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日本血吸虫酚氧化酶的电泳及酶活性的研究
目的观察日本血吸虫成虫酚氧化酶(phenol oxidase,PO)的酶谱及其活性.方法将42 d活成虫置含0.05%戊巴比妥钠的RPMIl640培养基中23℃孵育8 h后,分别收集雌、雄成虫,匀浆、超声粉碎、高速离心取上清(含PO),再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及酶染色后分析其酶谱;同时在紫外分光光度计下检测前后2个时点的A488值(A1,A2),PO活性相对值=(A2-A1)/(min@mg样品蛋白),其活性值用每分钟每毫克蛋白A48s变化值表示.设立酚酶抑制剂(丙烯基硫脲)组,在该组成虫匀浆上清中预先加入丙烯基硫脲以观察其对酚氧化酶活性的抑制效果.结果雌虫及雄虫均表现为迁移率相同的一条主带;但雄虫的酶带显色反应比雌虫弱.日本血吸虫雌虫及雄虫的酚氧化酶相对活性分别为0.165 min-1@mg-1和0.080 5 min-1@mg-1;加入酚酶抑制剂后,酶活性被明显抑制.终浓度为5 mmol的丙烯基硫脲对成虫酚酶活性的抑制率为85.03%.当丙烯基硫脲终浓度达25 mmol时,酚酶活性被完全抑制.结论不仅雌性成虫含有日本血吸虫酚氧化酶,而且雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同.雄性成虫含有的少量酚氧化酶的生理意义有待于进一步研究.
