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多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗诱导BALB/c小鼠T淋巴细胞亚群变化的研究
目的 探讨多房棘球绦虫(Em)重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化.方法 用重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种以及口服接种免疫BALB/c小鼠,双歧杆菌(Bb)液和磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,12周后,用50个Em原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染18周剖杀小鼠,检获泡球蚴组织,称取重量,计算减蚴率;分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比.结果 疫苗免疫组(皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种、口服接种)小鼠检获泡球蚴重量[(0.77±0.52)、(0.87±0.60)、(2.17±0.50)、(3.06±0.15)g]均明显低于PBS对照组[(3.54±0.32)g,P＜0.05或＜0.01].疫苗免疫组(皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种、口服接种)小鼠脾CD4+T细胞亚群[(28.2±2.5)％、(25.0±2.7)％、(24.0±1.3)％、(23.0±1.8)％]显著高于PBS对照组[(16.1±2.2)％,P均＜0.01];各疫苗免疫组小鼠CD8+T细胞亚群水平均轻微升高,但组间比较差异无统计学意义(F=1.36,P＞0.05).皮下注射组小鼠CD4+T细胞亚群高于肌肉注射组、鼻腔黏膜接种组和口服接种组(P均＜ 0.05).结论 CD4+T细胞亚群在Em重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用,疫苗皮下注射是一种较好的免疫途径.
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多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响
目的 检测多房棘球绦虫重组双歧杆菌(Bb)-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响.方法 用重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔粘膜接种以及口服接种免疫BALB/c小鼠12周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,检获泡球蚴组织,称取重量,计算减蚴率;分离脾细胞,用ConA刺激培养16～18h,然后用流式细胞仪检测脾细胞凋亡.结果 疫苗免疫组小鼠检获泡球蚴质量均明显低于PBS对照组;小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于PBS对照组(P<0.05或P<0.01),每个ConA刺激组脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液组(P<0.05或P<0.01),皮下注射组脾细胞凋亡发生率低.结论 多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗可抑制感染小鼠脾细胞发生凋亡,增加CD+4T细胞亚群的数量,诱导宿主产生一定的保护力,对抗Em原头节攻击.
关键词： 多房棘球绦虫 重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗 脾细胞 凋亡 -
多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗的构建及鉴定
目的 构建和鉴定多房棘球绦虫(Em)重组双歧杆菌(Bb)-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗.方法 通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3;用电穿孔法将该质粒导入Bb,构建多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗.结果 PCR成功扩增出2 554bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;双酶切证实EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗构建成功.结论 成功构建了多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗,为该疫苗的开发和利用打下了坚实的实验基础.
关键词： 多房棘球绦虫 重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗 构建 鉴定 -
多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗诱导小鼠细胞因子变化的研究
目的:研究多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠细胞因子变化的影响.方法:将重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种和口服接种免疫BALB/c小鼠12周后, 用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击, 攻击感染后18周剖杀小鼠, 取脾脏制备淋巴细胞悬液体外培养, 分别以多房棘球绦虫抗原(EmAg)、 刀豆素A(ConA)刺激诱生白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ);以脂多糖(LPS)刺激诱生肿瘤坏死因子α(TNF-α).常规ELISA测定脾细胞培养上清液中IL-12、 IL-10、 IFN-γ和TNF-α水平.结果:与对照组相比,疫苗免疫组IFN-γ、 IL-12、 TNF-α水平增加, IL-10水平降低, EmAg刺激组和ConA或LPS刺激组细胞因子水平明显高于相应的原液组.结论:多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗可诱导攻击感染小鼠产生Th1型细胞免疫应答, 增强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应.
