot及免疫组织化学法检测结肠癌患者结肠癌组织中的IFITM1.结论:获得了1株可用于ELISA、Western-blot及免疫组织化学法的抗IFITM1单克隆抗体2F-1,为进一步研究IFITM1在结肠肿瘤发生过程中的作用提供了实验基础.
关键词： 干扰素诱导的跨膜蛋白-1 结肠癌 单克隆抗体 -
干扰素诱导的跨膜蛋白-1对诊断结直肠癌的临床价值
目的 探讨干扰素诱异的跨膜蛋白-1(IFITM1)基因在肿瘤组织中的表达,血清抗IFITM1的抗体反应以及对临床诊断结直肠癌的意义.方法 应用半定量RT-PCR方法检测IFITMl基因mRNA在正常大肠粘膜、结直肠癌组织、大肠炎性息肉、腺瘤性息肉、胃癌、食管癌和肝癌组织中的表达.采用Western印迹法检测患者血清抗IFITM1的抗体反应.分析有IFITM1基因表达癌肿的病理特点.结果 结直肠癌组织中IFITM1基因mRNA表达率为47.4%(18/38),显著高于大肠腺瘤性息肉的15%(3/20)和胃癌组织的4.8%(1/21)(P<0.05),而正常大肠粘膜、大肠炎性息肉、食管癌和肝癌组织均无表达.结直肠癌组织IFITM1基因mRNA呈强表达,其表达水平(0.8048+0.2273)显著高于大肠腺瘤性息肉(0.4447±0.0989)(P<0.001).结直肠癌血清相应的抗体反应率为36.8%(14/38),明高于胃癌的9.5%(2/21)(P<0.05),而在食管癌、肝癌、大肠炎性息肉和大肠腺瘤性息肉以及健康人血清则末检测出相应的抗体反应.有IFITM1基因表达的结直肠癌多数直径大于5 cm,侵及浆膜,有淋巴结和远处转移,多属Dukes C期和D期,以高分化腺癌为主.结论 IFITM1基因可能在结直肠癌的发生、发展和转移过程中起重要作用,有望成为临床诊断结直肠癌的一个良好标志物.
关键词： 结直肠癌 干扰素诱导的跨膜蛋白-1 基因表达 抗体反应
