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阻断Notch信号的角质形成细胞对成纤维细胞胶原合成的影响
目的:本课题组前期工作已经证明阻断Notch信号对角质形成细胞的分泌功能有所影响,使其分泌的多种促纤维化因子发生改变.本实验将探讨在复合培养的条件下,通过调节角质形成细胞中的Notch信号,了解其对成纤维细胞collagen-1合成的影响.方法:运用角质形成细胞-成纤维细胞复合培养的模型,于复合培养前3天进行血清刺激或者γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断角质形成细胞中的Notch信号,即在角质形成细胞分化前进行干预.然后提升至气液交界面使其达到复层生长和终末分化,后与成纤维细胞共培养,观察阻断Notch信号后的角质形成细胞对成纤维细胞合成collagen-1的影响.结果:在分化前,给予角质形成细胞血清刺激,在复合培养0小时,Notch-1、Jagged-1表达明显升高(P＜0.05),在复合培养第一天,p21表达上调、p63表达下降(P＜0.05),表明在复合培养时,角质形成细胞中的Notch信号明显活化.通过在血清刺激前给予DAPT预处理,在复合培养0小时,角质形成细胞中Notch信号下游分子p21和p63的表达恢复至无血清刺激水平(P＜0.05),表明DAPT组确实阻断了角质形成细胞中的Notch信号.而DAPT组的成纤维细胞collagen-1的表达相对于血清刺激组明显下降,而与无血清组无明显差异,表明阻断Notch信号后的角质形成细胞在复合培养条件下,确实能够抑制成纤维细胞collagen-1的表达,使其合成collagen-1的量恢复至无血清刺激水平.结论:DAPT能够阻断Notch信号的活化,用阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,能够明显抑制成纤维细胞合成Ⅰ型胶原的能力,从而抑制瘢痕的增生.
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阻断Notch信号的角质形成细胞对成纤维细胞增殖及分泌功能的影响研究
目的:探讨在复合培养的条件下,将阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,对成纤维细胞增殖及表达角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)、TGF-β1的影响.方法:运用角质形成细胞-成纤维细胞复合培养的模型,于复合培养前3d进行血清刺激或者γ-分泌酶抑制剂(DAPT)阻断角质形成细胞中的Notch信号,即在角质形成细胞分化前进行干预.然后提升至气液交界面使其达到复层生长和终末分化,后与成纤维细胞共培养,观察阻断Notch信号后的角质形成细胞对成纤维细胞增殖及分泌功能的影响.结果:分化前,给予角质形成细胞血清刺激,复合培养0h,Notch-1、Jagged-1表达明显升高(P<0.05);复合培养第1天,P21表达上调、P63表达下降(P<0.05).血清刺激前给予DAPT预处理,复合培养0h,角质形成细胞中Notch信号下游分子P21和P63的表达恢复至无血清刺激水平(P<0.05).DAPT组的成纤维细胞增殖能力、KGF及TGF-β1的表达相对于血清刺激组明显被抑制(P<0.05),而与无血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,能够明显抑制成纤维细胞的增殖及KGF、TGF-β1的合成.
