首页 > 文献资料
-
抗GPNMB单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立
目的:制备抗GPNMB单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA检测GPNMB在胶质母细胞瘤中的表达情况.方法:以新鲜胶质母细胞瘤组织为材料,提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到GPNMB cDNA序列,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆入PET-28a(+)进行原核表达,经蛋白纯化得GPNMB-6× His融合蛋白；以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,淋巴细胞杂交瘤法制备单克隆抗体；采用Western-blot、双抗体夹心ELISA以制备所得的抗GPNMB抗体检测胶质母细胞瘤细胞系U251、U373、SHG44和星形胶质细胞系SVG12中GPNMB的表达.结果:成功构建了GPNMB原核表达载体,获得了GPNMB-6×His重组蛋白；制备得到了G203、F105和M306共3株抗GPNMB的单克隆抗体,腹水ELISA效价分别为1∶8000、1∶8000、1∶5000,抗体亚类分别为IgG2、IgG1和IgG1,进一步实验证实单克隆抗体G203和M306可用于双抗体夹心ELISA检测不同胶质细胞瘤细胞系中GPNMB的表达.结论:成功制备出抗GPNMB单克隆抗体,效价及特异性良好,并证实GPNMB在胶质母细胞瘤细胞系中高表达,为进一步研究GPNMB在胶质母细胞瘤中的作用奠定了基础.
-
非转移性黑色素瘤糖蛋白B对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭影响的研究
目的：研究非转移性黑色素瘤糖蛋白B( glycoprotein ( transmembrane) nonmetastatic melanoma protein b,GPNMB)对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用RT-PCR及Western blot法检测口腔鳞癌组织、口腔鳞癌细胞中GPNMB的表达变化；构建GPNMB-siRNA载体,转染细胞后分别采用MTT法、Transwell小室法观察其对Tca-8113细胞增殖、侵袭的影响。结果 GPNMB在口腔鳞癌组织及口腔鳞癌细胞中均呈现高表达；增殖实验结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113增殖；细胞侵袭结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113侵袭。结论 GPNMB在口腔鳞癌细胞的增殖和侵袭中起着重要作用。
关键词： 非转移性黑色素瘤糖蛋白B 口腔鳞癌细胞 增殖 侵袭 -
UVB对人视网膜色素上皮细胞GPNMB表达的影响
目的 研究中波紫外(UVB)对RPE细胞GPNMB表达的影响.方法 采用MTT法检测UVB对RPE细胞存活率的影响;实时定量PCR和蛋白印迹法检测UVB对RPE细胞中GPNMB表达的影响.结果 MTT实验表明,经过100μW/cm2光强的UVB辐射处理2h后,RPE细胞会产生明显的影响,其凋亡细胞数目显著增多.RT-PCR、Western blot结果表明,经UVB照射后,RPE细胞中GPNMB的表达显著上升.结论 UVB辐射可抑制RPE细胞的存活率,促进RPE细胞中GPNMB的表达.
关键词： 中波紫外 非转移性黑色素瘤糖蛋白B 视网膜色素上皮细胞 -
非转移性黑色素瘤糖蛋白B在增生性玻璃体视网膜病变及视网膜色素上皮细胞中的作用
目的 研究非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)及视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中的作用.方法 首先,采用免疫荧光法对18例PVR患者行玻璃体切除术时切除的视网膜进行定量分析;酶联免疫吸附试验检测PVR患者血清中GPN-MB的含量;然后,以人RPE细胞为研究对象,构建GPNMB的siRNA以及过表达载体,转染入细胞后采用MTT法和流式细胞仪观察其对RPE细胞增殖、细胞周期的影响.结果 免疫荧光实验表明,随着PVR增生膜病变程度的加重,其GPNMB的荧光强度加强,A、B、C级PVR的增生膜中GPNMB阳性荧光总量分别为5.07、11.21、19.34;酶联免疫吸附试验结果显示,PVR患者血清中GPNMB的含量远高于对照组;细胞增殖实验结果表明,GPNMB过表达可以显著促进RPE细胞的增殖,其OD值是对照组的3.7倍;然后以GPNMB过表达的人RPE细胞为研究对象,结果表明GPNMB-siRNA转染组可以显著抑制RPE细胞的增殖;流式细胞仪检测发现GPNMB对RPE细胞周期有显著影响.结论 GPNMB作为RPE细胞中的一个关键分子,通过细胞周期调控途径影响其增殖,为进一步研究GPNMB在PVR中的作用及机制奠定了基础.
-
非转移性黑色素瘤糖蛋白B在急性肾缺血再灌注损伤中的表达及与巨噬细胞表型的关系
目的 观察非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,Gpnmb)在急性肾缺血再灌注损伤(IRI)肾脏和尿液中的表达,分析其与M1、M2表型巨噬细胞的相关性,探讨其在IRI免疫炎性反应损伤中的作用.方法 C57BL/6J小鼠被随机分为3组:正常对照组(n=4)、假手术组(n=4)、IRI组(n=12).以双侧肾蒂血管阻断30min建立IRI模型.PAS染色观察肾脏病理改变；免疫荧光双染色及流式细胞术检测Gpnmb和巨噬细胞标志物F4/80蛋白的表达及分布；实时荧光定量PCR检测Gpnmb及M1型巨噬细胞表型(CD40、CCR7)及M2型巨噬细胞表型(CD163、MMR)在肾脏中的mRNA表达；Western印迹和ELISA法检测小鼠尿液中Gpnmb的表达.结果 IRI小鼠肾脏肾小管上皮细胞脱落,肾间质内可见大量炎性细胞浸润.实时荧光定量PCR结果显示,与正常对照组、假手术组比较,IRI组小鼠肾脏Gpnmb mRNA于造模后第1天和第2天升高,差异有统计学意义(P＜ 0.01),第3天下降至接近正常水平.免疫荧光双染色及流式细胞术检测结果均显示Gpnmb蛋白主要表达在F4/80阳性的巨噬细胞内.Gpnmb mRNA表达与M1型巨噬细胞表型(CD40、CCR7)的mRNA表达无相关性,与M2型巨噬细胞表型(CD163、MMR)的mRNA表达呈正相关.Western印迹和ELISA结果示IRI组小鼠在造模后第1天尿液中的Gpnmb表达显著升高,与正常对照组和假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.01),第3天降至接近正常水平.结论 Gpnmb在IRI肾脏的巨噬细胞和尿液中呈高表达,并与M2型巨噬细胞相关,提示Gpnmb可能参与了巨噬细胞的分型和急性肾损伤的炎性反应过程,临床上也可用作AKI早期诊断的生物学标志物.
关键词： 缺血再灌注 急性肾损伤 巨噬细胞 非转移性黑色素瘤糖蛋白B -
三阴性乳腺癌转化医学药物领域研究进展
三阴性乳腺癌内脏转移率和脑转移率较高,一旦被确诊,患者的存活率极低.根据分子标记和遗传变异,三阴性乳腺癌可分为多种类型.目前已有较多的转化医学领域药物开始在临床上应用.该文主要对抗表观遗传药物、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶抑制剂药物、非转移性黑色素瘤糖蛋白B抗体药物、Src蛋白激酶抑制剂药物、抗雄激素药物、抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路药物和铂类化疗药物进行综述.虽然目前三阴乳腺癌的临床化学疗法和其他HER2类型的乳腺癌治疗方法一样,但是相信在不久的将来随着转化医学药物的研发,二者的治疗方案将会明显不同.
-
非转移性黑色素瘤糖蛋白B在不同类型肿瘤中的作用
恶性肿瘤是危害人类健康的重大疾病之一,虽然目前临床上有多种治疗手段,如手术、化疗、放疗等,但其发病率和病死率仍然居高不下.近年来,一种新型疗法——肿瘤分子靶向治疗因其具有疗效高、副作用低的特点而备受瞩目.肿瘤分子靶向治疗是利用特异性的分子封闭或抑制相关分子靶点,从而抑制肿瘤细胞的生长、转移或诱导其凋亡.因而各种新型分子靶向治疗的药物成为近年来肿瘤研究的热点,在临床上也逐步成为肿瘤治疗的重要方法之一.非转移性黑色素瘤糖蛋白B (glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B,GPNMB)是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,研究证实其在多种肿瘤组织中表达,并且与肿瘤浸润和转移有关.Glembatumumab vedotin,又称CR011-vcMMAE,是一种单克隆抗体药物,用于治疗有GPNMB表达的肿瘤细胞的靶向治疗.多项临床研究认为CR011-vcMMAE治疗骨肉瘤、葡萄膜黑色素瘤、乳腺癌、胰腺导管腺癌等肿瘤有效.因此,CR011-vcMMAE有望成为肿瘤免疫治疗的一个靶向药物.本文就GPNMB的结构、功能及其在肿瘤的诊断和治疗中的作用作一综述.
关键词： 非转移性黑色素瘤糖蛋白B 肿瘤 基因治疗 -
黑素细胞中GPNMB与Tyr相互作用的探讨
目的:探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein (transmembrane) nonmetastatic melanoma protein b,GPNMB)与酪氨酸酶(tyrosinase)的相互作用.方法:以黑素细胞系PIG1为研究对象,分别构建GPNMB和Tyr的siRNA以及过表达载体,转染入细胞后采用实时定量RT-PCR、Western blot检测GPNMB表达下调和上调对Tyr的影响,以及Tyr表达下调和上调对GPNMB的影响；采用免疫共沉淀法检测它们之间的直接相互作用.结果:GPNMB表达下调和上调对Tyr有影响,而Tyr表达下调和上调对GPNMB几乎没有影响.结论:黑素细胞中GPNMB与Tyr之间不存在直接相互作用,为进一步研究GPNMB在黑素小体形成中的作用机制奠定了基础.
关键词： 黑素小体 黑素细胞 非转移性黑色素瘤糖蛋白B 酪氨酸酶
